松辽黑猪IGF-Ⅰ基因5′调控区序列特征分析

对松辽黑猪类胰岛素样生长因子-Ⅰ（IGF-Ⅰ）基因5′调控区进行了T-A克隆和序列测定,在分析序列结构特征的基础上与GenBank中野猪、大白猪、牛、山羊、绵羊进行了比较基因组学和系统进化研究。结果表明：松辽黑猪IGF-Ⅰ基因5′调控区存在C/EBPb、MATal、Oct-1、CF-1等多个潜在的转录因子结合位点,可能与IGF-Ⅰ的转录调控和起始以及特异表达有关。在该非编码序列中,重复序列所占比率为2.22%,不存在SINEs、LINEs、LTR类反转录元件和DNA转座子元件,而发现存在1个（CA）18微卫星位点。在松辽黑猪IGF-Ⅰ基因5′调控区,松辽黑猪与野猪、大白猪、牛、山羊、绵羊各物种间同源性大小分别为99.0%、98.8%、90.7%、91.6%、90.6%。MUPD法构建的分子系统进化树聚类结果表明,野猪与大白猪先聚为一类,再与松辽黑猪聚类形成一个大分支,而山羊和绵羊先聚成一类,再与牛聚类形成一个大分支,然后再与猪的一支汇合在一起。     

松辽黑猪肌内脂肪沉积相关基因的筛选

为了了解松辽黑猪肌内脂肪沉积的分子遗传学机理,利用基因芯片技术对松辽黑猪群体内背最长肌肌内脂肪含量高和低的个体进行了转录分析,利用实时定量PCR对部分转录差异基因进行了检测。差异表达分析显示,共有153个基因显著变化;差异基因经GO分类显示,主要参与细胞生长与死亡、信号分子及互作、信号传导、氨基酸代谢、脂类代谢等生物学过程;所验证的IGF2、PRKAG3、UCP3基因与芯片结果基本一致。本研究为深入了解松辽黑猪肌内脂肪沉积的机理奠定了基础。     

松辽黑猪雌激素受体基因对部分繁殖性状的影响

以松辽黑猪为研究对象,采用PCR-RFLPs方法检测其雌激素受体(ESR)基因的PvuⅡ多态性,分析了该基因与产仔数及其他繁殖性状之间的关系。结果表明:ESR基因型间总产仔数(TNB)和产活仔数(NBA)差异显著(P<0.05),BB和AA纯合子间TNB和NBA分别相差2.395和2.250头;各基因型在初生窝重、20日龄重、60日龄重之间差异不显著(P>0.05)。     

松辽黑猪血液蛋白质多态性的研究

本研究采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法检测了松辽黑猪28个样本的13个血清蛋白(酶)位点。结果表明:除Alb、Pa2、Cp为单态外,Pa1、Po1、Po2、Tf、Ptf、Akp、Hpx、Am1、Am2、Es均存在多态性,分别受2～4个等位基因控制。卡方检验结果表明,Pa1、Pa2、Ptf、Akp不处于Hardy-Weinberg平衡状态,其余的Po1、Po2、Tf、Am1、Am2、Hpx、Es都处于Hardy-Weinberg平衡状态。松辽黑猪群体内有效等位基因数、遗传杂合度、以及遗传均质度分别为2.077 9、0.508 3和0.128 8。     

松辽白鹅PRLR基因5′调控区多态性研究

[目的]通过研究催乳素受体（PRLR）基因多态性,为松辽白鹅的选种与选育提供理论依据。[方法]参照鹅PRLR基因5′调控区序列设计引物,运用PCR-SSCP技术进行多态性分析。[结果]扩增片段存在多态性,得到AA、AB和BB 3种基因型,AA为优势基因型,等位基因A占主要优势;在PRLR基因5′调控区80处发生了单碱基突变（A→G）。[结论]PRLR基因5′调控区存在突变位点。     

松辽黑猪繁殖性状遗传规律的研究

对松辽黑猪繁殖性状的表型参数和遗传参数进行了分析研究,结果表明:乳头数14.11个,产仔数13.45头,产活仔数12.54头,初生窝重15.79kg,初生个体重1.37kg,断奶仔数10.04头,断奶窝重122.84kg,断奶个体重12.45kg。繁殖性状乳头数、产仔数、产活仔数、初生窝重、初生个体重、断奶仔数、断奶窝重和断奶个体重的遗传力分别为0.528,0.138,0.118,0.427,0.382,0.147,0.243,0.212。繁殖性状间的表型相关介于-0.481～0.901之间,遗传相关在-0.371～0.913之间。断奶窝重与所有繁殖性状间都存在着正的表型相关和遗传相关,因此断奶窝重可以作为松辽黑猪繁殖性状的重要选择指标。     

