一种磺胺类母环半抗原TS的合成

通过人工合成具有磺胺类药物对氨基苯磺酰胺公共母环的半抗原TS,以期建立动物源性食品中磺胺药物的簇特异性抗体。采用NHS、MA法合成人工免疫原、包被原,通过紫外扫描法对其偶联结果进行初步鉴定,结合免疫小鼠的动物试验,通过ELISA方法,检测鼠多抗产生针对磺胺类药物的抗体,确证偶联成功。     

呋喃唑酮代谢物人工抗原的合成及抗体的制备

为改进和完善免疫检测呋喃唑酮代谢物方法,制备了抗呋喃唑酮代谢物(AOZ)特异性抗体.采用对醛基苯甲酸对AOZ进行衍生化得到CPAOZ,还原CPAOZ结构中的C=N双键得到半抗原,半抗原用N-羟基琥珀酰亚胺活化酯法与BSA偶联制备免疫原,免疫新西兰大白兔制得特异性抗体,采用间接(竞争)ELISA法评价抗血清效价及特异性.结果显示,试验获得了较高效价(1∶1280000)的抗AOZ血清,AOZ半抑制浓度为5.9 ng/mL;抗血清与结构类似物呋喃它酮代谢物的交叉反应率仅为0.76％,与呋喃妥因代谢物和呋喃西林代谢物无交叉反应;利用该抗体建立的间接竞争ELISA检测法,AOZ在1～27 ng/mL与抑制率呈线性关系.结果表明,该特抗体虽然灵敏度较低,却对AOZ而非AOZ衍生物有特异性,可为畜产品中AOZ残留检测提供新的思路和方法.     

对氨基苯磺酰胺多克隆抗体的制备及特异性测定

为了制备对氨基苯磺酰胺多克隆抗体,试验采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯(NHS)法,将对氨基苯磺酰胺(SA)分别与牛血清白蛋白(BSA)耦联制备免疫抗原SA-BSA,与卵清蛋白(OVA)耦联制备检测抗原SA-OVA,用合成的SA-BSA耦联物免疫小鼠,制备对氨基苯磺酰胺多克隆抗体,并测定其特异性。结果表明:用合成的SA-BSA耦联物免疫小鼠获得了高效价的鼠源对氨基苯磺酰胺多克隆抗体,该抗体可与多种磺胺类药物发生交叉反应,与异类药物不发生反应,可作为动物源食品中磺胺类药物的多残留检测抗体。     

培氟沙星阻断ELISA检测方法的建立

为了建立牛奶样品中培氟沙星的阻断ELISA检测方法,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法合成了培氟沙星的完全抗原。免疫BALB/c小鼠,制备了血清抗体,并对其血清抗体效价、半数抑制浓度、特异性、牛奶样品的添加回收率等进行了测定。结果:血清抗体的效价为1∶25 600,阻断ELISA的线性检测范围为1.79～100 ng/mL,半数抑制浓度(IC50)为10.12 ng/mL,抗体与其他抗生素的交叉反应率小于0.1%,牛奶样品的平均添加回收率大于85%。     

重氮氨苯脒抗血清的制备

重氮氨苯脒作为一种动物抗寄生虫药物,应用广泛,多个国际组织和国家将其列入需要检测残留的兽药。我国虽然也严格规定了其残留限量,但还未制定相关检测标准,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测该药物在我国更是空白。本研究通过改造免疫原免疫实验兔,获得了抗血清,该血清效价大于1∶50 000,线性范围在500³.9 ng/mL之间,线性系数R=0.99(R2=0.985 6)以上,特异性良好,为建立ELISA方法检测重氮氨苯脒提供了物质基础。     

抗腹泻性贝毒软海绵酸多克隆抗体的制备与检测

制备了腹泻性贝毒软海绵酸(okadaic acid,0A)的多克隆抗体,鉴定了抗体特性.利用半抗原BSA偶联小分子毒素OA,制备完全抗原OA-BSA,免疫两只新西兰白兔,分离、纯化抗血清.用间接ELISA方法测定抗体效价,两个兔抗血清效价均达到128,000以上.IC50为2.852 ng/mL.DOT BLOT测定抗体特异性,结果表明,抗体与抗原有特异性反应.试验表明,抗OA多克隆抗体制备成功,其质量较好,可用于将来的免疫检测研究.     

抗赭曲霉毒素A抗体的研制与鉴定

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A.简称OA)与牛血清白蛋白(BSA)结合后,成为半抗原载体复合物,即为一种很好的抗原,用这种人工结合抗原与佐剂混合免疫家兔,便可产生抗OA的抗体,这种抗体对OA具有特异性。用ELISA检测抗体的灵敏度为2.5ng/ml的OA检样。本文主要介绍了抗原的偶合,免疫血清的制备及抗体的效价滴定。     

苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R~2=0.990),其IC_(50)为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。     

苯乙醇胺A单克隆抗体的研制及ELISA检测方法的建立

为制备苯乙醇胺A(phenylethanolamine A,PA)单克隆抗体,建立一种针对苯乙醇胺A的快速、简便、灵敏度高的检测方法,本试验采用重氮化法将制备的苯乙醇胺A衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联作为免疫原和包被原。利用弗氏佐剂充分乳化免疫原(PA-BSA),按常规免疫程序免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠,选择血清抗体效价较高的小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞以PEG法进行细胞融合。结果显示,经3次细胞亚克隆筛选后,最终筛选出一株可稳定分泌抗苯乙醇胺A单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为D6H8,利用此细胞以小鼠体内诱生法制备抗体。经鉴定,D6H8腹水抗体亚型为IgG1,轻链为κ链;纯化后的抗体与沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、盐酸异丙肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素均无明显的交叉反应(CR<0.18%),表明该抗体特异性良好。利用此抗体建立针对苯乙醇胺A药物残留检测的间接竞争ELISA方法,结果表明,腹水抗体效价为1∶12 800,猪肉中苯乙醇胺A添加浓度在5～1 000 ng/mL时线性关系良好,标准工作曲线为y=0.3861x-0.1845 (R^2=0.990),其IC₅₀为58.88 ng/mL,LOD为3.83 ng/mL,回收率在85.96%～104.32%之间。综上所述,本试验成功建立了检测苯乙醇胺A药物残留的间接竞争ELISA方法,该方法灵敏度高、稳定性较好。     

猪链球菌血清2型抗体IHA检测方法的建立及应用

用猪链球菌血清2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS)致敏经戊二醛处理过的鸡红细胞,优化致敏醛化红细胞的抗原量和时间.结果显示,在37℃条件下CPS(2.2 5 mg/L)致敏鸡红细胞90 min,IHA试验在25℃条件下操作,被检血清IHA效价在1∶8及其以上时判为SS2抗体阳性.应用此方法对猪大肠杆茵、副嗜血杆菌、猪肠球菌、SS1、SS7、SS9、金黄色葡萄球菌、沙门菌、巴氏杆茵阳性血清进行检测,结果表明,SS2抗体均为阴性.对1044份无临床症状的猪血清进行检测,SS2抗体阳性率为61.69％.该方法敏感性高,特异性较强,可用于大规模SS2抗体水平的检测和SS2的血清流行病学调查.