引进菌株Bionectria ochroleuca对几种植物病原菌的拮抗效应

为挖掘对植物病害防治有效的生防菌株,研究了引进菌株Bionectria ochroleuca对几种植物病原真菌的拮抗效应,旨在对其推广应用奠定理论基础。引进菌株B. ochroleuca对植物病原真菌Alternaria solani、Botrytis cimerca、Fusarium oxysporum.sp cucumebrium Owen、Fusarium graminearum Sch1. f. sp vasinfectum (Atk.) Snyd&Hans.、Colletotrichum capsici、Fusrium moniliforme、Fusarium graminearum、Cercosporidium sofinum均有不同程度的抑制作用,平均抑菌带宽度在3.5~14.4mm范围内,且其发酵产物对病原菌菌丝的生长及孢子的萌发也具有很好的抑制效果,表明B. ochroleuca菌株能够分泌胞外抑菌物质。B. ochroleuca菌株发酵产物对不同病原真菌的抑制结果具有显著差异,特别是对F. oxysporum.sp cucumebrium Owen抑制效果最好,菌丝生长抑制率高达73.3%,孢子萌发相对抑制率高达78.2%,并使萌发孢子的芽管发生畸变。B. ochroleuca发酵产物能够显著降低病原真菌菌丝内的SOD、CAT保护酶活性(P<0.05),处理21h时,F. oxysporum.sp cucumebrium菌丝体内的SOD酶活仅是对照处理的28.8%,CAT酶活是其对照处理的34.8%。引进菌株B. ochroleuca作为植物病原真菌的生防菌株具有一定的应用潜力。     

番茄灰霉病拮抗细菌的筛选

采集番茄土壤、根、叶片和花样本共96份,经平板法和叶盘法两步分离,获得对番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.）有抑制作用的拮抗细菌12株。根据抑菌圈法测定,拮抗细菌对灰霉菌的拮抗能力有显著差异,其中B21菌株抑菌圈直径达35mm,拮抗性最强最稳定。温室试验表明：B21悬浮液和10倍稀释液对番茄灰霉病有较好的防治效果,室内叶片的防效分别为98.68%和98.03%,无显著差异,明显优于45%多菌灵（500倍稀释液）。     

海洋放线菌对几种蔬菜病原菌抗菌作用的测定

从连云港海域采集海水、海泥、漂浮物、海洋动物及海洋植物样品,分离得到62株海洋放线菌.采用平板对峙培养法和打孔法测定放线菌不同菌株及其发酵液对9种蔬菜病原真菌的菌丝生长和孢子萌发以及对番茄青枯病菌的抑制作用.结果表明,放线菌菌株BM_2、T-15、T-1-1、D-3、XS-X5-3、M-7和X-7对供试的番茄早疫病菌(Alternaria sola-ni)、茄腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、芹菜斑枯病菌(Septoria apii)、番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.lycopersici)、番茄叶霉病菌(Fulvia fulva)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、油菜菌核病菌(Scleroti-na sclerotiorum)、辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsi-ci)、茄子黄萎病菌(Verticillium dahliae)和番茄青枯病菌(Ralstonia solanacarum)具有明显的抑制作用,同时海洋放线菌的发酵液对番茄早疫病菌分生孢子的萌发具有较强的抑制作用.其中BM-2菌株的抑菌作用最强.     

