鸭RIG-1基因的PCR扩增及其序列分析

维甲酸诱导基因1(RIG-1)是细胞质中侦测病原相关分子模式的识别受体。论文旨在扩增北京鸭RIG-1编码基因,并对其进行序列分析。通过PCR方法,从北京鸭脾脏中扩增得到RIG-1基因cDNA,并使用LaserGene分子生物学分析软件进行序列分析。结果发现北京鸭的RIG-1基因cDNA开放阅读框全长2 802bp,编码933个氨基酸。结构预测发现鸭RIG-1结构与哺乳动物类似,N端有两个串联CARD区,中间为DExD/H解旋酶区,C端为抑制区,各功能区起重要作用的氨基酸较为保守。同源性及进化树分析发现鸭RIG-1与鹅和斑马鱼的同源性最高分别为93.7%、78.4%,与哺乳动物同源性高于50%,与其他鱼类的同源性低于50%。成功扩增出北京鸭RIG-1基因cDNA编码序列,为鸭RIG-1的深入研究奠定了基础。     

大肠杆菌pSLM_(004)质粒的酶切分析及其肠毒素ST_Ⅰ基因探针的制备

利用硷变性及羟基磷灰石柱层析法提纯了大肠杆菌pSLM004质粒,经酶切分析证实了耐热肠毒素(STⅠ)基因片段在pSLM004中的定位,并成功地分离回收了STⅠ基因片段;采用随机引物法对STⅠ基因片段进行了α-32P标记,成功地制备了STⅠ基因探针,菌落杂交效果良好。     

鸡大肠杆菌traT基因的扩增及TraT-DIG探针制备

以致病性Ｅ．ｃｏｌｉ的质粒为模板,用人工合成引物扩增出致病性相关的ｔｒａＴ基因核心部分;将菌株的致病性与ｔｒａＴ基因的扩增结果进行比较,强致病力菌株均扩增出ｔｒａＴ基因,无致病力菌株未扩增出ｔｒａＴ基因,约大多数中等致病力菌株亦扩增出ｔｒａＴ基因。扩增获得的ｔｒａＴ基因经纯化后标记地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｎ,ＤＩＧ）研制出ｔｒａＴ－ＤＩＧ基因探针,该探针与鸡沙门氏菌、鸡白沙门氏菌、副伤寒沙门氏菌不发生     

猪链球菌EF基因的PCR扩增

了解近年来猪链球菌甘肃分离株的毒力基因--细胞外蛋白因子(EF)的分布情况,为猪链球菌EF基因的功能研究奠定基础。成功检测出甘肃分离株中所含的EF基因,其检测的EF片段大小与预期结果相符。     

禽流感病毒核蛋白基因探针制备及其初步应用

将禽流感病毒Ｈ９Ｎ２ 亚型毒株核蛋白（ＮＰ）基因３′端较为保守的、约３５０ｂｐ 的编码序列通过限制性内切酶ＨａｅⅢ切割、分离后,用随机引物法制备Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ１１ｄＵＴＰ标记探针。测定该探针的浓度为１００μｇ／ｍ ｌ。特异性试验发现该探针只能与实验室构建的、含有ＮＰ基因的重组载体ｐＧＥＭＴＥＮＰ和ｐＢａｃＰＡＫＮＰ以及Ａ 型流感病毒Ｈ９Ｎ２亚型、Ｈ３Ｎ２ 亚型以及Ｈ９Ｎ３ 亚型毒株基因组ＲＮＡ 结合出现特异性的颜色反应,而与实验室常用的载体ｐＧＥＭＴ ｅａｓｙ、ｐＢａｃＰＡＫＨｉｓ ３、ｐＴＡＲＧＥＴ 和ｐＧＥＭＥＸ２ 以及新城疫病毒、传染性支气管炎病毒和传染性喉气管炎病毒基因组不发生反应。应用该探针检测含ＮＰ基因的重组载体和重组病毒证明该探针是有效的,可用于含禽流感病毒样品或材料的检测。     

多重连接探针扩增技术及其在疾病诊断中的应用

多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)是将核酸杂交和PCR链式扩增相结合的一项高通量检测技术。自2002年首次报道以来,该技术的研究和应用取得了很大进展,目前已广泛用于遗传性疾病的基因检测、肿瘤预后及病原生物高通量检测领域。介绍了多重连接探针扩增技术的原理,探讨了该技术在疾病诊断中的应用,以期为多重连接探针扩增技术的科学合理应用提供参考。     

上转换荧光纳米探针的制备及其在染料检测上的应用

本文通过溶剂热法,成功地制备了Yb~(3+)和Er~(3+)共掺杂的Na Gd F_4上转换纳米晶。它具有特殊的发光性能,经过表面修饰后,该纳米晶具有良好的生物兼容性,被应用到检测罗丹明B染料上。结果表明,上转换纳米晶和罗丹明B结合,发生共振能量转移,为检测染料提供了一种新的高效途径。     

茶叶基因PCR扩增条件研究

本文对茶叶基因PCR扩增条件进行了研究，并对其结果进行了分析。     

应用PCR制备口蹄疫病毒核酸探针的研究

以口蹄疫病毒核酸为模板。在 AMV 反转录酶及底物的作用下合成cDNA,经聚合酶链反应(PCR)直接将生物素化脱氧核苷酸(Bio-11-duTP)掺入底物进行扩增,其产物即为寡聚核苷酸探针。将此探针应用于斑点杂交试验。检测口蹄疫病毒.     

