玉米大斑病生防菌的筛选、鉴定及应用研究

为了从生物途径探索有效控制大斑病在玉米生产带来的危害,本试验以玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)为目标菌株,采用对峙法和盆栽接种试验获取生防菌,并测定其盆栽防治效果.结果表明:从128株玉米内生细菌获得1株对玉米大斑病菌拮抗效果最佳的菌株,最长半径与最短半径比值为2.9.从玉米内部分离到的内生生防...     

黄瓜白粉病的生防细菌筛选及鉴定

为开发黄瓜白粉病的生防资源,与三七根腐病菌、禾谷镰刀菌和柑橘炭疽病菌进行平板对峙培养,从25株黄瓜根际土细菌和91株烟草内生细菌中筛选出具拮抗功能的菌株;以盆栽试验从拮抗功能菌株中筛选能够防治黄瓜白粉病的生防菌株;用PCR扩增生防菌株的gyrB基因,结合菌株的菌落形态和部分生理生化特征,确定生防菌株分类地位。结果表明,在116株对峙培养细菌中,18株对三七根腐病菌、禾谷镰刀菌和柑橘炭疽病菌有较好拮抗效果。在盆栽试验中,烟草内生菌YN-201490和黄瓜根际菌株WL-1对黄瓜白粉病防效较好,其中YN-201490的1.81×10⁸ cfu/mL和WL-1的1.6×10⁸ cfu/mL稀释液连续施用3次后的防效分别达64.86%和61.26%。最终YN-201490被鉴定为枯草芽孢杆菌,WL-1被鉴定为解淀粉芽孢杆菌。     

马铃薯腐烂茎线虫生防细菌的筛选与鉴定

本研究旨在开发杀线虫活性高的生防资源以防控马铃薯腐烂茎线虫病。以34个细菌菌株发酵液为试材,通过直接触杀法测定其对马铃薯腐烂茎线虫的触杀活性;利用16S rDNA基因,并结合菌落形态和生理生化特征,确定生防菌株的分类地位。筛选出9个细菌菌株对马铃薯腐烂茎线虫的触杀活性较高,48 h线虫的校正死亡率达72.36%~82.59%;经鉴定,菌株Chi9-7、Nong3-5、Nong5-6和b1-3为枯草芽胞杆菌,菌株b5-4为贝莱斯芽胞杆菌,菌株Chi9-2、Xia4-11、Gu4-7和Z-1为解淀粉芽胞杆菌。本研究筛选并鉴定了杀线虫作用明显的9株芽胞杆菌,为微生物杀线剂的研发提供了新的生防资源,也为马铃薯腐烂茎线虫病的有效防控奠定了基础。     

玉米杂交种及其亲本自交系的生化指纹鉴定

本试验以浙单9号等五个玉米杂交组合及其亲本自交系为材料,进行种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳等多种电泳鉴定方法的研究,以揭示玉米杂交种及其亲本自交系的“生化指纹”(biochenucal fingerprint),以及筛选出适合于玉米杂交种及其亲本自交系真实性和纯度鉴定的方法。结果表明,各供试玉米杂交种及其亲本自交系都具有相应的、唯一的种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳所显现的生化指纹。对于有些组合。玉米芽鞘和叶片绿色组织过氧化物酶同工酶电泳图谱存在阴极第4、第5酶带差异,因这两条酶带的差异稳定,并且重现性好,故能用过氧化物酶同工酶技术对其进行有效地鉴定。上述两种方法,尤其是前者,因技术要求不高,费用低,快速及重现性好等特点,能满足我国目前种子检验室日常玉米品种纯度快速测定工作的要求,具育良好的应用前景。     

西瓜品种ssR标记鉴定引物的筛选与分析

以16个西瓜品种为材料,从226对西瓜SSR引物中筛选出24对适合西瓜品种鉴定的引物,用该24对引物对68个西瓜品种进行分析,共检测出60个等位基因变异,等位基因变异范围为2⁹个,平均每个位点产生2.5个等位基因变异。68个西瓜品种遗传聚类分析结果显示,24对引物能够将所有品种进行有效鉴别,品种间遗传相似性介于0.4769个,平均每个位点产生2.5个等位基因变异。68个西瓜品种遗传聚类分析结果显示,24对引物能够将所有品种进行有效鉴别,品种间遗传相似性介于0.476⁰.984,并且至少存在1个位点的差异,说明由该24对SSR引物形成的引物组合可用于西瓜品种的鉴定。     

诱导玉米抗弯孢菌叶斑病促生细菌的鉴定及生防效果评价

玉米弯孢菌叶斑病是玉米生产上的重要病害之一。［目的］为获得一株有效的抗玉米弯孢菌叶斑病的生防细菌,［方法］本研究采用生防细菌包衣处理玉米种子的方法,将前期田间初筛得到的4株生防促生细菌进行室内和田间防效评估,获得一株防效最好的菌株。进一步通过室内和田间试验验证该菌株对玉米的促生和增产作用,并采用形态学、生理生化和分子生物学分析方法对其进行鉴定。［结果］结果表明,4株生防细菌中,菌株Sneb2249对玉米弯孢菌叶斑病的防效最好,盆栽防效为55.04%,田间防效为39.36%。室内促生和田间测产试验结果显示,菌株Sneb2249能够显著促进玉米植株生长,其株高、地上部干重和千粒重分别比对照提高24.89%、49.15%和 7.9%。经鉴定菌株Sneb2249为恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)。［结论］恶臭假单胞菌Sneb2249是一株优良的植物根际促生菌,既可抗弯孢叶斑病菌,又对玉米具有促生增产作用。利用有益微生物处理种子防控病害将是一种新型的植保措施,具有重要的研究意义。     

