牦牛粪样中蓝氏贾第鞭毛虫巢式PCR检测方法的建立

采用建立的巢式PCR方法检测了297份牦牛粪样。结果表明:建立的巢式PCR方法一扩的最佳退火温度为55℃,二扩的最佳退火温度为53℃;对牦牛源贾第鞭毛虫的最低检测量为1个虫体DNA/m L;特异性试验表明,对隐孢子虫、弓形虫、柔嫩艾美尔球虫、阿米巴虫、牛巴贝斯虫等寄生虫DNA的扩增均为阴性;297份牦牛粪样中贾第鞭毛虫的检出率为7.4%。表明建立的方法具有较高的敏感性和特异性,可用于牦牛源贾第鞭毛虫感染的检测。     

青海牦牛源贾第虫的鉴定及分子特征分析

从青海省祁连县采集93份牦牛粪样用于贾第虫检测。所有样品经蔗糖密度梯度离心法纯化处理后,采用卢戈氏碘液染色镜检和免疫荧光试验进行检测,将镜检阳性样品采用套式PCR方法扩增18S rRNA,并对扩增产物进行测序分析。结果镜检和免疫荧光试验中有9份样品为贾第虫阳性,阳性率为9.7%。镜检阳性样品采用套式PCR方法扩增后有8份样品为18SrRNA基因阳性,产物长度292bp,测序后的序列分别命名为QHQL201501~QHQL201508。系统发育分析显示,分离的虫株属于牛源十二指肠贾第虫,基因型均为反刍动物特有的聚集体E,未发现具有人兽共患潜力的A型和B型。     

犬细小+犬冠状+贾第鞭毛虫抗原三合一胶体金检测卡的制备与评价

为快速检测犬细小病毒(CPV)、犬冠状病毒(CCV)和贾第鞭毛虫(Giardia),研究利用胶体金免疫层析技术制备CPV+CCV+Giardia抗原三合一胶体金检测卡并评价其各项指标.结果显示,该三合一胶体金检测卡与CDV、CPV、CAV、CRV、CCV和Giardia(自身样本除外)无交叉反应;可检测浓度低至10.0...     

丙硫苯咪唑对犬贾第鞭毛虫病的疗效

通过３组实验评定丙硫苯咪唑对犬贾第鞭毛虫病的疗效。实验１给犬一次口服丙硫苯咪唑２５ｍｇ／ｋｇ，７只犬有５只的粪便贾第鞭毛虫孢囊被清除（硫酸锌浓度方法确定）。未治疗的７只犬有３只粪便孢囊被清除。实验２给犬口服丙硫苯咪唑２５ｍｇ／ｋｇ，隔１２小时一次，共４次。５只犬的粪便孢囊全被清除，未治疗的５只对照犬，一只犬的粪便孢囊被清除。实验３给犬口服丙硫苯咪唑２５ｍｇ／ｋｇ，隔１２小时一次，共４次，２０只犬中     

蓝氏贾第鞭毛虫检测技术研究进展

蓝氏贾第鞭毛虫是一种分布广、危害严重的水源性人兽共患的寄生虫原虫,可致人和动物严重腹泻.由于其种类繁多,易传染,传播快,对公共卫生安全造成严重威胁.传统的贾第鞭毛虫检测方法主要为粪便样本的显微镜检查.随着免疫学和现代分子生物学的不断发展,很多分子生物学检测技术不断涌现,并成功应用到对贾第鞭毛虫的快速检测.论文就近年来贾第鞭毛虫的检测技术进展情况进行综述.     

