13/17罗伯逊易位猪SRY基因的克隆及其序列分析

以13/17罗伯逊易位纯合子(2n=36)、杂合子猪[2n=37,XY或XX,rob(13;17)]及正常猪为试验材料,根据猪SRY基因蛋白质编码区的核心序列,设计PCR引物,扩增得到SRY基因片段,随机选取克隆质粒进行测序分析。结果表明,13/17罗伯逊易位纯合子猪与正常猪的SRY基因的核心序列相比有1个碱基发生突变;而13/17罗伯逊易位杂合子猪与正常猪SRY基因的核心序列相比有5个碱基发生突变。     

13/17罗伯逊易位猪POU1F1基因多态性与经济性状的相关分析

利用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本,对13/17罗伯逊易位猪的3种杂交组合的394头后代猪进行分群;应用PCR-RFLP技术在POU1 F1基因的扩增片段(1746 bp)中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点A(3种基因型);应用PCR-SSCP技术检测1个POU1 F1基因第5内含子上的突变E(2种基因型),同时结合生长和胴体品质测定记录研究基因型对生产性状的遗传效应。结果表明,位点A的基因型对生长有显著影响(P<0.05),位点E基因型对生长和眼肌面积有显著影响(P<0.05)。研究结果初步揭示POU1 F1多态性与生长、眼肌面积等存在相关,推测POU1 F1多态性可作为罗伯逊易位杂合优势遗传机制的一种分子水平上的解释。     

家猪13/17罗伯逊易位染色体遗传规律的研究

本研究采用微量全血培养法对１３／１７ 染色体易位猪的５ 种交配组合所产３４２ 头后代的染色体组型进行了分析。结果表明,家猪１３／１７ 罗伯逊易位染色体的遗传符合孟德尔遗传规律,且具有稳定的遗传性。１３／１７ 易位纯合子互交后代仍然为１３／１７ 易位纯合子;１３／１７ 易位杂合子互交后代出现１３／１７ 易位纯合子（２ｎ ＝ ３６） ,１３／１７ 易位杂合子（２ｎ ＝ ３７） 和正常核型家猪（２ｎ ＝ ３８） 三种核型,经卡方检验符合１ ２ １ 的理论比值。本文还讨论了家猪和野猪的染色体进化,１３／１７ 罗伯逊易位染色体的应用。     

猪13/17罗伯逊易位染色体的显微分离及DOP-PCR扩增

以13／17罗伯逊易位杂合子猪[2n=37，XY或XX，rob（13：17）]为材料，制备其有丝分裂中期染色体，利用显微分离技术对13／17罗伯逊易位染色体进行分离，并将单条染色体进行简并寡核苷酸引物PCR（degenerate oligonucleotide primer-PCR．DOP-PCR）扩增，其扩增片段大小主要在0．2～2．5kb之间；以DOP-PCR扩增产物为模板，分别以猪13、17号染色体近着丝点微卫星标记S0282和SW335为扩增目的基因，对D0P-PCR扩增产物进行鉴定，结果表明DOP-PCR产物来源于13／17罗伯逊易位染色体。该方法的成功建立为进一步从分子水平上研究家猪13／17罗伯逊易位所引起的表型效应的遗传机制以及筛选猪13和17号染色体上新的分子遗传标记奠定了基础。     

13/17罗伯逊易位猪NCOA1基因的多态性与产仔性状的相关分析

NCOA1为核受体辅激活蛋白1基因,是影响母猪多产性状的候选基因。NCOA1与结合在DNA上的雌激素受体复杂的相互作用并加强其转录活性。NCOA1蛋白在暴露其他难接近的染色质的过程中使组蛋自乙酞化并与其他乙酞基转移酶（P300／CBP）相互作用。因此,NCOA1蛋白增强了雌激素受体的活性,反过来也刺激特定的雌激素反应基因的转录并调节随后的生理反应。国内外有学者己经对NCOA1基因与猪多产性的相关性进行了研究,并认为它是繁殖性状的“开关”,这方面的研究还在继续深入。     

13／17染色体易位猪群Amy－2的多态性

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了１３／１７染色体易位纯合子、杂合子及染色体数正常猪群的血液淀粉酶－２（Ａｍｙ－２）的遗传多态性。结果：３群猪均表现出特殊的Ａｍｙ－２多态性分布，其Ａｍｙ－２位点受２对等位基因控制，除测得Ａｍｙ－２Ａ、Ａｍｙ－２Ｂ基因控制的Ａ、Ｂ带外，还测到１对迁移率比Ａ、Ｂ带快的Ｃ、Ｄ带；２对等位基因呈现出共显性特征，但除个别个体２对等位基因所控制的表型染色强度相同外，大部分个体出现Ｄ带染色较Ａ、Ｂ、Ｃ带弱的特点；不同核形猪群的基因频率和基因型频率有明显差异，个别个体缺乏Ａｍｙ－２Ｃ、Ａｍｙ－２Ｄ基因。     

猪单条13/17罗伯逊易位染色体的显微分离与LA-PCR扩增

以13/17罗伯逊易位纯合子猪［2n=36，XY或XX，rob(13;17)］为试验材料，制备其有丝分裂中期染色体，利用显微分离技术对13/17罗伯逊易位染色体进行分离，并将单条染色体进行LA-PCR扩增，其扩增片段大小主要在200~2800 bp；对LA-PCR扩增产物用猪13、17号染色体近着丝点微卫星标记SWR1941和SWR1120与Southern杂交2种方法进行鉴定，结果表明LA-PCR产物来源于13/17罗伯逊易位染色体。该方法的成功建立为进一步从分子水平上研究家猪13/17罗伯逊易位所引起的表型效应的遗传机制以及筛选猪13和17号染色体上新的分子遗传标记奠定了基础。     