松辽黑猪生长发育性能研究

[目的]为松辽黑猪新品系和吉松配套系选育优质肉猪新品种提供理论依据。[方法]选取松辽黑猪,松野杂猪和杜长大三元杂交育肥猪各15头,分成3个组分别为S、Y和B组,组内设3个重复,每个重复5头猪,在同一条件下进行饲养试验,并对其生长发育性能进行测定。[结果]S组松辽黑猪的胸围发育程度明显高于Y组松野杂猪和B组杜长大三元杂交猪,差异极显著（P〈0.01）,其他指标均差异不显著;Y组松野杂猪的增重速度、发育程度、屠宰率和产瘦肉率与B组杜长大三元杂交猪相比,差异均不显著。[结论]在增重速度和产肉率方面,松辽黑猪新品系和松野杂猪新品种的选育是成功的。     

松辽黑猪×野猪杂交猪H-FABP mRNA基因的组织分布研究

[目的]研究松辽黑猪×野猪杂交猪H-FABP mRNA基因的组织分布,为探明该基因的生理功能提供依据。[方法]采用RT-PCR技术获得松野杂交猪的cDNA,经PCR扩增后对目的片段进行电泳鉴定和测序,检测H-FABP mRNA在松辽黑猪×野猪杂交猪组织中的分布情况。[结果]在选取的皮下脂肪、腹脂、乳腺、背最长肌、臂三头肌、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、回肠、十二指肠共12种组织中：H-FABP mRNA均有表达。[结论]H-FABP基因在组织中广泛分布说明了其功能的重要性及多重性。     

松辽黑猪前体脂肪细胞分离及诱导分化

为建立松辽黑猪前体脂肪细胞分化体系,了解其增殖规律及相关的脂肪标志基因在细胞分化过程中的相对表达。选用7日龄松辽黑猪,用Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织得到前体脂肪细胞,传代后进行形态学观察并绘制生长曲线,利用传统"鸡尾酒"法进行诱导分化,油红O对分化后的细胞进行染色,判断分化效果,提取总RNA,对成脂标志基因进行相对表达量分析。结果表明:分离获得的松辽黑猪原代前体脂肪细胞可贴壁生长,形似成纤维细胞,细胞生长曲线符合细胞生长规律,近似"S"形;诱导分化后的细胞具有成熟脂肪细胞的典型特征,细胞内聚集大量脂滴;诱导后第10天,细胞内甘油三酯含量极显著提高;成脂标志基因PPARγ、C/EBPα在分化后的细胞中相对表达量极显著升高(P<0.01),而FoxO1在分化前相对表达量最高,第5天表达量与第0天相比极显著下降(P<0.01),但第10天的表达量极显著高于第5天(P<0.01),且第10天表达量与第0天无显著差异(P>0.05)。试验建立了松辽黑猪前体脂肪细胞的分离体系,为进一步研究松辽黑猪脂肪沉积与代谢机制以及改善肉质提供了依据。     

松辽黑猪饲养管理技术示范推广与应用

推广松辽黑猪饲养管理技术,将松辽黑猪品种选择、仔猪保育、育肥期饲养管理、疫病防控、创立品牌黑猪肉、开展品牌认证,提高猪肉附加值等多项养殖技术集成、产品销售配套体系应用到松辽黑猪养殖生产中,提高猪的生产性能和销售价值,加快推进松辽黑猪产业化步伐.     

松辽黑猪脏器总RNA提取方法的改进及应用

[目的]改进松辽黑猪脏器总RNA的高效快速提取方法,为检测脏器组织RNA提供基础。[方法]采用液氮研磨,利用Trizol使细胞膜破裂,并通过氯仿、异丙醇、无水乙醇处理,使RNA与杂质分离,得到高质量的RNA。[结果]得到的松辽黑猪脏器总RNA浓度和纯度都比较高,并且未被降解。[结论]该方法提取的RNA质量没有DNA污染、纯度高、没有降解、完整性好,稳定可靠,并且用时少。     

新疆野猪mtDNA控制区序列遗传多样性分析

[目的]为研究猪种起源和遗传分化提供依据。[方法]从6个新疆野猪样本中提取基因组DNA,克隆线粒体DNA控制区序列并进行测序。在测定新疆野猪与其他20个国内外猪种间的遗传距离的基础上,对其进行聚类分析。[结果]通过PCR扩增克隆到大小为1398bp的DNA片段,其A+T含量为59.87%,有明显的碱基偏向性。控制区内存在大量的ACACGTGCGT串联重复序列。在6个新疆野猪样本中检测到3个单倍型。群体平均单倍型多样度(H)为0.600,核苷酸多样度(π)为0.00086。聚类分析结果表明新疆野猪与滇南小耳猪、泰国野猪和藏猪具有较近的遗传关系。[结论]新疆野猪与亚洲野猪和中国地方猪种有较近的遗传关系。     

