木薯块根总RNA提取方法的比较和改进

[目的]为更好地利用基因操作手段改良木薯品质和提取高质量的木薯总RNA提供科学依据。[方法]采用4种方法提取木薯块根RNA,筛选一种最简单、有效的方法,并利用RT-PCR技术克隆木薯淀粉分支酶,分析所提取RNA的质量。[结果]结果表明,用改进的CTAB法和plant RNAReagent kit均能提取高质量的RNA,用plant RNAReagent更能节省时间,而且纯度比较高。对plant RNAReagent提取的RNA进行RT-PCR克隆,克隆出了与木薯淀粉合成有关的SBEII基因。[结论]plant RNAReagent kit提取的RNA,其质量可以满足基本的试验要求。     

两种快速提取甘薯块根总RNA的方法

甘薯块根富含的次生物质严重干扰了总RNA的提取。本试验采用异硫氰酸胍"一步法"和CTAB法提取甘薯块根总RNA,并对改进前后两种方法提取的总RNA产量和纯度进行了比较。结果表明,提取RNA过程中用氯仿代替液氮研磨样品同样可获得完整性和纯度较好的总RNA;CTAB法提取RNA质量较好,纯度较高,排除了甘薯块根中多糖、多酚以及纤维等次生物质的干扰,提取出高质量的甘薯总RNA。     

利用改良的CTAB-LiCl法提取甘薯块根RNA

甘薯块根中含有大量的淀粉、酚类化合物、多糖、色素以及纤维等次生代谢物质,严重影响了块根总RNA的提取。本试验对CTAB法进行改良,采用PVPP和β-巯基乙醇去除酚类物质,氯仿/异戊醇去除蛋白质,LiCl过夜沉淀法去除DNA,得到的RNA纯度、完整性以及质量均好。结果表明改良的CTAB法适合甘薯块根RNA的提取。     

甘薯茎总RNA的简易高效提取方法

介绍了一种快速有效的提取甘薯[Ipomoea Batas(L.)Lam]茎总RNA的简易方法,无需特殊试剂和贵重的仪器设备,可有效的去除甘薯中的多酚、多糖类物质.所提取的RNA经过甲醛凝胶电泳和紫外线分光光度计分析,RNA的质量较高,基本没有降解,可直接用于cDNA合成、Northern杂交等多种分子生物学实验.     

基因活化剂对紫色甘薯块根产量的影响

基因活化剂使用浓度(A)设3个水平375×(A1)、750×(A2)、1 500×(A3)稀释液;使用时间(B)设4个水平浸渍种苗基部1 h(B1)和1次(B2)、2次(B3)、3次(B4)叶面追肥,收获时测定块根鲜重.结果表明A1,A2,A3的块根产量分别比对照提高38.60%,61.70%和42.54%,B1,B2,B3和B4的块根产量分别比对照提高38.74%,64.33%,47.37%和40.06%,与对照差异均达显著水平(P＜0.05).A2B2为最佳水平组合,平均块根产量比对照提高89.77%,且与所有水平组合之间都有显著差异(P＜0.05).用750倍的基因活化剂浸渍种苗基部1 h再追肥1次,可显著提高紫色甘薯的块根产量.     

野葛块根总RNA的不同提取方法比较研究

以块根膨大与块根不膨大突变型的野葛块根为材料,比较Trizol、CTAB、SDS及改良SDS法提取野葛块根总RNA的效果,通过RNA产量、纯度及电泳图谱分析等,初步确立了一种有效提取野葛块根总RNA的改良SDS法。该方法提取的RNA OD260/OD280值介于1.7～1.9,电泳图谱清晰完整,产量高,成本低,完全适用于RT-PCR、cDNA-AFLP及Northern杂交等分子生物学后续试验。     

基因活化剂对紫色甘薯块根产量的影响

基因活化剂使用浓度(A)设3个水平:375×(A1)、750×(A2)、1 500×(A3)稀释液;使用时间(B)设4个水平:浸渍种苗基部1 h(B1)和1次(B2)、2次(B3)、3次(B4)叶面追肥,收获时测定块根鲜重.结果表明:A1,A2,A3的块根产量分别比对照提高38.60%,61.70%和42.54%,B1,B2,B3和B4的块根产量分别比对照提高38.74%,64.33%,47.37%和40.06%,与对照差异均达显著水平(P＜0.05).A2B2为最佳水平组合,平均块根产量比对照提高89.77%,且与所有水平组合之间都有显著差异(P＜0.05).用750倍的基因活化剂浸渍种苗基部1 h再追肥1次,可显著提高紫色甘薯的块根产量.     