13/17染色体易位纯合子猪群随机扩增多态性DNA指纹分析

利用 6 0条随机引物对 13/ 17罗伯逊易位纯合子猪、易位杂合子猪及正常核型猪的群体基因组 DNA进行了RAPD分析 ,筛选出 2 2个产生多态性的随机引物 ,计算出 3个群体间及群体内的共有带率 (F)及遗传距离指数 (D) ,并以此绘制出群体的亲缘关系树状图。对群体的遗传多样性进行了研究 ,计算出遗传多样性指数 (Ho) ,并在此基础上进行了 t检验 ,结果表明了该群体的变异情况。该群体的变异主要来源于群体间的变异 ,群体间的变异大于群体内的变异。利用 RAPD技术可快速有效地检测亲缘关系较近的猪群体的 DNA多态性 ,RAPD技术在猪的基因组研究中有广阔的应用前景     

13/17罗伯逊易位纯合子、杂合子猪及3个引进品种核仁组成区(Ag-NORs)的多态性

对 1 3/ 1 7易位纯合子猪、杂合子猪及杜洛克、长白、约克夏猪的核仁组成区 ( Ag-NORs)的多态性作了研究 ,结果表明 ,杜洛克、约克夏猪 Ag-NORs定位于 8号和 1 0号染色体的次缢痕区 ,而 1 3/ 1 7易位纯合子猪、1 3/ 1 7易位纯合子猪×约克夏猪 F1代 Ag-NORs的遗传方式符合孟德尔定律 ;Ag-NORs在细胞间、个体间及品种间数目均有差异 ,而且品种差异显著大于品种内个体间差异。 1 3/ 1 7易位纯合子猪、杂合子猪 ,以及长白、杜洛克、约克夏猪 Ag-NORs均数分别为 1 .99、1 .98、2 .0 0、2 .0 5、2 .0 6,说明 Ag-NORs在品种、个体及细胞间具有多态性。这种多态性与猪的起源和杂交育种时所用亲本品种的血缘成分有关 ,因此可作为遗传标记 ,用以分析家畜的亲缘关系     

13／17染色体易位猪群Amy—2的多态性

用聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定了１３／１７染色体易位的纯合子，杂合子及染色体数正常猪群的血液淀粉酶－２（Ａｍｙ－２）的遗传多态性，结果：３群猪均表现出特殊的Ａｍｙ－２多态性分丰，其Ａｍｙ－２位点有２对等位基因控制，除测得Ａｍｙ－２＾Ａ，Ａｍｙ－２＾Ｂ基因控制的Ａ、Ｂ带外，还测得１对迁移率比Ａ、Ｂ带快的Ｃ、Ｄ带；２对等位基因呈现出共显性特征，但除个别个体２对等位的基因所控制的表型染色强度相同外，大部分个     

基因多态性与经济性状的相关分析

利用外周血淋巴细胞培养制备染色体标本,对13/17罗伯逊易位猪的3种杂交组合的394头后代猪进行分群;应用PCR RFLP技术在〖STBX〗POU1F1〖STBZ〗基因的扩增片段（1746 bp）中检测到1个RsaⅠ限制性内切酶的多态酶切位点A（3种基因型）;应用PCR SSCP技术检测1个〖STBX〗POU1F1〖STBZ〗基因第5内含子上的突变E（2种基因型）,同时结合生长和胴体品质测定记录研究基因型对生产性状的遗传效应。结果表明,位点A的基因型对生长有显著影响（P<0.05）,位点E基因型对生长和眼肌面积有显著影响（P<0.05）。研究结果初步揭示POU1F1多态性与生长、眼肌面积等存在相关,推测POU1F1多态性可作为罗伯逊易位杂合优势遗传机制的一种分子水平上的解释。     

rob(13/17)纯合子猪的联会复合体分析

采用表面铺展法和硝酸银染色技术对rob(13/17)纯合子猪减数分裂的配对行为进行了联会复合体（synaptonemal complex,SC）的电镜观察和分析。结果表明，rob(13/17）纯合子猪的SC配对行为正常，未见三价体和侧生组分形成。SC的形成开始于偶线期，成熟于粗线期，解体于双线期。在减数分裂前期，性染色体轴呈强嗜银性，配对明显落后于常染色体。根据减数分裂前期性染色体的形态和行为，把性染色体的SC分为4个类型。     

贵州地方猪种UCP3基因多态性与肉质性状的相关性分析

解耦联蛋白3(uncoupling protein 3,UCP3)是调节能量和脂肪代谢的重要因子。以商品猪(杂交猪)为对照,采用SSCP方法对贵州地方猪品种糯谷猪和萝卜猪的UCP3基因进行了多态性分析。结果表明:3个猪群体中,都检测到了3种基因型(AA、BB、AB),χ2独立性检验结果显示,3种基因型在3个群体间的分布不一致,糯谷猪和萝卜猪以AB基因型为主,杂交猪以BB基因型占优势,杂交猪与地方猪种之间的差异显著(P<0.01);对纯合基因型的UCP3基因片段进行克隆测序,证实AA基因型中UCP3基因外显子6编码区第842位碱基发生了单碱基突变(T→C),导致编码的氨基酸从苏氨酸突变为甲硫氨酸。进一步分析3种基因型与胴体和肉质性状之间的相关性,证明AB基因型个体的肉质最优,贵州地方猪种的大理石纹、肌内脂肪含量和嫩度3项指标显著优于商品猪(P<0.01),因此推测UCP3基因与贵州地方猪种的肉质性状具有相关性,可能是贵州地方猪种肉质性状的候选基因。