乌拉尔甘草离体根尖培养方法的建立

建立甘草的离体根尖培养体系有助于研究甘草的根系营养、形态建成以及某些次生代谢产物的合成、代谢等。为建立乌拉尔甘草的离体根尖培养体系,对影响乌拉尔甘草离体根尖生长的培养基、激素以及维生素等因素进行了研究,并对其中的药用有效成分进行分析。结果表明：在培养基中附加0．10mg／L的IBA,可诱导乌拉尔甘草离体根尖伸长并产生较多的侧根;B,大量元素＋B5微量元素和1/3MS大量元素＋1／3MS微量元素适宜乌拉尔甘草离体根系的生长。表现为主根和侧根发达而均匀,具有较强的生长活力;培养基中附加0．50mg/L的VB1可显著促进乌拉尔甘草离体根系鲜重的增加;液体悬浮培养适于乌拉尔甘草离体根尖的培养。在悬浮培养条件下甘草离体根中甘草总黄酮物质的含量为0．75％,但没有检测到甘草酸的产生。     

丹参毛状根生物反应器大规模培养的研究

以总丹参酮(脂溶性成分)的含量为监测对象,利用10L的球状气升式反应器进行了丹参毛状根培养的初级放大试验,发现球状气升式反应器培养50d时丹参毛状根的增殖倍数为241．71倍,高于三角瓶摇瓶培养的丹参毛状根的增殖倍数,其总丹参酮的含量接近三角瓶摇瓶培养的丹参毛状根总丹参酮的含量。接着,以原儿茶醛和丹酚酸B这两种水溶性成分为监测对象,利用75L的气升式反应器进行了进一步的放大培养,发现它们的含量在75L的气升式反应器培养50d时所获得的丹参毛状根中与10L的球状气升式反应器培养50d时所获得的丹参毛状根中相当。这些结果表明,利用气升式反应器进行丹参毛状根初级放大和中试规模的培养是可行的,它为今后丹参毛状根的工业化生产奠定了基础,有望为象丹参这样的名贵植物资源的持续开发与利用以及绿色原料药的生产开辟一条新途径。     

秋水仙素诱导乌拉尔甘草同源四倍体的研究

在组织培养条件下,用秋水仙素溶液浸泡乌拉尔甘草试管苗(2n=2X=16)茎尖进行同源四倍体诱导,比较了不同秋水仙素浓度和不同处理时间对存活率、变异率的影响,并对加倍植株的鉴定和纯合四倍体的分离方法进行了研究.结果表明,秋水仙素浓度为0.1%,浸泡时间为12h时,茎尖的存活率和变异率分别为52.3%和22.1%,诱导率较高,并通过保卫细胞和根尖染色体数目鉴定,成功获得了甘草同源四倍体(2n=4X=32),为开展甘草多倍体育种奠定了物质和技术基础.     

水仙离体培养及植株再生的研究进展

摘 要：水仙离体培养及其再生技术在水仙品种改良、种质资源保存与繁殖、遗传转化等方面发挥着重要作用。本文综述了20世纪70年代以来水仙离体培养及植株再生的研究进展,包括水仙营养器官培养、生殖器官培养、体细胞培养等方面的应用,对水仙离体培养过程中存在的一些问题进行了探讨并对今后的研究方向作下展望。     

刺五加毛状根诱导条件的研究

为研究影响刺五加毛状根产生的因素,以农杆菌R15834、R1601、C58C1为试验菌株,叶片、叶柄、幼茎为外植体,探讨发根农杆菌种类、菌液浓度、共培养时间和乙酰丁香酮(As)等因素对刺五加毛状根转化率的影响。结果表明菌株R15834以浓度OD600=0.4左右对刺五加毛状根的诱导能力较好;叶片诱导毛状根能力较好;共培养时间以4天左右为最佳;As浓度以400 μmol/L左右有利于促进刺五加毛状根的产生。试验对刺五加毛状根的诱导体系进行了比较系统的研究,为产业化生产毛状根工作提供参考。     