放线菌Ⅲ-61和A-21对蔬菜枯萎病和灰霉病的控制作用

为了明确拈抗性放线菌Ⅲ-61和A-21在植物病害生物防治中的实用价值,并为其后续的生防制剂的研发提供科学依据,对其在蔬菜枯萎病和灰霉病上的抗病活性进行了研究。其活菌体的抑菌活性检测采用平板对峙法;菌体代谢物的活性测定利用摇瓶发酵后经微孔滤膜过滤制备无菌发酵液,然后用滤纸片扩散法测定抑菌圈,用生长速率法测定对菌落扩展的抑制,用稀释药液凹玻片静置培养法测定对孢子萌发的抑制;温室防病试验采用盆栽接种法。结果显示,两菌株的平板菌落对黄瓜枯萎病菌和番茄灰霉病菌的抑菌带宽达17．5—20．9mm;27℃,120r／min摇瓶培养6d的发酵液抑菌效果最好。其稀释倍数≤5的无菌滤液处理后经120h对病原菌菌丝生长的抑制率仍达76．5％-100％。对分生孢子萌发的抑制率为100％;100倍稀释液对孢子萌发后的芽管具有致畸作用,使其顶端膨大或呈粗栉齿状而不再继续伸长;平板对峙培养中受抑病原菌菌落边缘的菌丝细胞壁崩解,原生质体外泄,表现出溶菌现象;其4倍稀释液对黄瓜枯萎病的温室盆栽防效分别为65．15％和60．61％,对番茄和辣椒灰霉病的防效为62．49％-89．76％。此研究结果表明这2个菌株具有很好的开发应用前景。     

除虫菊内生拟盘多毛孢Y1菌株发酵产物抑菌活性初步研究

摘　要:在对从除虫菊中分离到的内生真菌进行抑菌活性系统筛选的基础上,对其中活性较高的Y1 （Pestalotiopsis sp.）菌株进行了抑菌活性测定。其发酵液10倍稀释液和菌丝丙酮提取物对玉米大斑病菌 Exserohilum turcicum等 6种供试植物病原真菌菌丝生长的抑制率分别在85. 2%～95.1%之间和40%～80%之间,其 5倍稀释液对番茄灰霉病菌 Botrytis cinerea和苹果炭疽病菌 Glomerella cingulata孢子萌发的抑制率均大于 82%。活体生测结果表明,该发酵液对番茄灰霉病,辣椒疫霉病和黄瓜霜霉病的保护效果大于 55%,治疗效果不明显。     

甘草内生菌Z4菌株对灰霉病菌的作用机制初探

为探究甘草内生菌Z4 菌株的发酵上清液对灰霉病菌的抑菌机制,采用抑制菌丝生长速率法及抑制孢子萌发法,结合扫描电镜和透射电镜,观察Z4 菌株发酵上清液处理前后灰霉病菌菌丝形态结构的变化情况。采用盆栽试验测试活性物质在活体黄瓜内的传导性。通过扫描电镜、透射电镜及光镜观察发现,Z4 菌株的发酵上清液使番茄灰霉病菌菌丝扭曲变形、表面皱缩、部分菌丝断裂;细胞壁溶解破裂,细胞内液泡出现空腔;孢子萌发率低及芽管生长缓慢。盆栽黄瓜灌根和涂叶处理前后,黄瓜的病指分别由82.3 降至28.05 以及83.11 降至30.60,防治效果分别为63.12%和60.28%。表明Z4 菌株发酵上清液对灰霉病菌菌丝细胞的细胞壁具有破坏作用,且活性物质在活体黄瓜内有一定传导性。     

生防菌A4的鉴定及其对樱桃番茄采后主要病害的抑制作用

依据形态学、分子生物学以及菌株的生理生化特征对菌株A4进行鉴定,并研究其对樱桃番茄采后病害的防治效果。结果表明：菌株A4为生防菌贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）,其对樱桃番茄采后的重要致病菌灰霉菌（Botrytis cinerea）和扩展青霉菌（Penicillium expansum）均有抑制作用;平板对峙试验表明,贝莱斯芽孢杆菌A4对上述2种病原菌生长的抑制率分别高达66.56%和59.19%,预先接种浓度为1.0×109 CFU/mL A4菌悬液的樱桃番茄患病率分别降至14.67%和4.00%;扫描电镜显示,生防菌A4通过抑制病原菌的萌发和生长,降低病原菌的致病能力,减少病害的发生。本研究为生防菌贝莱斯芽孢杆菌的鉴定提供了参考,并为提高樱桃番茄采后病害的防治技术提供了新思路。     

