卵形鲳鲹MHCⅡβ基因的克隆与表达分析

为探究卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)的结构和作用,利用RACE技术克隆获得MHCⅡβ基因的全序列,其长度为1 472 bp,开放阅读框(ORF)747 bp,编码248个氨基酸,分为信号肽区、肽结合区、Ig样区、跨膜区、胞质区。通过NJ法构建的系统进化树分析显示卵形鲳鲹独立聚为一支,与其他鱼类亲缘关系较近,与两栖类和哺乳类的亲缘关系较远。利用同源性比对发现其与大口黑鲈(Micropterus salmoides)亲缘关系较近,同源性达到79%。qRT-PCR分析表明MHCⅡβmRNA在卵形鲳鲹13个组织中均有表达,在脾和头肾中表达量较高,在鳍中表达量最低。感染美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)3 h后,卵形鲳鯵MHCⅡβmRNA在肠中显著上调表达;感染12 h后在肝中上调表达;感染24 h后在脾和头肾中显著上调表达,以上研究表明MHCⅡβ基因参与了卵形鲳鲹的免疫反应。     

卵形鲳鲹不同组织同工酶表达的差异

运用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法对卵形鲳鲹（Trachinotusovatus）6组织（肌肉、心脏、肝脏、肾脏、脑、脾脏）的5种同工酶（EST、LDH、MDH、ME和AST）进行了初步研究,并对5种同工酶的同工酶位点及其酶谱表型进行了分析。结果表明,卵形鲳够的5种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。EST由2个基因位点编码,Est-1在这6种组织中都存在,Est-2只存在于肝脏和。肾脏中;LDH由3个基因位点编码,共检测到3条谱带,Ldh-2只存在于肾脏中;MDH由2个基因位点编码,Mdh-1表达为MDH1和MDH22条酶带,Mdh-2表达为MDH31条酶带,在肝脏中的活性最强;ME由1个基因位点编码,只检测到1条酶带,肝脏的含量丰富;AST由2个基因位点编码,只在肝脏和肾脏中检测到,共检测到3条谱带。     

卵形鲳鲹MHCⅡβ基因的克隆与表达分析

水通道蛋白(aquaporin,AQPs)是由内在膜蛋白组成的超家族,介导水分子的跨膜运输,对渗透压调节具有重要作用。为研究AQP1a在急性盐度胁迫下对卵形鲳鲹 (Trachinotus ovatus)的渗透压调节作用,该研究获得AQP1a基因。基因全长1 078 bp,开放阅读框786 bp,编码261个氨基酸,具有MIP家族特有序列(HINPAVTLG)和2个天冬酰胺−脯氨酸−丙氨酸蛋白基序。qRT-PCR结果显示,AQP1a在11个被测组织中均有表达,在性腺中的表达量最高,其次是鳃和肠,在肌肉中表达量最低。在急性盐度胁迫下,当转入淡水时,AQP1a在鳃的表达量在第4小时显著上升,而在肾和肠中没有显著变化;当转入盐度10和20海水时,鳃中AQP1a的表达量在第2和第4小时显著升高,然后下降趋于稳定;转入盐度10海水时,肠中AQP1a的表达量均上升,肾中AQP1a的表达量呈先上升后下降趋势;转入盐度20海水时,肠中AQP1a的表达量仅在第4、第8和第48小时显著上升,肾中AQP1a的表达量在第12小时达到最大;转入盐度40海水中,鳃中AQP1a的表达量明显下降,相反,在肾和肠中AQP1a的表达量均明显上调。这些结果反映了AQP1a在不同组织中的功能特异性,证实了AQP1a在卵形鲳鲹盐度适应中起重要作用。     

卵形鲳鲹肾脏的显微和超微结构观察

利用石蜡组织切片和透射电镜技术对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肾脏进行显微和超微结构观察研究。结果显示,根据卵形鲳鲹肾小管上皮细胞的结构特点,将其划分为颈段、第一近曲小管、第二近曲小管、远曲小管和集合小管5个部分。卵形鲳鲹肾小体长径平均70μm,短径平均40μm;比淡水鱼种类的肾小体直径要小。肾小管中第一近曲小管的上皮细胞游离端具有丰富的微绒毛,并含有丰富的线粒体,应为重吸收的主要场所。而第二近曲小管上皮细胞游离端微绒毛较少,远曲小管和集合管的内壁均没有微绒毛,但三者均可见有较多的线粒体,表明它们仍具有一定的重吸收功能。     

