鸡热应激与热应激蛋白的作用机理研究

高温导致畜禽热应激问题的危害正日益突出并倍受关注。针对这些问题本刊推出“热应激专栏”,目的是为缓解夏季普遍存在的畜禽热应激提供理论和技术支持,使从业者能通过一些技术手段来规避热应激带来的损失。由于时间的仓促,本期组织的稿件内容覆盖面不是很全,但是以后会陆续推出有关内容,希望大家能继续关注。同时我们也希望专家、学者能踊跃地发表真知灼见与广大读者分享,把热应激理论、防制调控推到一个更高的阶段。     

中草药防治鸡热应激研究概况

叙述了夏季炎热气候条件下,鸡饲料中添加单味中草药、复方中草药和中西药物防治鸡热应激的研究概况,认为中草药能够缓解鸡热应激,提高生产性能,值得推广应用。     

鸡热应激的营养调节

根据鸡的生理特性和热应激时的代谢特点,采用在饲料中添加抗应激添加剂和调整饲料的营养标准,提高鸡的抗热应激能力和生产能力.     

热应激死亡鸡病理变化观察

对自然热应激和实验性热休克死亡鸡的病理学观察表明，其一致性的变化为肺充血、出血，呼吸毛细管与肺房结构损伤，肺气－血屏障有明显超微结构破坏；脑膜血管充血，神经细胞肿胀变性，延脑神经原细胞器肿胀、融解、变性；肾上腺皮质与髓质细胞超微结构变性、坏死，髓质细胞明显脱颗粒；卵泡膜和输卵管粘膜充血；肝淤血。肺与延脑神经细胞病变为热休克直接死因─—呼吸衰竭的结构基础；肾上腺细胞的病变是急性热休克肾上腺功能衰竭的结构基础。     

热应激时鸡糖皮质激素受体和热休克蛋白的变化

本研究应用3H-Dex放射配体结合的Scatchard分析和35S-蛋氨酸体外标记法分别测定了环境温度40℃热应激时,鸡外周血淋巴细胞(PBL)的糖皮质激素受体(GR)的最大结合容量(Ro)、平衡解离常数(Kd)及其热休克蛋白的表达。结果显示在热应激处理后0．5～4h鸡PBL、GR、Ro从85．75±10．09fmol／107细胞迅速下降至15．34±2．89fmol／107细胞。仅为正常对照组Ro的17．90％(P＜0．01)。与此同时细胞热休克蛋白(HSP)的合成持续增加,主要有HSP100,HSP90,HSP70和HSP25。而在热应激最初0．5h细胞总的蛋白合成急剧下降,随着应激时间的延长,HSP合成的增多,细胞总的蛋白也逐渐恢复。提示HSP在热应激过程中对细胞结构和机能的重建、维持激素与GR的亲合力,稳定受体蛋白结构,提高机体热耐受力具有重要意义。     

鸡的热应激及其调控措施

夏季高温造成的热应激成为养鸡生产的主要问题。本文主要综述热应激对鸡采食量、日粮消化率、骨骼生长、营养物质代谢、内分泌、免疫机能及热应激蛋白含量的影响,并对鸡抵抗热应激提出调控措施。     