除虫菊内生镰孢菌Y2菌株对植物病原菌的抑制作用及其生物学特性

从除虫菊叶中分离到1株内生镰孢菌。该菌发酵液的10倍稀释液对苹果炭疽病菌(Glomerella cingulata)、番茄灰霉病菌(Botrytis cirerea)、玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum)等6种病原真菌的抑制作用在80.4％～93.3％之间,其5倍稀释液对番茄灰霉病菌、玉米大斑病菌、苹果炭疽病菌的孢子萌发抑制率在65.6～81.3％之间。环境和营养因子对该菌的生长繁殖和抑菌活性影响较大: 1.在4～40 ℃时,菌丝能生长并形成孢子,最适生长繁殖温度为30℃,孢子的致死温度为60℃;2.在pH 4.0～9.5 时,菌丝生长、孢子形成和萌发均良好,最适pH 值为5.5 ;3.氮源以有机态氮为佳;4.分别以D-木糖,山梨糖,甘露醇为碳源,以硝酸钠,甘氨酸,硫酸铵,牛肉膏,蛋白胨为氮源培养时,该菌株发酵液抑菌活性较高。     

酥梨采后灰霉病生防菌株的鉴定及抑菌作用

以微生物拮抗病原菌是防治病害安全高效的可行手段。通过对果实表面微生物进行筛选鉴定,以期得到一株可以有效抑制灰霉病的生物防治菌株。对拮抗菌株H-1进行形态学特征、生理生化特性分析,结合16S rDNA序列分析和gyrB 基因序列分析构建系统发育树;采用平板对峙法结合果实伤口试验考察拮抗菌H-1在体外及梨果表面的抑菌作用。结果表明：经鉴定H-I菌株为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）;B. velezensis H-1在体外条件下可显著抑制灰葡萄孢霉（Botrytis cinerea）、细极链格孢（Alternaria tenuissima）和串珠镰孢菌（Fusarium verticillioides）的菌丝生长,其中对灰葡萄孢霉菌丝的抑制作用最强;果实伤口试验表明,1×1011 CFU/mL的B. velezensis H-1可完全抑制梨果表面灰霉菌生长。由此可见,B. velezensis H-1可以有效抑制梨果采后灰霉病的发生。     

丙烷脒防治番茄灰霉病效果初报

采用室内毒力测定和田间药效试验方法,对丙烷脒防治番茄灰霉病（Botrytis cirerea）进行了研究。丙烷脒对灰霉病菌菌丝生长和孢子萌发的EC50分别为2.1599 mg/L和2.7510 mg/L;在组织法测定中,丙烷脒对灰霉病表现出较高的保护和治疗作用;田间药效试验表明,丙烷脒在施用剂量为(a.i.) 90~180g/hm2、施药4次、间隔7d的条件下对番茄、黄瓜、草莓等作物的灰霉病有良好的防治效果,防效优于对照药剂嘧霉胺和腐霉利,与菌核净的防效相当。     

番茄产后灰霉病的病原鉴定及生物防治

为探索生物防治番茄产后灰霉病,采用柯赫氏法则从罹病的番茄果实上分离得到菌株FQ-2,基于形态学和rDNA-ITS序列,对该菌株进行病原鉴定,采用小麦内生菌解淀粉芽孢杆菌 B9601-Y2(Y2)和球花石斛内生菌贝莱斯芽孢杆菌DJB5(DJB5)对番茄灰霉病进行生物防治。FQ-2被鉴定为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea),且Y2和DJB5对番茄产后果实灰霉病均有较好的预防和治疗效果,Y2 1×10⁷ cfu/mL和DJB5 1×10⁸ cfu/mL悬浮剂在处理当天接种FQ-2,10天后的防效分别达88.10%和73.47%。在接种灰霉病菌当天再接种1×10⁸cfu/mL的Y2和1×10⁷ cfu/mL的DJB5,10天后灰霉病的防治效果分别达68.56%和78.74%。研究结果对番茄产后灰霉病的生物防治具有参考作用。     