中国林蛙Sox基因的PCR扩增

以特异扩增人SRY基因HMG -box保守区的一对引物 ,扩增了中国林蛙Sox基因(SRY -boxgene)。结果表明 ,雄性中国林蛙扩增出了两条带 ,分子长分别为 2 5 0bp和 60 0bp ,而雌性个体中未见扩增带 ,显示了中国林蛙Sox基因在雌雄性别间有差异。本研究为探讨中国林蛙的性别决定机制及性别控制的早期鉴定提供了分子依据     

普通PCR与降落PCR扩增OMPH基因的比较

为了研究牦牛源多杀性巴氏杆菌(C47-8)OMPH基因,试验采用试剂盒法提取菌株基因组DNA,比较了降落PCR与普通PCR扩增OMPH基因片段的特点。结果表明:扩增出的特异性条带与目的基因片段长度一致,普通PCR法未扩增到OMPH基因片段,降落PCR法扩增出特异性高的OMPH基因片段;在相同的反应体系中,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,它可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性。     

PCR扩增invA基因特异性检测沙门氏菌

建立了扩增invA基因检测沙门氏菌的PCR方法。对收集的50个血清型123株沙门氏菌及7种27株非沙门氏菌进行PCR,2％琼脂糖电泳检查,结果所有沙门氏菌都扩增出了300bp的特异性产物,非沙门氏菌都未扩增出此目的条带。产物的特异性由slot blot杂交进一步证实。通过电泳判定结果,该法可检出扩增体系中10pg染色体DNA及10~2cfu的纽波特沙门氏菌50029。为下步克隆而设计的两个酶切点（Bam HI,Eco RI）对引物的特异性没有影响。本研究为沙门氏菌的检测提供了简洁、敏感、特异的新方法,同时为克隆invA基因做属特异性探针打下了基础。     

应用RT－PCR扩增犬瘟热病毒融合蛋白基因

应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增犬瘟热病毒融合蛋白基因犬瘟热病毒具有６种结构蛋白，包括核衣壳蛋白（Ｎ）、基质膜蛋白（Ｍ）、磷蛋白（Ｐ）、附着或血凝蛋白（Ｈ）、融合蛋白（Ｆ）和大蛋白（Ｌ），其中Ｈ和Ｆ为病毒表面的糖蛋白，而Ｆ是刺激机体产生免疫保护的主要成分。我们根...     

狍Sry基因PCR扩增的初步研究

为研究狍性别决定机制,采用聚合酶链式反应(PCR)技术对野生狍(Capreoluscapreolus)(n♀=2,n♂=2)Sry基因(哺乳动物Y染色体DNA雄性特异区)进行扩增。根据人的SRY基因核心序列设计合成了1对引物1,2。结果在野生狍雄性个体中扩增出1条带,大小约为220bp,而在雌性个体中未见扩增带,表明了Sry基因的性别特异性,为探讨野生狍的性别决定机制提供了分子资料。     

用PCR扩增兔SRY基因的研究

用家兔外周血提取基因组DNA,根据欧洲家兔SRY基因的cDNA序列中开放性阅读框部分设计引物,采用PCR技术对基因组DNA进行了SRY基因检测。结果显示,SRY基因(+)是雄性决定基因,这对于幼兔的性别鉴定、性别选择及在胚胎时期诊断性连锁疾病有重要意义。     

ST_1肠毒素基因的合成、克隆及其融合蛋白的高效表达

用ＤＮＡ合成仪合成了编码ＳＴ１肠毒素第５８到７２位氨基酸残基的ＤＮＡ片段,并将其与表达融合蛋白的载体ＰＧＥＭＥＸ－１重组,转化受体菌ＪＭ１０９（ＤＥ－３）。筛选出的重组克隆经过１ＰＴＧ４小时诱导,ＳＴ１融合蛋白的产量超过超过细菌蛋白总量的４０％,最高达５９．９％。     

应用RT—PCR技术扩增禽传染性支气管炎病毒S1基因的研究

选择Ｓ１基因做为目的基因,运用ＲＴ－ＰＣＲ技术分别扩增１２株以非免疫鸡胚繁殖并通过超速离心浓缩的鸡胚尿囊液中的ＩＢＶ,所用引物为ＩＢＶ Ｂｅａｕｄｅｔｔｅ株Ｓ１基因两侧的对应序列,跨幅为１．７２ｋｂ。结果６株ＩＢＶ毒株（ＳＡＩＢ３、Ｆ、Ｄ４１、Ｈ５２、Ｈｏｌｔｅ）扩增出了长约１．７ｋｂ的Ｓ１基因片段,而另６株ＩＢＶ毒株虽经４次ＲＴ－ＰＣＲ重复后也显阴性。用ＨａｅⅢ内切酶对６个毒株的ＲＴ－ＰＣＲ产物