用高通量测序技术研究松辽黑猪与长白猪背最长肌mRNA和lncRNA的差异表达

【背景】肌肉生长和脂肪沉积是猪生产中非常重要的经济性状,同时也是复杂的数量性状,受到众多因素的影响。长白猪原产于丹麦,是目前世界上使用最为广泛的瘦肉型猪种之一,具有生长速度快,瘦肉率高等特点,但肉质欠佳。松辽黑猪是以民猪、长白猪和杜洛克猪为素材经过三元杂交育成的黑色母系地方培育品种,具有繁殖率高、肉质优良、适应性强、耐粗饲等特性。二者在肉质方面存在较大差异。【目的】采用高通量测序技术对松辽黑猪和长白猪的背最长肌转录组进行分析,筛选影响猪肌肉生长、肉质和脂肪沉积的关键mRNA和长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA),为猪肉品质研究提供新的参考信息。【方法】采集6头松辽黑猪和6头长白猪的背最长肌作为样本,提取其RNA,将每个品种内的个体取等量RNA混池,采用Illumina HiSeq 2500高通量测序技术对混池后的样本RNA进行测序,然后对所获得的Reads进行比对、注释和差异表达等分析,筛选出差异表达mRNA和lncRNA并进行相关生物学功能富集分析。而后在筛选出的差异表达mRNA和lncRNA中各挑选10个基因,包括5个上调基因和5个下调基因,采...     

三个猪品种Myf5基因的克隆及序列分析

为明确猪Myf5基因的蛋白结构及功能位点,从香猪、大白猪和大白×长白杂交猪背最长肌提取总RNA,采用RT-PCR技术克隆Myf5基因,其cDNA长893 bp,包括完整的开放阅读框768 bp,编码255个氨基酸。将所测序列与GenBank上已知猪种序列进行相似性比较,结果表明:香猪Myf5基因中有3个碱基变异,其中2个突变不改变编码的氨基酸为无义突变,1个突变使其编码的氨基酸由甲硫氨酸(M)变为亮氨酸(L)。大白猪没有碱基变化;大白×长白杂交猪Myf5基因中的1个突变,使其编码氨基酸由甘氨酸(E)变为谷氨酸(G)。将香猪与其他物种进行核苷酸和氨基酸编码区序列的相似性分析及生物信息学分析。相似性分析表明,香猪Myf5基因氨基酸编码区序列与绵羊、牛、马、兔、黑猩猩、非洲象和小鼠的相似性较高,均在88%以上,推测Myf5基因在哺乳动物具有一定的保守性;Myf5蛋白二级结构以无规则卷曲为主,其次为α螺旋,偶有β转角。预测Myf5蛋白不含信号肽序列,有29个磷酸化位点。     

百宜黑鸡与长顺绿壳蛋鸡线粒体DNA控制区全序列分析

采用PCR和直接测序的方法测定百宜黑鸡和长顺绿壳蛋鸡线粒体DNA控制区全序列,并分析mtDNA D-loop序列3个区的变异。结果表明,百宜黑鸡和长顺绿壳蛋鸡mtDNA控制区全序列长度分别为1 231 bp、1 230 bp,2种贵州地方鸡之间,mtDNA D-loop序列Ⅰ区序列变异率为4.43%,变异速率最快,其他两区的变异率分别为:Ⅱ区0.64%,Ⅲ区1.56%。百宜黑鸡mtDNA控制区的碱基含量分别为A 27.10%、T 33.63%、G 13.12%、C 26.16%,长顺绿壳蛋鸡的碱基含量分别是A 27.13%、T 33.58%、G 13.20%、C 26.09%。百宜黑鸡和长顺绿壳蛋鸡的遗传距离是0.036 2,根据分子钟计算,二者大约在181万a前分歧进化。     

贵州务川黑牛线粒体DNA D-loop区全序列分析

务川黑牛是贵州省新近发现的独特地方品种,其起源和系统地位尚存争议.为了解其遗传多样性及遗传背景,该研究测定了22头务川黑牛个体的线粒体D-loop区全序列.结果表明:22头务川黑牛个体中存在51个核苷酸多态位点,碱基组成中A+T含量大于G+C含量;共检测到11种单倍型,核苷酸歧异度(π值)为5.475%,单倍型多样性Hd为(0.909±0.044),表明务川黑牛线粒体DNA D-loop高变区具有丰富的多态性;系统分析表明务川黑牛同时受普通牛和瘤牛的影响.