长枝木霉TS-1的分离鉴定、拮抗作用及固体发酵条件初探

为筛选能有效抑制常见植物病害的生防真菌,从甘肃省景泰县马铃薯连作田植株根际土壤中分离获得一株木霉菌株TS-1。通过形态学特征和EF-1α序列分析,将其鉴定为长枝木霉Trichoderma longibrachiatum。采用对峙培养法测定TS-1对6种病原菌的抑制作用,并利用该菌株不同浓度的分生孢子悬浮液处理小麦种子,分析种子形态学指标的变化。以产孢量为指标,采用单因素实验进行发酵条件的初探。结果表明：长枝木霉菌株TS-1对茄病镰孢(Fusarium solani)、接骨木镰孢(F. sambucinum)和灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑菌率均在70%以上,抑菌效果较好。与对照相比,该菌株对小麦种子有一定的促生作用。通过对该菌株固体发酵条件初探,发现发酵培养基主要成分秸秆和麸皮的最佳配比为9:1、大麦添加量10%、碳氮源分别为乳糖和硫酸铵时产孢量最大。上述试验证明,长枝木霉TS-1具有较好的生防应用潜力,可进一步扩大培养。     

Effect of high-pressure hot water washing treatment on fruit quality, insects, and disease in apples and pears: Part II. Effect on postharvest decay of d’Anjou pear fruit

A hot water pressure process (HWP) was evaluated for its effect on conidia of Penicillium expansum and on development of blue mold, gray mold, and mucor rot of d’Anjou pear fruit. Spores were removed from the water system through dilution and also as a result of hot water in the system that was lethal to the spores. When the system was heated, viable spores were not detected after 2–4 h of operation. Reductions in decay in the HWP system were 36, 29, and 13% for Botrytis cinerea, Mucor piriformis, and P. expansum, respectively. The response of P. expansum appeared related to the length of time fruit was in cold storage. Heat injury was observed on fruit treated with 40 and 50 °C water but not on fruit at 30 °C nozzle temperature. The HWP system described in this study should be considered as a component of an integrated decay control strategy.     

江苏省域草莓灰霉病菌种群多药剂抗性检测

本研究旨在阐明江苏省草莓主产区草莓灰霉病菌种群对常用杀菌剂的敏感性。采用区分剂量法测定了2019和2020年采集的236株草莓灰霉病菌(Botrytis cinerea)对13种杀菌剂的抗性,并对菌株抗性频率和多药剂抗性进行了分析。结果表明：所有灰霉菌株对咯菌腈(fludioxonil,Flu)表现敏感,而对多菌灵(carbendazim,Car)、吡唑醚菌酯(pyraclostrobin,Pyra)、扑海因(iprodione,Ipr)、腐霉利(procymidone,Pro)、嘧霉胺(pyrimethanil,Pyr)产生了较高的抗药性,其抗性频率分别为58.05%、55.01%、51.44%、45.80%、33.94%;灰霉病菌种群在地区间对不同药剂的抗药性水平不同,溧水、昆山、姜堰、铜山田间以抗性菌株为优势种群,无锡和常州新北地区以敏感菌株为主;本研究在区分计量浓度下,根据各药剂抑菌率分布状况,将供试药剂分为敏感药剂、敏感性下降药剂和抗性药剂3种类型;本研究共检测到9种抗药性类型：Pyra^R(7.32%)、Car^R(6.50%)、Pyr^R(0.81%)、Car^R Pyr^R(3.25%)、Car^RPyra^R(14.63%)、Car^RBos^R(1.63%)、Car^RPyra^RPyr^R(23.58%)、Car^RBos^RPyra^R(7.31%)、Car^RBos^RPyra^RPyr^R(34.15%)。江苏省草莓灰霉病菌种群对多菌灵和吡唑醚菌酯基本丧失了敏感性,对扑海因、腐霉利、啶酰菌胺、戊唑醇等敏感性下降,多药剂抗药性种群以Car^RPyra^RPyr^R和Car^RBos^RPyra^R Pyr^R为主,抗性治理措施中推荐使用不同类型药剂交替防治灰霉病。     