狭叶四照花茎段的离体培养与植株再生

建立高效的狭叶四照花组培快繁体系。以狭叶四照花茎段腋芽为外植体,研究基本培养基和植物生长调节剂对不定芽诱导、不定芽增殖及生根诱导的影响。不定芽诱导过程中,9个组合处理对不定芽诱导均有促进作用,其中WPM+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L KT+0.1 mg/L NAA为最佳组合,萌发率达到86.29%;最适宜不定芽增殖培养基为WPM+1.0 mg/L 6-BA +0.2 mg/L NAA,增殖系数4.07;最适宜芽苗生根培养基WPM+1.0 mg/L IBA,生根率达78.94%,生长状态优于其他处理。本实验建立的组培快繁体系,适合狭叶四照花的植株再生。     

白木香毛状根的诱导及外源基因的导入

沉香是名贵药材之一,白木香(Aquilariasinensis)是沉香的唯一基源植物.为明确外植体和诱导条件对白木香发根的影响,本研究利用发根农杆菌SW101侵染白木香无菌苗,并将携带gfp基因的载体转入SW101后诱导发根.结果显示,当子叶、叶片和茎段作为外植体时,最适诱导发根条件为MS+200 μmol/L乙酰丁香...     

四倍体菘蓝毛状根的诱导及其植株再生

利用发根农杆菌A4和R1000感染四倍体菘蓝子叶,毛状根诱导频率和得根率分别达72.5%和27%以上.A4诱导四倍体菘蓝毛状根优于R1000,光照对毛状根的诱导起着重要作用,外源激素IAA能明显地促进毛状根的诱导作用.rolB、rolC基因的PCR分析表明,Ri质粒中的T-DNA片段已整合到毛状根细胞基因组中.毛状根能在不含激素的MS固体培养基上分化出不定芽,6-BA能促进毛状根不定芽的诱导;NAA促进不定芽生根,再生完整植株.     

谷子毛状根诱导方法的建立与优化

为建立一种快速鉴定谷子基因功能的技术体系,本研究通过比较谷子外植体、品种、乙酰丁香酮、菌液浓度和共培养时间对发根农杆菌K599介导的毛状根诱导效率的影响,发现发根农杆菌浓度在OD600为0.5、以谷子芽尖为外植体、在含有100μmol L–1乙酰丁香酮的毛状根诱导培养基上共培养3 d时,可使毛状根诱导率高达80.24%。将GFP基因进行毛状根遗传转化,通过GFP基因的PCR扩增和GFP荧光观察结果分析,发现谷子毛状根的转基因效率大于70%。利用该体系对谷子SiDVL1和SiDVL3的亚细胞定位和SiNHX2、SiCBL4和SiCBL7基因功能进行了分析和鉴定。结果表明SiDVL1和SiDVL3在谷子毛状根中的亚细胞定位与在烟草叶片中的一致;SiNHX2、SiCBL4和SiCBL7转基因谷子的存活率显著高于空载体转化谷子。说明本研究建立了一种高效快速鉴定谷子基因定位和功能的方法。     

甘草离体培养物中总黄酮提取工艺的优化

【研究目的】对甘草离体培养物中总黄酮提取和测定工艺进行优化,以建立在室内筛选高产细胞系和试管苗株系的方法;【方法】采用超声波提取技术,对提取液、浸泡时间、提取温度等进行优化;【结果】将样品以75%甲醇浸泡6h后在32℃下超声提取两次,比色法测定总黄酮含量,加样回收率为95.3%～101.4%,相对标准偏差为1.61%。测得甘草初代愈伤组织中总黄酮含量为0.0012%～0.05%,子叶愈伤组织调控后含量高达0.08%,试管苗中总黄酮含量为1.04%～1.31%,移栽后高达4.5%。【结论】此工艺准确度较高、稳定性好、简便可行,为优良细胞系的筛选和试管苗的早期鉴定奠定了技术基础。     

