鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究：I R1—23菌株的筛选

试验以本所历年来分离、收集、保存的多株禽源多杀性巴氏杆菌菌种为选种素材，以各菌株的培养特性、菌落形态、菌落虹彩、生化反应及其在历次传代过程中的稳定性为选种依据，初步筛选出四个菌株，代号为：Ｒ１－２３、Ｒ１－２４、４１－３９和Ｒ１－６５。经过皮下注射安全量、口服耐受量、近期免疫效和毒力稳定性比较测试后，筛选出一株既适应鸡口服免疫又具有良好免疫原性的自然弱毒菌株－Ｒ１－２３菌株（５：Ａ）。该菌株的皮下     

鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究ⅢR_1—23口服苗两次饮水免疫剂量与间隔时间的选择

通过不同饮苗剂量组合和不同时间间隔组合的选择试验，确定Ｒ１—２３固体培养弱毒活菌苗两次饮水免疫的最适总剂量为每只５０亿个活菌即２５亿＋２５亿饮苗剂量组合。两次饮苗的最佳间隔时间为４８小时。免疫鸡以每只初次饮服２５亿个Ｒ１—２３活菌后，间隔４８小时再饮服２５亿个Ｒ１—２３活菌的方法免疫，可产生９０—１００％的近期免疫保护率。     

鸡霍乱口服弱毒苗研究近况

鸡霍乱口服弱毒苗研究近况■刘学贤（江苏省家禽科学研究所禽病研究室２２５００３）作者首先从收集、保存的若干株禽源多杀性巴氏杆菌中初选出四个弱毒菌株，经过口服耐受量比较试验、颈部皮下注射毒力测试、近期免疫力试验和毒力稳定性对比试验后，筛选出一株既适应鸡口...     

赖链霉素多杀性巴氏杆菌菌苗免疫安全和遗传稳定性研究

赖链霉素多杀性巴氏杆菌ＳＤ７２４菌苗株在鸡的适当免疫量为２亿个菌，７次近期免疫力试验，鸡的平均保护率为９１％，免疫期达５个月；该株经半固体培养基继代３０代或易感鸡继代５代后，链霉素依赖性稳定不变，毒力无返强现象；对鸡注射４００亿个菌安全无死亡，田间试验安全性好。免疫同时注射链霉素，比不注射链霉素的鸡具有更高的保护率。从而提出新设想：通过调节动物体内的链霉素含量，能控制ＳＤ菌苗对动物体的免疫强度。     

鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究：ⅢR1—23口服苗两次饮水免疫剂量

通过不同饮苗剂量组合和不同时间间隔组合的选择试验，确定Ｒ１－２３固体培养弱毒活菌苗两次饮水免疫的最适总剂量为每只５０亿个活菌即２５亿＋２５亿饮苗剂量组合。两次饮苗的最佳间隔时间为４８小时。免疫鸡以每只初次饮服２５亿个Ｒ１－２３活菌后，间隔４８小时再饮服２５亿个Ｒ１－２３活菌的方法免疫，可产生９０－１００％的近期免疫保护率。     

A型(群)猪肺疫CA株弱毒菌苗的研究

根据血清型相同而进行交互免疫试验,筛选出的 A 型(群)猪肺疫 CA 株弱毒菌苗,以3—4亿个活菌免疫猪,安全性为100%,保护率100%,免疫期达9.5个月。对猪的最小免疫剂量为2000万个活菌,最大安全剂量为200亿个活菌,在猪体连传6代毒力无返强现象。该菌株对5:A 和8:A 菌株均有良好的免疫力,共用15批菌苗在14个县、市免疫各类猪只33.7万头,表现安全,免疫力可靠。     