玉米自交系资源对大斑病抗病性的鉴定

选用了国内外自交系230份玉米自交系进行了大斑病抗病性鉴定。其结果为高抗系、抗病系只占1%-11.7％感病系43．8％，高感系43．5％。     

玉米种质资源对大斑病的抗病性鉴定

“七五”期间,在南京、昆明、太原和丹东等地对我国2028份玉米材料进行大斑病抗性鉴定的结果,高抗材料3份,抗病55份,中抗169份,感病1801份。自交系的中抗以上种质占的比例高于农家品种中的比例。     

猕猴桃黑头病生防菌的筛选、鉴定及防效评价

研究旨在筛选对猕猴桃黑头病病原真菌(Diaporthe eres)有拮抗作用的菌株。通过平板对峙法从陕西周至县猕猴桃根际土壤中分离筛选到1株具有明显拮抗作用的菌株BKH。显微及菌落形态观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析结果表明,该菌株为双向伯克霍尔德氏菌(Burkholderia ambifaria)。菌株BKH在平板上能显著抑制Diaporthe eres生长,抑菌率为72.5%,且对猕猴桃黑头病田间防效可达91.7%,在猕猴桃黑头病生物防治方面具有应用潜力。     

一株生防细菌的分离鉴定及其抑菌活性物质的分析

随着人们对农产品品质和安全性要求的提高,高效生物防治资源的筛选显得尤其重要。本研究通过平板对峙实验、分子鉴定、刚果红染色、葡聚糖酶基因克隆与序列分析等方法获得一株抑制多种植物病原真菌的芽孢杆菌,编号为YW26。16S rDNA基因序列分析表明该菌株为解淀粉芽孢杆菌;刚果红染色显示该菌株具有很强的产纤维素酶能力;根据GenBank数据库中芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因(CP000560)序列设计引物,克隆得到1527 bp的片段,经测序、BLAST分析显示该片段与Bacillus amyloliquefaciens FZB42内切β-1,4-葡聚糖酶基因序列同源性为99%。该解淀粉芽孢杆菌抑菌效果显著,具有较强产纤维素酶能力。因此,该菌株可作为一种生防资源,开发新的生防制剂。     

苹果早期落叶病广谱拮抗菌株的筛选、鉴定与抑制作用研究

采用平板对峙法、平皿叶片法,从苹果树根际土壤样品中分离筛选得到7株苹果早期落叶病广谱拮抗菌株,其中菌株BS24对苹果早期落叶病主要病害斑点落叶病和褐斑病的病原菌拮抗效果最佳,抑菌带宽度分别为9.5 mm、9.2 mm。综合菌株形态特征、生理生化特征及16S rDNA序列分析,将其鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。试验表明菌株BS24无细胞培养滤液可显著抑制苹果早期落叶病主要病原菌的菌丝生长和孢子萌发。菌株抑菌谱较广,对苹果其他几种病害如灰斑病、圆斑病、轮斑病、腐烂病、轮纹病、炭疽病等的病原菌均有明显拮抗效果。菌株BS24具有良好的苹果早期落叶病生防应用的潜力。     

木霉可湿性粉剂对玉米小斑病的生物防治作用

玉米小斑病是我国南方玉米产区主要叶部病害之一,为探索防治玉米小斑病的生物农药,采用实验室培养皿理想试验与玉米苗盆栽试验,观察木霉菌可湿性粉剂对病原菌菌丝生长、玉米叶片变化及玉米防御反应相关酶活的测定。实验室结果表明,木霉菌可湿性粉剂强烈抑制玉米小斑病菌菌丝生长;盆栽结果表明,喷洒木霉可湿性粉剂抑制了小斑病菌对玉米叶片的侵染。同时喷施12h、24小时后木霉菌可湿性粉剂诱导玉米防御相关的POD和PAL酶活升高。     

玉米自交系对大斑病菌的抗性鉴定及抗性来源分析

玉米大斑病是一种严重影响玉米产量的病害,在全国各地多有发生。通过筛选抗病玉米自交系,选育优良抗病品种可以有效防止大斑病的发生。试验于2017-2018年,用田间人工接种大斑病混合菌的方法,对185份玉米种质进行了玉米大斑病抗性鉴定与评价,筛选出高抗自交系16份,其中自选系7份,并对玉米自选系抗病性来源进行分析,发现Y6和J1577等品系抗病性强且可以稳定遗传。     