天然酚类化合物与两种化学杀菌剂的联合抑菌活性研究

为探索天然酚类化合物百里香酚、和厚朴酚与化学合成杀菌剂百菌清、啶酰菌胺混配的增效作用,筛选出能够防治灰霉病的混剂,本研究将百里香酚、和厚朴酚分别与百菌清、啶酰菌胺以不同比例混配,采用菌丝生长速率法测定其对灰葡萄孢菌Botrytis cinerea的抑菌活性,并将Bliss法、Mansour法和孙云沛法结合,以优化筛选方案,评价混剂的联合毒力。实验结果表明:将Bliss法、Mansour法和孙云沛法结合使用能够有效降低筛选工作量,且准确率较高;百里香酚和百菌清以质量比5:1、2:3、1:5和1:10比例混配,和厚朴酚和百菌清以质量比10:1、5:1、3:2、2:3和1:10比例混配均表现出协同增效作用;和厚朴酚和百菌清以10:1比例混配时协同增效作用最明显,其CTC值为309.15,以1:10比例混配时抑菌活性最高,其对B. cinerea的EC₅₀为0.29 mg/L,高于杀菌剂百菌清。因此,将定性分析方法与定量分析方法结合使用是筛选杀菌剂混剂配方的合理方案,天然酚类化合物百里香酚、和厚朴酚与百菌清以合理比例混配所得混剂具有防治灰霉病的潜力。     

Metschnikowia pulcherrima strain MACH1 outcompetes Botrytis cinerea, Alternaria alternata and Penicillium expansum in apples through iron depletion

A new strain of Metschnikowia pulcherrima (MACH1) was studied for its efficacy as a biocontrol agent against Botrytis cinerea, Penicillium expansum and Alternaria alternata on apples stored for 8 months at 1 °C. The results of two semi-commercial trials demonstrated the efficacy of the biocontrol strain MACH1. In order to understand the mechanism of action involved, the yeast strain was investigated for its competitive ability for iron against postharvest pathogens of apple. M. pulcherrima strain MACH1 was cultivated on PDA with different concentrations of iron (supplemented as FeCl₃) against A. alternata and B. cinerea. The yeast strain MACH1 produced a wider pigmented inhibition zone against both pathogens in low iron amendments while less inhibition was measured with increased iron concentrations. At the coloured inhibition zone, B. cinerea and A. alternata conidia did not germinate and mycelial degeneration was observed. In addition, a high reduction in infection by both pathogens was recorded in apples treated with M. pulcherrima strain MACH1 supplemented with low iron amendments compared to higher iron concentrations. The same experiments were carried out in vivo and in vitro against P. expansum. M. pulcherrima strain MACH1 amended with low iron concentration (5 μg mL⁻¹ FeCl₃), showing modest lesion diameter reduction and no effect on P. expansum under increased iron and without iron amendments. This study illustrated that iron depletion by the yeast strain MACH1 under low iron conditions could reduce the growth of some postharvest pathogens in vitro and in vivo. Although, iron depletion seems to be a primary mode of action against the postharvest pathogens studied, other mechanisms of action cannot be excluded in the biocontrol employed by M. pulcherrima strain MACH1.     