种皮颜色对乌拉尔甘草种子质量的影响

乌拉尔甘草种子中存在着颜色的差异,可以分为绿籽与黑籽。为了确定不同颜色甘草种子的使用价值,为乌拉尔甘草的清选分级及选购提供参考,比较了绿籽与黑籽的千粒重、种子直径、电导率、发芽率、硬实率、活力指数、ATP、TTC及种子带菌情况的差异,结果表明,绿籽的硬实率、发芽率、活力指数、ATP活力、TTC活力等均显著高于黑籽,内外部带菌种子比率、电导率则显著低于黑籽,说明绿籽质量要明显高于黑籽。     

盐胁迫对甘草种子发芽与子叶抗氧化指标的影响

研究了不同naCl浓度对甘草种子发芽与子叶抗性的影响.结果表明,当NaCl浓度低于100mmol/L时,甘草种子的发芽正常;在NaCl浓度达到200 mmol/L时,种子发芽受到显著抑制.子叶内活性氧、SOD、POD、可溶性蛋白和膜透性都随NaCl浓度的升高而增加,甘草的抗逆性可能与上述酶活性的变化有关.     

温度和水分对甘草种子萌发的影响

为探明甘草种子萌发的适宜温湿度条件以提高萌发率,并为其开发利用提供基础。在不同温度(10、15、20、25℃)和水分(10%、15%、20%、25%)条件下通过对萌发时滞、发芽势、发芽率、霉变率指标的测定来研究甘草种子的萌发特性。结果表明:(15℃,20%)、(20℃,15%/25%)、(25℃,20%/25%)组合处理下种子萌发时滞为3天,较其他组合处理下用时短;(25℃,15%/20%/25%)组合处理下种子的发芽势明显高于其他组合水平,说明高温高湿条件下甘草种子萌发较快;(25℃,20%)组合处理下种子的萌发率达到最高值,为92.00%;(25℃,10%/20%)组合处理下种子的霉变率较低,种子发霉数较少,萌发可能性较大。上述各项指标综合显示,甘草种子萌发适宜的温度和湿度条件为:温度25℃、发芽床含水量20%。     

甘草种子蛋白质提取及SDS-PAGE电泳技术研究

目的:建立一套适用于甘草种子蛋白质提取及SDS-PAGE电泳的技术体系,为甘草种子纯度检测提供技术支撑.方法:对甘草种子蛋白质的8种提取方法进行了筛选,在此基础上进一步比较不同的分离胶浓度、不同料液比对甘草种子蛋白质SDS-PAGE电泳的影响,并采用该技术方法对乌拉尔甘草和胀果甘草种子进行鉴定.结果:巯基乙醇法和丙酮沉淀法是适宜的蛋白质提取方法,巯基乙醇法得到12条带,丙酮沉淀法得到9条蛋白质条带,且背景颜色较浅,适宜于进行种子纯度检测.10％分离胶和1∶10的料液比电泳效果较好.乌拉尔甘草和胀果甘草种子有蛋白质条带的差异.结论:建立了一种高质量的甘草种子蛋白质样品的制备方法及SDS-PAGE电泳技术,可用于甘草种子纯度检测.     

盐胁迫对甘草幼苗生长及其生理指标的影响

研究了不同盐浓度(0,50,100,200 mmol/L)条件下甘草幼苗生长和生理生化各项指标,结果表明,随着盐浓度的升高,甘草幼苗根长变化最小,株高、鲜重和干重呈下降趋势,但低盐浓度(50,100 mmol/L)之间差异不明显;叶绿素含量和叶绿素荧光参数Fv/Fm在低盐浓度下显著上升,在高盐浓度(200 mmol/L)下显著下降;电导率和MDA、可溶性糖、脯氨酸含量以及POD和CAT都随盐浓度升高而上升,而SOD和ASP在低盐浓度下上升,在高盐浓度下下降。甘草幼苗的耐盐上限为100~200 mmol/L。     