一株棉花黄萎病拮抗芽孢细菌的分离鉴定及活性检测

 采用改良的琼脂平板扩散法,通过初筛和复筛,得到一株对棉花黄萎病病原菌大丽轮枝菌（Verticillium dahliae）具有较强的抑菌活性的拮抗细菌Z-5菌株。通过对该菌株的形态特征观察、生理生化鉴定和16S rDNA的序列分析,确定拮抗细菌Z-5菌株为Bacillus malacitensis。盆栽实验表明Z-5菌株对大丽轮枝菌的防治效果达到76.05%,对棉花黄萎病具有明显的防治作用。     

7种杀菌剂对玉米大斑病病原菌的毒力测定试验

研究旨在鉴定出玉米大斑病病原菌,筛选出防治玉米大斑病的最佳药剂。试验采用组织分离法对玉米大斑病病原菌进行分离鉴定,用含毒培养基生长速率法测定7 种杀菌剂对玉米大斑病病原菌的抑制效果。经分离鉴定,该病原菌为链格孢Alternaria alternate。毒力测定试验结果表明：药后48 h,异菌脲EC50值为0.27 mg/L,毒力指数最大,对链格孢菌抑制效果非常显著;丙环唑和苯醚甲环唑EC50值为0.51、0.53 mg/L,抑制效果较显著;氟硅唑和嘧霉胺的EC50值为1.66、1.91 mg/L,效果显著;代森锰锌和醚菌酯的EC50值分别为25.82、929.78 mg/L,毒力指数较低,抑制效果差;药后72 h 各药剂对链格孢的抑制效果与药后48 h 抑制效果相似。在7 种杀菌剂中异菌脲对链格孢菌抑制效果最好,当试验浓度为50 mg/L 时,抑制率可达95%。     

大丽轮枝菌拮抗细菌的分离与抗菌物质鉴定

从黄萎病发病棉田未发病棉株根际土样中分离芽孢杆菌,利用对峙培养法对大丽轮枝菌进行平板拮抗实验,筛选出6株对大丽轮枝菌有拮抗作用的芽孢杆菌,其中3株菌发酵代谢产物具有抗菌活性。S4-3菌株发酵液滤液经100℃、30min热处理丧失抗菌活性,发酵液氯仿抽提物不具有抗菌活性,发酵液硫酸铵沉淀物有抑菌活性,但经蛋白酶处理后活性丧失,认为S4-3菌株抑菌活性物质是蛋白质。而菌株S4-5发酵液经100℃热处理后还有较高的抗菌活性,发酵液氯仿抽提物也具有抗菌活性,但硫酸铵沉淀物对病原菌无抑制作用;S5-6菌株发酵液滤液经100℃热处理丧失抗菌活性,硫酸铵沉淀物也不具有抗菌活性,而发酵液氯仿抽提物有抗菌活性,因此认为S4-5和S5-6菌株产生的抑菌物质不是蛋白质类。     

一株大丽轮枝菌拮抗细菌7-47菌株的分离与鉴定

 从全国各地棉田采集土样,筛选对棉花黄萎病致病菌大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）具有拮抗作用的芽孢杆菌菌株。通过初筛得到具有拮抗作用的菌株68株,复筛选出1株拮抗活性较高的菌株7-47,并通过生理生化试验,形态特征的观察及16S rDNA的序列分析对其进行了鉴定,认为菌株7-47属于漠海威芽孢杆菌（Bacillus mojavensis）。     

生防菌株NJ-18的鉴定及其对几种植物病原真菌的拮抗作用研究

NJ-18是从油菜田土壤中分离筛选获得的一株具有抗真菌活性的细菌,本研究从形态和生理生化特征及16S rDNA序列分析,鉴定NJ-18菌株为枯草芽孢杆菌。经平板对峙试验表明,NJ-18发酵液对Sclerotinia sclerotiorum、Rhizoctonia solani、 Fusarium moniliforme、Magnaporthe grisea、F. graminearum、R. cerealis、 Alternaria solani、Botrytis cinerea and Fusarium oxysporum等九种植物病原真菌菌丝生长都具有良好的广谱抑菌活性;盆栽植株试验表明,NJ-18发酵液对小麦白粉病具有很好的保护和治疗作用,发酵原液的保护和治疗作用效果分别高达到96.1%和88.2%,发酵液稀释200倍后处理,对小麦白粉病的保护和治疗作用效果分别达到58.8%和51.4%。     

棉花黄萎菌拮抗菌BDT-25的鉴定及抗菌蛋白产生条件研究

拮抗细菌BDT_25是从根际土壤中分离到的一株对棉花黄萎病菌具有强烈抑制作用的芽孢杆菌。经生理生化特征的鉴定,证明BDT_25菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。此外,该菌株还对棉花枯萎病菌、棉花立枯病菌等10种其他病原真菌的生长具有显著的抑制作用,为一株广谱拮抗细菌菌株。通过对BDT_25菌株培养条件的研究发现,采用NB液体培养基,28℃,170 r/min培养48 h所得发酵液对棉花黄萎病菌的抑制作用最强。其发酵液经硫酸铵沉淀粗提到对棉花黄萎病菌具有抑制作用的提取物,进一步实验表明,该拮抗物质对热和多种蛋白酶敏感,证实其为抗菌蛋白。