非洲菊不同组织总RNA提取

以非洲菊为材料,采用Trizol试剂法、改良的异硫氰酸胍法、CTAB法和尿素—氯化锂法,提取非洲菊的花、花蕾、叶、花梗和根的总RNA。所得RNA经1%琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计分析,结果表明Trizol法和改良的异硫氰酸胍法适用于花和根组织,尿素-氯化锂法对花蕾和叶组织RNA有较好的提取效果,而花梗组织RNA最好采用CTAB法。     

柰嫩芽总RNA的提取与纯化

以嫩芽为材料，对Trizol法进行改进提取总RNA，试验结果表明，加入10％PVPP与材料共研磨，并在Trizol提取液中加入1％β-巯基乙醇，可以完全排除酚类物质、色素等杂质的干扰；采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖、在裂解液抽提的上相中加入终浓度为3mol／L LiCl沉淀RNA、在RNA的粗提液中加入适量的3mol／LNaAc(pH5．2)和低浓度的无水乙醇沉淀多糖等方法相结合，可以有效地去除多糖的干扰，获得纯净、完整的RNA样品，用它为模板进行RT-PCR反应，获得PPO基因保守区约600～800bp的cDNA条带；而单独采用在匀浆液中加入终浓度为20％乙醇沉淀多糖的方法，不能将样品中的多糖去除干净，这些残留的多糖会抑制逆转录酶的活性，导致逆转录反应的失败。     

玉米总RNA的小量快速提取

以玉米幼苗的根、茎和叶为材料,采用改良尿素法,分别提取其总RNA。提取的总RNA,经凝胶电泳检测,28SrRNA和18SrRNA带型完整;经紫外分光光度计检测,A260／A280值接近2．0;将RNA反转录合成cDNA,可用于RT-PCR分析。本方法在提取过程中不使用液氮,且提取的玉米总RNA质量好、纯度高。     

甘薯zds基因的克隆与植物表达载体构建

β-胡萝卜素是维生素A原,对人体健康具有重要作用,可降低多种癌症特别是肺癌的发病率.ζ-胡萝卜素脱氢酶是β-胡萝卜素生物合成途径的关键酶之一.根据其它植物ζ-胡萝卜素脱氢酶基因(zds)的保守序列,设计简并引物,从甘薯块根总RNA逆转录的cDNA中扩增出608 bp的zds保守序列,然后用RACE技术扩增出该基因的全长cDNA.zds全长cDNA共2057 bp,有一1773 bp的开放阅读框,编码591个氨基酸,相对分子质量为65 ku.并成功构建了zds植物表达载体p2300-zds,可进一步用于提高作物β-胡萝卜素含量的遗传转化研究.     

紫红薯色素的提取和精制

研究了用树脂和凝胶层析法提取和精制紫红薯色素。实验结果表明：X-5树脂在吸附液pH为4．吸附流速为2.0mL／min时吸附能力较强；在室温和解吸流速为1．5mL／min的条件下．以φ=60％乙醇作为解吸剂时洗脱效果最好；采用凝胶层析法色素的色价达到49．66。     

甘薯叶黄酮微波提取工艺的响应面法优化

用响应面法优化甘薯(Ipomoea batatas)叶黄酮的微波提取工艺,研究了微波功率、微波时间、乙醇体积分数、液固比4个因素对黄酮提取率的影响.并采用Box-Behnken设计对最佳提取工艺进行了优化.结果表明,最佳工艺条件为微波功率200 W、微波时间4 min、乙醇体积分数50％、液固比43∶1(V/m,mL∶g),在此条件下甘薯叶黄酮的提取率为8.082 7％,与预测值8.314 2％基本吻合.     

自然发酵甘薯酸浆中乳酸菌的筛选与鉴定

[目的]从天然乳酸菌菌株中筛选出对甘薯淀粉分离起主要作用的菌种。[方法]利用MRS培养基从自然发酵的甘薯酸浆中分离出13株乳酸菌菌株,通过发酵试验筛选出1株分离效果良好的乳酸菌菌株,并对其进行初步鉴定。[结果]根据菌落形态、个体形态及生理生化反应结果,初步鉴定筛选出的沉淀淀粉能力较好的菌株为乳杆菌,表明乳杆菌菌体本身或由其产生的代谢产物对淀粉具有絮凝作用。从发酵液的乳酸菌总数、pH值来看,乳酸菌总数偏高的发酵液,pH值一般较低,分离效果也较好,表明分离效果与乳酸菌总数及酸浆的pH值有关。[结论]该研究为实现甘薯酸浆的人工发酵生产奠定了基础。     