芽孢杆菌R57对黄芪的防病提质作用及其鉴定

研究旨在探讨菌株R57对黄芪的抑菌防病和品质提升作用,并对其进行分类鉴定。采用牛津杯法测定无菌发酵液的体外抑菌效果、浸根法测定离体防病效果、灌根法测定盆栽防病效果;采用灌根法处理黄芪,HPLC-UV-ELSD法测定药效成分含量变化;采用形态学观察、生理生化特性测定和16S rDNA序列分析,确定菌株分类地位。体外抑菌试验结果表明,菌株R57无菌发酵液对根腐病菌F. solani和F. acuminatum的抑菌圈直径分别为(18.02±1.71) mm和(19.96±2.42) mm。离体试验中,R57治疗性处理对2种病菌引起的根腐病在7天和15天时均有显著防效,保护性处理对F. solani和F. acuminatum侵染分别在7天和15天时有明显防效,拮抗处理仅在7天时对F. solani侵染有抑制作用。盆栽试验中,R57发酵液对F. solani和F. acuminatum引起的根腐病,保护性防效分别为61.27%±4.89%和64.33%±8.25%,治疗性防效不显著。R57发酵液施用还可显著促进黄芪中主要活性成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷和芒柄花苷的积累。经鉴定,菌株R57为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌株具有“防病提质”的双重功效,可作为微生物制剂的多功能菌株进一步开发研究。     

土壤拮抗细菌的分离与筛选

为了获得高效广谱的原始拮抗细菌菌株用于油茶病害的防治,并探索其生物防治效果。从土样中分离到223株细菌,采用平板对峙培养法、发酵产物活性测定进行拮抗菌筛选。结果表明：以油茶炭疽病菌和根腐病菌为指示菌,通过平板对峙培养初步选出抑菌效果较好的菌株21株,其抑菌圈宽度在5.0~12.5 mm,占分离到的细菌总数的9.9%,其中菌株Z26抑菌效果最好;复筛表明21个菌株发酵液对供试6种植物病原菌有不同程度抑制作用,其中有8株对油茶炭疽病菌抑菌效果良好,有4株对油茶根腐病菌抑菌效果良好,其抑菌圈宽度≥10.0 mm,分别占被测菌的38.1%和19.0%,菌株Z26抑菌效果最好;发酵产物活性测定表明6个菌株的发酵液能完全抑制油茶炭疽病菌生长,效果明显,过滤液抑菌率为33.3%~58.3%,效果不明显,抑菌率超过50.0%的只有Z17、Z26 2个菌株。由此可知,菌株Z17和Z26对油茶病害有较好的抑菌效果,具有一定的生防潜力,可作为油茶病害的备选拮抗菌株开展深入研究。     

甲基营养型芽孢杆菌NKG-1可湿性粉剂的制备及药效研究

为了制备甲基营养型芽孢杆菌NKG-1可湿性粉剂,评价其防病促生效果。试验以NKG-1为试材,通过筛选载体和助剂,利用混料设计确定可湿性粉剂的最优配方,并进行药效测定。结果表明：NKG-1可湿性粉剂的最佳载体为白炭黑,最佳助剂为烷基萘磺酸盐甲醛缩聚物和嵌段共聚物混合物(Morwet D-500)及烷基萘磺酸盐(Petro AA)。混料设计确定了最优质量配比为：白炭黑：Morwet D-500：Petro AA=72:16:12。药效试验结果表明：NKG-1可湿性粉剂100倍液处理番茄植株后,其鲜重、干重、株高以及根长分别较对照增加了53.34%、61.01%、88.02%、78.53%,对番茄灰霉病的平均防治效果高达82.02%。本研究确定了甲基营养型芽孢杆菌NKG-1可湿性粉剂的最优配比,评测了制剂的药效,为NKG-1的生产应用奠定了试验基础。     

利迪链霉菌A02诱导番茄抗灰霉病作用机制研究——对植株防御酶系的影响

利用利迪链霉菌生防菌株A02发酵液和番茄灰霉病菌对番茄植株进行诱导和接种处理,利用分光光度法测定处理前和处理后1~5 d番茄叶片组织的主要防御酶系——苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、过氧化氢酶和多酚氧化酶的活性变化。试验结果显示,不接种灰霉病菌而单独诱导处理、接种灰霉病菌后诱导处理和诱导处理后接种灰霉病菌这3种处理都能提高番茄植株各防御酶系的活性,后者酶活性峰值最高,对番茄植株灰霉病的抑制作用也最明显,控制效果达94.92%。