A型猪肺疫CA株弱毒菌苗的研究

将从我国常用的五株禽霍乱弱毒株中筛选出的731弱毒菌株(简称CA株)制备的菌苗,以3～4亿活菌免疫猪,极为安全,保护率100％,免疫期达9.5个月。对猪的最小免疫剂量为2 000万活菌,最大安全剂量为200亿活菌,在猪体连传6代毒力无返强现象。共用15批菌苗在14个县、市免疫猪只33.7万头,表现安全,免疫力强。     

牦牛副伤寒突变型菌株NG／UV—8的培育及免疫原性测定

应用诱变剂亚硝基胍(NG)和紫外线(UV)交替诱变处理法,诱变牛病沙门氏菌S.301株,筛选出一株突变型菌株—NG/UV-8。该菌株减毒情况良好(比母源S.301株毒力降低10～15倍),经培养基传10代、20代,豚鼠传5代后,其毒力、生理生化性质、抗原特性等遗传性状一直保持稳定。用该菌1.15亿,0.58亿个菌免疫小白鼠,能100％的抵抗2个MLD母源S.301株的攻击,用5.76亿个菌免疫豚鼠能75％的保护2个MLD母源S.301株的攻击。该菌株有希望成为预防牦牛副伤寒菌苗的候选菌苗株,有在本动物(牦牛)进一步作免疫保护试验的价值。     

鸡霍乱口服弱毒菌株的选育及其性能的研究

应用选育的禽多杀巴氏杆菌自然弱毒菌株──Ｒ１－２３菌株经固体培养方法制备鸡霍乱口服弱毒活苗。试验测得该口服活苗每羽一次性饮水安全量在１００００亿个活菌以上，至少相当于正常饮水免疫剂量的２００倍。试验测得该苗口服免疫的近期保护车（二次饮苗间隔４８小时组）分别是：浅层静置培养弱毒活苗平均为７６．２％（６批次），深层通气培养弱毒活苗平均为８４．４％（１０批次），因体培养弱毒活苗平均为９３．３％（３批次）。     

猪丹毒QL251弱毒株安全性及免疫原性试验

猪丹毒ＱＬ２５１弱毒株是我所保存的猪丹毒强毒菌种Ｃ４３００９的变异株，对其进行了毒力和免疫原性的测定，该菌株毒力原来是３－５个活菌可致死小白鼠，现在对小白鼠皮下注射７．４×１０~８活菌，小白鼠全部健活，对敏感猪皮下注射９．４×１０~（１０）活菌均健活且无任何反应；小白鼠免疫９－１２个活菌７２％保护，对猪免疫２９０－５９０×１０~４活菌１００％保护。     

鸡霍乱口服弱毒疫苗的研究

用经过选择的离多杀巴氏杆菌自然弱毒株Ｒ１－２３菌株制成的鸡霍乱固体培养口服弱疫苗，其安全剂量接近于２００个免疫剂量，该口服疫苗两次饮水免疫的最适总剂量为每羽５０亿个活菌，最佳间隔时间为４８小时，免疫鸡第二次饮苗第３天即可产生较好的免疫保护率（７／８），免疫鸡对异型强毒株Ｐ１０５９（８：Ａ）Ｐ２７２３（９：Ａ）和同型强毒株Ｃ４８－１（５：Ａ）滴鼻攻击的近期保护率平均为５／１６，６／１０，和９／１０，     

布氏杆菌病M5-90弱毒菌苗研制成功

中国农科院哈尔滨兽研所,在鸡胚层纤维细胞上培育成功了 M_5—90弱毒菌株。该菌株残毒力低,稳定性好,不变异,毒力不增强。菌苗使用剂量:牛皮下注射为250亿菌;羊、鹿滴鼻为10亿菌。经效检证实,其免疫力为75—100%。免     

口服猪肺疫弱毒菌株(G165)的试验研究

1975年,我们将G30菌株继续通过鸡体传至165代,培育出一株免疫原性良好,毒力较为稳定的口服猪肺疫弱毒菌株(简称G165)。现将本菌株的培育过程、毒力、免疫原性、稳定性和免疫持续期等项试验报告如下: 一、G165弱毒菌株的培育过程将G30菌株划线接种于含0.1—0.2%裂解全血的马丁琼脂平皿上、37℃培养16—24小时,在显微镜下选择5个以上Fg型菌落,接种于马丁汤内,在37℃培养20—24小时,取培养液5—10毫升,经静脉接种2—3月龄的雏鸡。接种后鸡只呈     