广西卵形鲳鲹海豚链球菌基因分型、耐药谱型以及毒力基因检测

为了解近年来广西卵形鲳鲹海豚链球菌流行菌株的基因型信息以及菌株间的差异,对2015—2016年从广西地区7个养殖场的患病卵形鲳鲹体内分离得到的17株海豚链球菌菌株分别进行了基因型分析、耐药谱测定以及毒力基因检测。采用随机扩增多态性DNA标记技术(RAPD)和基因组重复序列PCR(rep-PCR)分析其基因型。结果显示,RAPD和rep-PCR指纹图谱结果一致,17株海豚链球菌可分为2种基因型。对海豚链球菌7种主要的毒力相关基因特异PCR检测,所有菌株均为sim A+scp I+pdi+sag A+cps D+pgm A+cfi+毒力基因型,表明这2种基因型的海豚链球菌似乎均为毒力较强的菌株。采用K-B法进行了20种抗生素敏感实验分析其耐药谱,结果表明归于基因1型的菌株耐药谱为AZT,基因2型菌株则出现3种相似的耐药谱,分别为SIZ/T/S/PEN/AZT/SPE/CAZ/PB、SIZ/T/S/PEN/AZT/SPE/CAZ/CRO和SIZ/T/S/PEN/AZT/SPE/CAZ/PB/RIF,证实基因型相同的菌株耐药谱型也相似,2种基因型的菌株耐药谱型差异显著,因此基因型和耐药谱型存在相关性。此结果为卵形鲳鲹海豚链球菌病流行病学研究、疫苗研制以及疫病监测提供理论依据。     

卵形鲳鲹脂肪酸延长酶(Elovl4-like)基因特征与功能研究

长链脂肪酸延长酶(elongases of very long chain fatty acids, Elovls)是长链多不饱和脂肪酸(long chain polyunsaturated fatty acid, LC-PUFA)生物合成途径中的关键限速酶,能够延长PUFA的碳链。为探究Elovl4在卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus) PUFA生物合成中的功能,该研究克隆了卵形鲳鲹Elovl4基因的cDNA序列,命名为ToElovl4-like,其开放阅读框(ORF)为792 bp,编码263个氨基酸。生物信息学分析结果表明,编码的氨基酸包含Elovl家族的显著结构特征如组氨酸盒子、多个跨膜区和ER滞留信号等。序列比对结果显示,卵形鲳鲹Elovl4-like基因高度保守,且该基因编码的蛋白序列与其他鱼类的相似度为73%~86%,其中与大西洋鳕(Gadus morhua)的相似度最高(86%)。系统进化分析表明,Elovl4主要聚为Elovl4a、Elovl4b和Elovl4-like 3类。其中ToElovl4-like与其他鱼类的Elovl4-like亲缘关系最近。实时荧光定量PCR表明ToElovl4-like基因在各组织中均有表达,其中在性腺和脾中mRNA表达量最高,在脑中mRNA表达量最低。酵母异源表达分析表明,ToElovl4-like可以分别将亚油酸(18:2n-6)、二十碳五烯酸(20:5n-3)延长为二十碳二烯酸(20:2n-6)和二十二碳五烯酸(22:5n-3)。研究结果为了解鱼类长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的生物合成提供了理论基础。     

盐度对卵形鲳鲹胚胎发育和早期仔鱼的影响

观察比较了10种不同盐度（5．0～50．0）条件下卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）受精卵的沉浮性、孵化率和畸形率,以及8种不同盐度（10．0—45．0）下仔鱼存活情况及不投饵存活系数（survival activityindex,SAI）。结果表踢,受精卵在不同盐度下表现出不同的沉浮性,在盐度为25．0以下的海水中呈沉性;在盐度30．0时为半沉浮性;在盐度为35．0的海水中呈浮性。盐度低于10．0或高于50．0,胚胎均不发育;在盐度15．0—45．0范围内,卵形鲳鲹胚胎能完成发育过程孵出仔鱼,但盐度对早期仔鱼的成活和畸形率的影响比较大。统计分析了总孵化率与盐度、畸形率与盐度的相关关系,求得胚胎孵化的预测适盐范围为14．9—39．4,最适盐度为26．0～28．2。在盐度25．0—30．0和无投饵状态下,仔鱼的SAI值为44．19～47．44。     