热应激对鸡免疫器官组织学影响的研究

伊莎蛋雏鸡接种新城疫两种类型疫苗,热应激可导致其免疫器官组织学结构发生水肿,萎缩和细胞坯死病变,但免疫后２９ｄ,病变有一定恢复,水肿消失。     

陆川猪PDK4基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

试验旨在了解陆川猪丙酮酸脱氢激酶4（pyruvate dehydrogenase kinase 4,PDK4）基因CDS区序列信息及其所编码蛋白的结构和功能,构建PDK4基因的真核表达载体,分析PDK4基因在陆川猪不同组织中的表达情况,以期为阐明PDK4基因在陆川猪生长发育过程中的分子机制奠定基础。采用RT-PCR技术扩增陆川猪皮下脂肪PDK4基因CDS区,利用生物信息学软件预测分析其结构与功能,并利用常规分子克隆技术将其插入真核表达载体中获得pEGFP-N1-PDK4,用脂质体法将重组质粒转染3T3-L1细胞并观察荧光,用实时荧光定量PCR检测PDK4基因mRNA在陆川猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、皮下脂肪中的表达情况。结果显示,陆川猪PDK4基因CDS区全长1 224 bp,编码407个氨基酸,与NCBI上公布的野猪PDK4基因CDS区同源性达99.8%。对陆川猪PDK4基因所编码的蛋白进行生物信息学分析发现,其分子质量约为46.144 ku,原子总数为6 509个,理论等电点（pI）为7.21,带正电荷和负电荷的氨基酸数均为42个。PDK4蛋白可能有2个N-糖基化位点、33个磷酸化位点。亚细胞定位结果发现,PDK4蛋白有34.8%存在于线粒体,30.4%存在于细胞质,26.1%存在于细胞核,质膜和液泡膜各占4.3%。细胞试验发现,对照组和试验组均发出荧光,相较于对照组,试验组中PDK4表达量极显著升高（P<0.01）,PDK4基因在皮下脂肪中表达丰度最高,随之为肝脏、肺脏、心脏、脾脏和肾脏,在背最长肌中表达量最低,而且在皮下脂肪中的表达量极显著高于背最长肌（P<0.01）。本试验成功扩增出PDK4基因CDS区并构建了真核表达载体,成功对其结构和功能进行预测分析,为研究陆川猪皮下脂肪沉积的遗传改良提供了参考依据。     

鸡热应激的综合防治措施

鸡热应激严重危害养鸡业的发展,是目前养鸡业急需解决的难题之一.笔者根据长期的技术指导和实践经验,就鸡热应激的产生原因、临床症状、病理变化、诊断方法、综合防治措施等方面做一概述,以供广大养殖户和兽医临床工作者参考.     

鸡热应激的综合防治措施

鸡热应激严重危害养鸡业的发展，是目前养鸡业急需解决的难题之一。笔者根据长期的技术指导和实践经验，就鸡热应激的产生原因、临床症状、病理变化、诊断方法、综合防治措施等方面做一概述，以供广大养殖户和兽医临床工作者参考。     

鸡Smad4基因克隆、生物信息学及组织表达分析

试验旨在克隆鸡Smad4基因,并对其进行生物信息学和组织表达分析。以苏禽3号优质黄羽肉鸡为试验对象,使用RACE技术扩增并克隆了鸡Smad4基因全长序列,对其进行生物信息学分析,构建系统进化树,并利用实时荧光定量PCR检测了Smad4基因在鸡各组织中的表达情况。结果显示,鸡Smad4基因全长序列包含17 bp的5'UTR、1 842 bp的开放阅读框和466 bp的3'UTR,有11个外显子和10个内含子,mRNA序列全长2 325 bp,可编码613个氨基酸。系统进化树显示,鸡Smad4与其他鸟类聚为一类。生物信息学分析显示,Smad4蛋白分子质量为65.43 ku,理论等电点为10.04,为亲水蛋白;含有2个保守结构域：MH1和MH2;二级结构由α-螺旋（18.11%）、延伸链（17.29%）和无规则卷曲（64.60%）组成。组织表达分析表明,Smad4基因在鸡的心脏、肝脏、空肠、卵巢中均有较高表达,而在胸肌中不表达。本试验成功获得了鸡Smad4基因全长序列,并初步研究了其组织表达规律,为进一步研究Smad4基因在鸡繁殖活动中的分子机制提供了理论依据。     

利用添加剂抗鸡热应激的研究进展

热应激对鸡的危害极为严重。随着对热应激产生机理的不断揭示,利用各类添加剂鸡热应激的研究进展迅速。本文系统介绍了镇静剂、电解质、维生素、中草药等添加剂抗鸡热应激的理论基础及其在实践中的应用。     

维生素缓解鸡热应激的最新研究进展

本文论述了应激中激素的分泌的变化、维生素在动物代谢中的作用以及添加维生素C、维生素E等对缓解鸡的热应激的作用，指出在日粮中添加维生素的重要性。尤其是在热应激状态下，给鸡补饲维生素可获得明显的效果。     

CPT1A基因在广西麻鸡的表达研究

该研究旨在阐明CPT1A基因在广西麻鸡组织表达和时序表达谱,为研究鸡体内脂肪代谢提供一定的基础资料.选取胚胎期到性成熟时的广西麻鸡,在不同发育时间点采集胸大肌、腓肠肌、心脏和肝脏组织样品,利用实时荧光定量方法,分析CPT1A基因在不同组织不同发育阶段表达规律.组织表达结果显示,CPT1A在广西麻鸡不同发育阶段4种组织中...     