鸭、鹅饮水免疫用的禽霍乱活菌苗

选用一株免疫原性好的禽源多杀性巴氏杆菌弱毒菌株,其代号为1010,进行鸭、鹅饮水免疫试验。不同日龄鸡、鸭、鹅共133只,经口服感染1010活菌后,均未见有任何临床症状。5日龄雏鸭饮服活菌3.2亿、21日龄雏鸭饮服活菌高达380亿,成年鸭饮服活菌高达1170亿,均无反应。青年鹅饮服活菌590亿,鸡口服460亿活菌,也均无反应,生长发育正常。鸭、鹅共34只,每只饮服525—590亿活菌后72小时起,各脏器、上呼吸道、消化道粘液及内容物均分离不到本菌,说明鸭鹅饮服大量1010活菌,72小时后,禽体内已不带菌,证明该弱毒株对口服途径感染,已失去其强烈的侵袭特性。本弱毒株连续通过鸡体5代,也不增强其毒力。在饮水免疫方法比较试验的结果中充分肯定了鸭饮水一次后间隔5天复饮一次的饮水免疫方法,所产生的免疫力最佳。在10个试验组中,有8个组的试验鸭的保护率达100%,有两个组达80%。鸭两次共饮服50亿活菌后第8天,即可产生坚强的免疫力,其免疫期至少可达8个月。九年多来,在野外应用了液体苗及冻干苗共三百余万只剂,所有鸭鹅饮苗水后均无反应,产蛋禽饮苗水后,也不影响产蛋,在禽霍乱病群中应用,可迅速的扑灭此病,在健康群中使用,不会因用活菌苗后引起传播此病。所有室内外试验结果都充分的征明1010弱毒活菌苗安全可靠、效力确实,可以投产使用。     

流产布鲁氏菌疫苗候选株RB6生物学特性研究

为了开发布鲁氏菌病新型标记疫苗,本研究对流产布鲁氏菌基因缺失株RB6的培养特性、染色特性、凝集特性、稳定性及小鼠体内毒力和免疫保护力进行了系统鉴定,旨在阐明该菌株具备的生物学特性。通过对亲本菌株和RB6的比较,发现固体培养基上RB6菌株单菌落可被结晶紫染成紫色,RB6菌株液体培养物可与0.1%吖啶黄染料以及抗布鲁氏菌粗糙型抗体发生凝集反应,证明该菌株为粗糙型。将RB6菌株在体外连续传代培养20次和牛体内连续5次继代,检测结果证明其表型未发生变化,说明该菌株遗传稳定性良好。通过小鼠体内试验发现该菌株毒力显著降低,并对流产布鲁氏菌强毒菌株2308攻毒的免疫保护力与现有疫苗A19接近。本研究结果表明,流产布鲁氏菌基因缺失株RB6为粗糙型菌株,毒力较低、安全性高、遗传性状稳定,并具有良好的免疫保护效力,有望开发成为动物布鲁氏菌病粗糙型标记疫苗。     