卵形鲳鲹一例疑似神经性病毒病的初步分析

对疑患病毒性神经坏死症、身体失去平衡、漂浮水面螺旋状游泳、体色发黑、大规模死亡的海水网箱养殖卵形鲳鲹幼鱼,采用组织病理切片观察和分子生物学技术对其病原进行初步分析和跟踪调查。组织病理学结果显示,病鱼脑和眼均呈现神经坏死病毒典型的空泡化现象;利用神经坏死病毒特异性引物nest-PCR检测发现,病鱼一扩阳性率100%,摄食游泳正常鱼一扩和二扩阳性率均为46.67%,显示港区苗种多自身携带病毒株;序列比对显示该病毒株属于赤点石斑神经坏死病毒基因型;对神经坏死病毒跟踪发现,成鱼一扩均为阴性,二扩阳性率则高达86.7%。初步认为,外界因子可能作为诱导因子,致使本身携带病毒鱼苗免疫降低致使此次流行病爆发,且神经坏死病毒潜伏于鱼体的时间较长。     

肌醇对卵形鲳鲹生长、饲料利用和血液指标的影响

配制w（肌醇）为350mg·kg^-1、458mg·kg^-1、507mg·kg^-1、720mg·kg^-1和1050mg·kg^-1的5种饲料,投喂初始质量为（8．30±0．11）g的卵形鲳鲹（Traehinotus ovatus）56d,评估肌醇对卵形鲳鲹生长、饲料利用和血液指标的影响。摄食w（肌醇）为720mg·kg^-1的饲料组的鱼增重率和特定生长率显著高于其他组（P〈0．05）,脏体比不受肌醇的影响;458mg·kg^-1、507mg·kg^-1和720mg·kg^-1 3个饲料组的成活率显著高于350mg·kg^-1和1050mg·kg^-1 2个饲料组（P〈0．05）;507mg·kg^-1 饲料组全鱼的水分显著高于720mg·kg^-1 饲料组以外的其他组（P〈0．05）,脂肪显著低于720mg·kg^-1饲料组以外的其他组（P〈0．05）,粗蛋白无显著差异（P〉0．05）。随着肌醇质量分数的增加,血糖浓度先升高后下降,720mg·kg^-1饲料组血糖浓度最高,显著高于350mg·kg^-1和458mg·kg^-1饲料组（P〈0．05）;507mg·kg^-1饲料组的低密度脂蛋白胆固醇浓度显著低于1050mg·kg^-1饲料组以外的其他组（P〈0．05）;添加肌醇能显著降低血液甘油三酯浓度,但对血液总蛋白、尿素氮、总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇没有影响。     

卵形鲳鲹胚后发育阶段鳃的分化和发育

采用组织学和扫描电镜等方法,鲹研究了卵形鲳(Trachinotus ovatus)胚后发育阶段鳃的分化和发育及其结构和功能的关系。观察发现,仔稚鱼鳃的早期发育可分为3个阶段:第1阶段(0~3日龄)为原基期,鳃原基形成但未分化,鳃耙未出现,仔鱼主要依靠鳍褶、皮肤和卵黄囊上的微血管进行呼吸;第2阶段(4~17日龄)为鳃丝分化、发育期,鳃弓、鳃丝、鳃小片、鳃耙逐渐形成,具备鳃的基本结构和形态特点;第3阶段(18日龄之后)为鳃器官生长发育完善期,鳃弓、鳃丝、鳃小片、鳃耙发育完善,鳃的形态和功能与成鱼相似。进一步研究发现,鳃丝总数随仔稚鱼全长和体质量的增加而增加,单个鳃小片面积和总呼吸面积随仔稚鱼体质量的增加而增大。结果表明,卵形鲳鲳鲹的分化和发育是与仔、稚鱼的生长、形态发育和功能的完善相一致的。     