京海黄鸡G蛋白偶联受体1基因生物信息学及组织表达分析

试验旨在研究参与激素调节并调控卵巢功能的可能基因,挑选候选基因G蛋白偶联受体1（G protein-coupled receptor 1）,深入研究其是否参与激素调节。根据转录组测序获得的京海黄鸡GPR1基因的CDS序列设计一对引物,利用实时荧光定量RT-PCR方法,检测GPR1基因在高、低产京海黄鸡卵巢组织中的表达情况,并与生物信息学进行关联,使用多种生物软件和在线工具对目的序列进行生物信息学分析,分析GPR1基因与其他物种的同源性、蛋白质的理化性质、蛋白质序列的跨膜区、亚细胞定位、亲水性、潜在的磷酸化位点、保守结构域及该基因所编码蛋白质的二、三级结构。结果显示,京海黄鸡与GenBank中原鸡、人、牛、野猪、黑猩猩、家兔、马、绵羊、藏羚羊、大鼠、小鼠、斑马鱼的同源性分别为100.0%、69.0%、69.1%、69.3%、68.9%、69.6%、69.2%、68.8%、68.9%、67.5%、69.0%和50.3%;氨基酸分析发现GPR1蛋白为疏水性蛋白,分子质量为40.41 ku,理论等电点为6.91,为7次跨膜蛋白;亚细胞定位显示,该蛋白属于非分泌蛋白;预测该蛋白含有25个潜在的磷酸化位点,1糖基化位点;二级结构以无规则卷曲为主,三级结构为7次跨膜螺旋结构;组织表达分析显示,GPR1基因在低产组的表达情况极显著高于高产组（P<0.01）。本试验结果将有利于GPR1基因功能的进一步分析,为研究该基因对京海黄鸡产蛋性状的调控机理提供理论依据。     

鸡传染性贫血病毒衣壳蛋白的原核表达及免疫原性分析

将从组织病料中提取的鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)核酸进行PCR扩增,获得vp1基因,将其克隆到表达载体pET32a(+)中,构建了CIAV vp1基因重组质粒,命名为pET32a-vp1。将 pET32a-vp1转化E.coli plys,重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE分析结果表明,vp1基因在大肠杆菌中成功表达。纯化的蛋白质作为包被抗原,ELISA鉴定结果表明具有良好的抗原性。本试验结果为进一步研究用重组抗原制备CIAV ELISA诊断试剂盒奠定了基础。     

藏鸡CCL4基因克隆及组织表达谱研究

为探究C-C基序趋化因子配体4(C-C motif chemokine ligand 4,CCL4)基因特点及其在藏鸡各组织中表达水平差异情况。以藏鸡作为研究对象,使用RT-PCR技术克隆藏鸡CCL4基因并进行生物信息学分析,然后利用qPCR技术检测CCL4在藏鸡不同日龄不同组织中的表达情况并构建组织表达谱。结果表明:藏鸡CCL4基因长度为633 bp,其中开放阅读框长270 bp,编码89个氨基酸;藏鸡CCL4基因的核苷酸和氨基酸序列与原鸡同源性为100%;CCL4基因在藏鸡的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏和腿肌中均有表达,在脾脏中表达量相对较高。该研究为进一步了解CCL4基因的功能和藏鸡的免疫特性提供理论依据。     

营养因子对降低鸡热应激的研究进展

本文从调控日粮中有关维生素（VE、VC等）、无机元素（Cr、Na、K等）、能量浓度、氨基酸平衡以及应用中草药添加剂等营养角度，全面综述了营养因素对降低鸡热应激的研究进展。