鸡霍乱口服弱毒疫苗的研究

用经过选择的禽多杀巴氏杆菌自然弱毒菌株Ｒ１－２３菌株制成的鸡霍乱固体培养口服弱毒疫苗，其安全剂量接近于２００个免疫剂量。该口服苗两次饮水免疫的最适总剂量为每羽５０亿个活菌，最佳间隔时间为４８小时。免疫鸡第二次饮苗后第３天即可产生较好的免疫保护率（７／８）。免疫鸡对异型强毒株Ｐ１０５９（８∶Ａ）、Ｐ２７２３（９∶Ａ）和同型强毒株Ｃ４８－１（５∶Ａ）滴鼻攻击的近期保护率平均为５／１０、６／１０和９／１０。６个月免疫期的平均保护率为７６．７０％（４６／６０），一万多羽鸡田间试验结果表明，免疫后２个月的平均保护率为９３．１０％（２７／２９），６个月的平均保护率为７３．５０％（２５／３４），除对产蛋率有轻度影响（下降１．２７％）外，无其它不良反应。野外大面积使用结果表明，该口服苗不但性能稳定，免疫原性优良，而且安全可靠，适用于鸡口服免疫。     

猪肺疫弱毒菌株(35-233)的研究

猪肺疫是我国猪只的三大疫病之一,危害较严重。多年来应用氢氧化铝甲醛苗作预防注尉,由于注射量大,需逐头抓猪,人力物力消耗较大。近年来又研制出内蒙679-230、黑系G20及 G165等口服弱毒苗,这几个菌株虽然口服免疫效果好,但有皮下注射返祖1～2代即毒力增强的缺点。为了培育一株毒力弱,免疫原性良好,适于口服及皮下注射的菌株,我们用 G165菌种做     

猪丹毒丝菌C43-5株菌种毒力检定标准再评价

为进一步完善猪丹毒疫苗毒力检定标准，对猪丹毒丝菌C43-5株在肉肝胃消化汤中的生长规律进行了分析，测定了菌株对猪的最小致死剂量，并对1986、1996、2006、2015年4个冻干代次菌种进行了毒力和免疫原性测定。结果显示：C43-5株在肉肝胃消化汤中培养16 h时活菌数最高，而后进入稳定期，培养19 h后活菌数迅速下降，菌体大量死亡；以3.5×10¹⁰ CFU活菌静脉注射56～63日龄健康易感猪，2只试验猪在4 d内全部死亡；1986、1996、2006、2015年4个冻干代次的C43-5株菌种毒力和免疫原性检定结果均符合要求。同时提出了猪丹毒丝菌C43-5株毒力检定标准的修改建议，为延长菌种的保存期限提供了数据支撑。     

42株禽巴氏杆菌特性的研究

从本省１８个鸡场、６个鸭场患禽出败病死禽中分离，鉴定４２株多杀性巴氏杆菌。按荧光分类Ｆｏ２７株，Ｆｇ６株，中间型９株。药敏试验，多数菌株对常用抗菌药耐药，仅对环丙沙星，蒽诺沙星等少数药敏感。对试验动物有很强毒力，以１０～１００个活菌对小鼠，５～５０个活菌对鸡，７０％以上菌株可致死亡。有５７％菌株对小鼠用鸡试验１９株７９％菌株对鸡有较好免疫原性。不同荧光菌株抗原对小鼠保护差异较大，具保护力菌株Ｆｏ为９０９％，Ｆｇ为６９％，中间型为２２％。采用本地菌株和标准菌株混合制苗３００多万羽份，用后获得良好免疫效果。     

马鼻疽弱毒菌苗对豚鼠的免疫试验

将马鼻疽强毒菌C67-40株经60Co-γ射线照射和在温度递增的肉汤中传代培养,使其毒力逐渐减弱。通过反复试验筛选,培育出C67-4060Co(7)兼高温178代、C67-40高温180代两株弱毒菌株。根据菌苗菌株的要求,将其分别给雄豚鼠(350 g左右)腹腔接种0.2-6.2亿菌体和0.2-1.4亿菌体,结果100％雄豚鼠不发病,60Co(7)兼高温178代致弱菌株的安全性比强毒菌株提高62倍;以其0.2亿菌体免疫豚鼠并以0.3亿强毒菌攻击,获得85.7％-87.5％的保护率;将其通过培养基37℃传代培养30代和豚鼠6代。其安全性和免疫原性与原菌株比较差异不大,说明该两株鼻疽弱毒菌株毒力稳定。