急性和慢性低氧胁迫对卵形鲳鲹鳃器官的影响

文章研究了窒息点以上的低氧胁迫对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)鱼体鳃器官的影响,在常温条件下对(32.84±3.99)g的卵形鲳鲹进行了急性(0 h、3 h、6 h、12 h、24 h)和慢性(14 d)的低氧胁迫实验,采用常规石蜡切片和H-E染色以及电子显微技术,观察低氧胁迫对卵形鲳鲹鳃器官的影响。结果显示,卵形鲳鲹在急性低氧胁迫下鳃小片上皮肿胀和抬升;慢性低氧胁迫下随着时间延长,鳃小片上皮细胞与鳃小片分离,鳃呼吸表面积增加。结果表明低氧胁迫对卵形鲳鲹鳃器官具有较大影响,而且慢性胁迫的影响大于急性胁迫。     

卵形鲳鲹育种群体遗传多样性分析

利用11个微卫星位点,对海南三亚和广东大亚湾2个卵形鲳鲹（Trachinotus ovatus）育种群体进行了遗传多样性评价和聚类分析。结果显示,海南三亚和广东大亚湾2个卵形鲳鲹育种群体的平均等位基因（Na）分别为5.0和3.6,平均有效等位基因（Ne）为2.965和2.244,观测杂合度（Ho）分别为0.292~0.814和0.207~0.840,期望杂合度（He）分别为0.307~0.813和0.189~0.761,海南三亚群体中多态信息含量（PIC）为0.014~0.719,平均为0.509,而广东大亚湾群体的PIC为0.168~0.711,平均为0.436。海南三亚群体有5个位点偏离哈迪-温伯格平衡（P0.05）,广东大亚湾群体有2个位点偏离哈温-伯格平衡;2个群体间的遗传相似系数为0.561,遗传距离为0.578,遗传分化指数（Fst）为0.152。Structure软件分析显示海南三亚和广东大亚湾2个卵形鲳鲹群体各为一支,2个群体间具有较大的遗传分化,可作为2个育种群体管理,2个群体间进行杂交选育预期可获得较好的遗传进展。     

Jaw malformation of hatchery reared golden pompano Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758) larvae

Jaw malformations of hatchery reared golden pompano Trachinotus ovatus larvae were studied from 1 day post hatch (DPH) to 31 DPH. The severity of jaw deformities was classified into three levels where ‘0’ represents normal jaw; ‘1’ is intermediate jaw malformation; and ‘2’ is severe jaw malformation. The severe jaw malformations of golden pompano larvae were clearly observed on 3 DPH. Starting from 3 DPH, both intermediate and severe jaw malformations were observed and the total incidence of jaw malformations ranged from 9.6% to 46.6%. The highest severe jaw malformation occurred on 5 DPH, and 25% larvae exhibited serve jaw malformation. On 11 DPH, jaw malformations reached the peak with 46.6% fish exhibiting jaw malformations of either category 1 or 2. On 26 DPH, the percentage of intermediate jaw malformation reached the peak value (36.4%). This was the first study reporting jaw malformation of golden pompano larvae, and the result can be used as a reference point for future research on the control of jaw malformation in golden pompano.     

牛磺酸对卵形鲳鲹肠道微生物及免疫功能的影响

为了探讨牛磺酸对卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)肠道微生物菌群结构和免疫功能的影响,试验以鱼粉、发酵豆粕和玉米蛋白粉为基础蛋白源配制了牛磺酸质量分数分别为1.3 g·kg-1(T0)、4.4 g·kg-1(T1)、7.4 g·kg-1(T2)、10.5 g·kg-1(T3)、12.7 g·kg-1(T4...     

Quantitative dietary methionine requirement of juvenile golden pompano Trachinotus ovatus at a constant dietary cystine level