甘草超声提取液抑菌和抗氧化效果研究

为探究甘草超声提取液的抑菌和抗氧化效果,寻找安全的食品保鲜剂,本实验以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌为受试菌株,采用琼脂扩散法测定抑菌圈半径,探究甘草超声提取液抑菌活性;测定1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)的自由基清除能力、抗邻苯三酚的自氧化效果,检测甘草超声提取液抗氧化能力。结果表明,甘草提取液对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌的抑菌圈半径在培养18 h后分别可以达到1.01±0.08 cm、0.96±0.03 cm;对DPPH的自由基清除能力可达到93.1%,显著高于对照组(0.1 mg/mL维生素C);抗邻苯三酚的自氧化效果最高可达到87.57%。甘草提取物对以上两种受试菌具有良好的抑菌作用,对DPPH与邻苯三酚也有一定的抗氧化效果。     

乌拉尔甘草实生苗对土壤盐胁迫的形态与结构响应

以乌拉尔甘草1年生实生苗为实验材料,选取Na Cl、Na2SO4和Na HCO33种不同浓度的单盐,采用水培法对其进行30天的盐胁迫处理。盐胁迫结束后对株高、根长、根生物量、植株总生物量及叶面积进行测量,结合石蜡切片技术和扫描电镜技术对叶片显微结构及叶片表面进行观察,测量叶片厚度,统计气孔密度及腺体密度,比较不同盐胁迫对植株生长的影响,观察乌拉尔甘草对不同盐分胁迫环境的形态和结构响应。结果表明,3种盐对乌拉尔甘草幼苗生长的盐害作用强弱顺序为Na HCO3>Na Cl>Na2SO4。Na2SO4处理极显著地促进了乌拉尔甘草根生物量和植株总生物量的积累,且随盐浓度的升高促进作用呈增加的趋势。中浓度的Na2SO4处理促进了株高的增长和根的伸长,其余浓度则呈不同程度的抑制效果。高浓度Na2SO4处理使叶片栅栏组织细胞层数增多,因此叶片厚度和比叶重相应增加。中、低浓度Na Cl处理的植株总生物量显著小于对照组,但对根生物量未造成显著影响。高浓度Na Cl处理促进了乌拉尔甘草根系的发育和根生物量的积累,使总生物量显著增加。Na Cl处理条件下的叶面积和叶片厚度显著减小。Na HCO3浓度>50 mmol/L时植株无法存活,浓度≤50 mmol/L的处理对株高和根长无显著影响,但有助于乌拉尔甘草根生物量和总生物量的积累。25 mmol/L处理显著抑制了叶片面积的增大,使叶片增厚,比叶重增加。3种单盐胁迫均促进了叶表面气孔的分化,但抑制了叶表面腺体的发育。     

水杨酸提高甘草种子萌发和幼苗生长对盐胁迫耐性的效应

The present study investigated the effects of salicylic acid treatments on morphology, physiological and biochemical parameters and their relationship to salt stress of G. uralensis Fisch seeds and seedlings. Under the salt stress of 200 mmol L^-1 NaCl, the application of 0.5 mmol L^-1 salicylic acid on G. uralensis Fisch seeds could significantly promote the elongation of radicle, increase fresh weight of seedlings, reduce the content of malondialdehyde (MDA) and proline in the radicle, and improve the activity of peroxidase (POD). Under the salt stress (i.e. 100 mmol L ^-1 and 200 mmol L^-1 NaCl), the application of 0.5 mmol L^-1 salicylic acid on G. uralensis Fisch seedling could reduce MDA and proline content, and increase the activities of superoxide dismutase (SOD), peroxidase (POD), and catalase (CAT) in different degrees. Under salt stress condition, the application of salicylic acid could increase the root glycyrrhizinic acid content. In summary, the application of salicylic acid could improve the tolerance to salt stress by alleviating the inhibition of salt stress on the germination of seeds, increasing the activity of antioxidant enzymes, and reducing the degree of membrane lipid peroxidation.