甘薯幼苗对海水胁迫的生理生化响应

研究了海水处理对甘薯幼苗生长发育、膜透性、保护性酶活性、渗透调节物质含量和离子吸收分布的影响,结果表明:①10%海水处理对甘薯幼苗的生长没有抑制作用,25%和40%的海水胁迫对甘薯幼苗的生长具有一定的抑制作用;②脯氨酸含量随着海水处理浓度的提高、处理时间的延长而不断升高,可溶性糖含量在不同浓度海水处理下均在处理6 d时达到最高值;③在10%、25%海水胁迫下,超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)3种酶活性均随着海水处理浓度的提高、处理时间的延长不断升高,在40%海水处理3 d、6 d时,甘薯幼苗叶片的SOD、POD和CAT酶活性均较对照不断升高,而在处理10 d时,SOD酶活性骤然降低,POD酶活性略微降低,CAT酶活性则继续升高;④10%和25%海水处理的甘薯幼苗叶片的丙二醛(MDA)含量和膜透性与对照差异不大,40%海水处理的甘薯叶片MDA含量与膜透性(ELP)值大幅上升; ⑤随着海水处理浓度的增加和处理时间延长, 甘薯幼苗根、茎和叶部的Na 、Cl-含量显著增加,且茎部和根部的Na 、Cl-含量明显高于叶部,甘薯植株各部分的K 含量随着海水浓度的增加和处理时间的延长不断降低.     

超声波提取紫薯多糖的工艺优化

[目的]优化紫薯多糖的提取工艺。[方法]利用超声波技术提取紫薯粗多糖,用单因素试验和正交试验设计相结合的方法获得最佳提取工艺。[结果]影响紫薯多糖得率的主要因素按重要性排序为：超声频率〉料液比〉提取温度〉提取时间;紫薯粗多糖最佳提取工艺条件为：料液比1∶15,提取时间40 min,提取温度60℃,超声频率80 kHz,此条件下紫薯多糖的提取率为3.63%。[结论]利用超声技术提取紫薯多糖可以提高多糖得率、缩短提取时间、采用较低温度提取、节省提取溶剂,降低提取成本。     

普通小球藻八氢番茄红素合成酶基因psy的cDNA克隆及生物信息学分析

通过RACE-PCR首次克隆获得了普通小球藻(Chlorella vulgaris)中八氢番茄红素合成酶编码基因psy 的cDNA全长序列.该序列全长1 605 bp,包括1 245 bp开放阅读框,编码415个氨基酸.氨基酸序列对比及系统发生分析表明其与其他物种的PSY蛋白具有同源性,与绿藻聚为一支,与小球藻(Chlorella variabilis)、原壳小球藻(Auxenochlorella protothecoides)和佐夫色绿藻(Chromnochloris zofingiensis的遗传距离最近(分别为0.173、0.188和0.239),并具有较高的相似性(81％ ～ 84％)和一致性(69％ ～ 76％).亚细胞定位预测表明普通小球藻PSY前45个氨基酸残基为叶绿体转运肽,可能引导翻译后的肽链进入叶绿体.保守区块、特征基序分析及三维建模显示,序列中具有多个潜在的蛋白质修饰位点,以及PSY蛋白的保守区块和特征基序,包括两个保守的底物-镁离子结合位点和两个活性位点遮蔽残基,用于结合底物及保护催化反应中间产物;普通小球藻PSY蛋白中还具有一个特异的底物-镁离子结合位点,其活性和功能还未知.总之,研究结果揭示了普通小球藻psy基因的cDNA全长序列及可能的蛋白质序列结构特性,结果可为构建过表达载体,提高类胡萝卜素产量提供相关信息.     

一品红转化酶基因片段的克隆和序列分析

根据植物酸性转化酶基因的保守区序列,设计1对PCR引物,以一品红基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增出长约500 bp的DNA片段,克隆入pM D-18T载体,测序结果表明:获得1个一品红酸性转化酶基因家族的成员,该基因片段长523 bp,编码173个氨基酸,属于开放阅读框的一部分,不含内含子。在G enB ank中进行同源性检索的结果表明,该成员编码的氨基酸与其他植物细胞壁酸性转化酶编码的氨基酸同源性较高。     

环境调控对甘薯组培苗光合自养和叶片超微结构的影响

 以甘薯组培苗为材料,在特定CO2浓度,光合光量子通量密度(PPFD)和相对湿度(RH)条件下,研究其生长发育状况和叶片的超微结构。与传统培养方式相比,在环境因子CO2浓度、PPFD和RH分别调控为800～875μmol·mol-1、250　μmol·m-2·s-1和75%～85%的条件下,组培苗的叶片数、茎粗、单株鲜重、叶鲜重、叶面积、根鲜重、叶绿素含量和根系活力显著提高。无论培养基中有无添加蔗糖,环境调控方式下培养的组培苗,叶片下表皮细胞的气孔大多数处于开放状态,气孔的开度最大达50　μm;叶肉细胞中的叶