A feeding trial was conducted to determine the dietary methionine requirement of juvenile golden pompano (initial body weight 12.40 ± 0.02 g). Six diets were formulated with six graded levels of methionine (8.6, 9.2, 10.4, 11.5, 13.2 and 14.5 g kg⁻¹). Each diet was randomly assigned to triplicate groups of 20 juvenile fish in seawater floating net cages (1.0 m × 1.0 m × 1.5 m). Fish were fed twice daily (08:30 and 16:30) to apparent satiation for 56 days. Weight gain (WG), specific growth rate (SGR), feed conversion ratio (FCR), feed efficiency (FE), nitrogen retention efficiency (NRE), proximate body composition, morphometry and haematology were significantly (P < 0.05) affected by the dietary methionine levels. WG, SGR and FE increased with increasing levels of methionine up to 13.2 g kg⁻¹ diet (P < 0.05) and remained nearly the same thereafter. NRE also increased with increasing levels of methionine up to 13.2 g kg⁻¹ diet (P < 0.05) and remained nearly the same thereafter. Linear regression analysis on WG and NRE indicated that the recommended optimum dietary methionine levels for optimal growth of juvenile pompano were 10.6 and 12.7 g kg⁻¹ diet, respectively, corresponding to 24.6 and 29.5 g kg⁻¹ dietary protein, respectively, so the level of dietary methionine should be between 10.6 and 12.7 g kg⁻¹ diet, corresponding to 24.6–29.5 g kg⁻¹ dietary protein. Additionally, the estimated requirements for the other essential amino acids were calculated from A/E ratios of whole‐body amino acid profile based on the methionine requirement determined from the present experiment.     

卵形鲳鲹高效低鱼粉配合饲料在深海网箱养殖中的应用效果评估

前期研究表明,卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)高效低鱼粉配合饲料在池塘网箱养殖中展现出优良效果。为进一步评估该饲料在深海网箱养殖中的应用效果,本研究基于该饲料配方,委托某饲料公司采用大规模生产工艺(基于饲料厂大机器、大规模生产条件下进行饲料生产,每小时生产量达十多吨,且具有喷油机等设备,通过外喷添加脂肪源)生产实验饲料(粗蛋白47.66%,粗脂肪7.98%),以某知名品牌的商品饲料为对照(粗蛋白47.75%,粗脂肪9.63%),利用上述2种饲料,于深海网箱(周长60 m)养殖大规格卵形鲳鲹(平均体重约为262 g) 33 d。结果显示,2种饲料组鱼的生长性能无统计学差异(P>0.05),然而,相比于商品料组,实验料组鱼的增重率和特定生长率分别提高了14.43%和8.19%,日均增重提高0.68 g;在肌肉营养成分和质构特性方面,实验组鱼肌肉脂肪含量显著高于对照组(P<0.05),但其水分显著降低(P<0.05);两组间鱼肌肉品质和质构特性无显著性差异(P>0.05)。相比于商品料组,实验料组鱼血清总蛋白、甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白含量及谷草转氨酶活性均显著降低(P<0.05),实验组鱼肝脏总胆固醇含量显著降低(P<0.05),但两组间鱼肝脏抗氧化能力无显著性差异(P>0.05);此外,实验料每养成1 kg鱼的饲料成本比商品料低18.80%,总养殖效益提高62.12%。研究结果表明,与商品料相比,实验料(卵形鲳鲹高效低鱼粉配合饲料)不仅具有优良的促生长效果,且能够提升肌肉脂肪水平、改善卵形鲳鲹的血脂代谢、提高养殖经济效益。这说明该高效低鱼粉配合饲料可在卵形鲳鲹养殖生产中大规模推广应用。     

Effect of salinity on the rearing performance of juvenile golden pompano Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758)

Effect of rearing salinity on the performance of juvenile golden pompano Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758) was studied under a laboratory condition. Fish growth, survival, RNA/DNA ratio, pepsin activity, α‐amylase activity and FCR were used as evaluation criteria. The growth and RNA/DNA ratio were significantly affected by the rearing salinity. High growth rate and RNA/DNA ratio were observed when fish were reared at the salinity of 34‰. The pepsin activity of fish was not significantly affected by the rearing salinity. However, the α‐amylase activity of fish was significantly affected by the rearing salinity. The α‐amylase activity of fish reared at the salinity of 10‰ was significantly lower than fish cultured at the salinity of 34‰. Rearing salinity can significantly affect the FCR of juvenile golden pompano. The FCR of fish cultured at the salinity of 10‰ was 5‐times higher than the FCR of fish reared at 34‰. Results from the present study indicate that juvenile golden pompano can be reared above 26‰ without affecting fish performance, and the salinity of 10‰ may be too low to rear juvenile golden pompano as fish growth, RNA/DNA ratio and α‐amylase activity were reduced.