隐孢子虫和贾第鞭毛虫双重实时荧光PCR检测方法的建立

本研究根据隐孢子虫和贾第鞭毛虫相对保守序列,设计2对引物及其相应的Taqman探针,通过对引物和探针浓度、Taq酶以及反应条件等优化筛选后,建立了能同时检测隐孢子虫和贾第鞭毛虫的双重实时荧光PCR方法。所建立的隐孢子虫和贾第鞭毛虫双重荧光PCR检测方法的灵敏度为10-9,相当于46.1copies/!L,重复性好,特异性佳。本研究建立的双重荧光PCR技术,可以快速、准确地于一管一次反应检测隐孢子虫和贾第鞭毛虫。     

斑点免疫结合试验对蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪中特异性抗原的检测

应用蔗糖密度梯度离心技术从蓝氏贾第鞭毛虫感染者的粪便中分离纯化贾第虫包囊，以此包囊免疫家兔，获得免疫血清，经大肠杆茵吸收后建立斑点免疫结合试验，检测粪中贾第虫特异性抗原。以此法检测３９例贾第虫感染者粪便，有３６例出现阳性斑点，阳性检出率为９２．３％。以超声粉碎的贾第虫包囊抗原为标准，３６例阳性标本中，有３５例标本贾第虫特异性抗原蛋白含量分布在３９～６９ｎｇ／ｍＬ范围内，１例为１３８ｎｇ／ｍＬ。     

青海省海北地区牦牛源贾第虫检测与基因型分析

为研究青海省海北地区牦牛贾第虫的感染情况及虫种基因型,对青海省祁连县、海晏县和刚察县的297份牦牛粪样采用蔗糖密度梯度离心法纯化,之后用免疫荧光方法对贾第虫进行鉴定,对阳性及疑似阳性样品采用基于18SrRNA和谷氨酸脱氢酶(gdh)基因的套式PCR扩增,并对扩增产物进行测序。将测序结果与GenBank中的贾第虫序列进行比对分析。免疫荧光抗体试验结果显示,共检出24份贾第虫阳性粪样,总阴性率为8.1%。套式PCR扩增结果显示,24份阳性样品中18SrRNA基因扩增阳性22份,gdh基因扩增阳性18份,产物大小分别为292bp和432bp。序列分析表明,分离的虫种均为牦牛源肠贾第虫,基因型为集聚体E,未发现人畜共患基因型。     

青海省海晏县牧场牧草营养品质全年动态

为弥补众多青藏高原定点监测全年牧草营养价值变化对生产支撑不足的问题,探明青藏高原放牧牦牛全年轮牧条件下牧草的全年动态营养价值,本研究选取青藏高原典型牧户的放牧草地,于2015年9月到2016年8月全年跟踪放牧牦牛、模拟采集可食性牧草,并分析牧草常规营养成分及总能,采用体外两阶段法测定牧草体外干物质消化率。结果表明,1)牧草中粗蛋白(CP)、粗脂肪(EE)、酸性洗涤纤维(ADF)、中性洗涤纤维(NDF)、粗灰分(Ash)、钙(Ca)和磷(P)含量分别为3.68%~19.21%、0.86%~2.74%、9.65%~43.83%、44.70%~76.23%、5.40%~9.62%、2.13%~5.12%和0.027%~0.190%,5月份CP、Ash含量极显著高于其他月份(P0.01);2)体外两阶段法评定牧草体外干物质消化率得出,消化率为42.72%~72.47%,5月份极显著高于其他月份(P0.01);3)牧草总能(GE)、消化能(DE)和代谢能(ME)分别为17.76~19.67、7.81~13.26和6.40~10.87 MJ·kg~(-1),全年不同月份牧草GE差异不显著(P0.05),以6月份最高,11月份次之,牧草DE及ME为5月份显著高于其他月份(P0.05),4月份和6月份次之,12月份最低。青海省海晏县牧场5月和6月天然牧草品质优良,10月至翌年3月牧草营养价值较低。因此,建议牧民和养殖户在10月到翌年3月采用天然草地配合补饲饲料养殖;鉴于全年轮牧季节性草地类型不同,今后应采取跟踪式牧草营养监测方法,较好地实现放牧牦牛精准补饲。     

青海省海晏县放牧牦牛体重及血清生化指标的全年监测

本试验旨在探明青海省主要牦牛饲养区海晏县牦牛的营养状况,为制定添补措施提供科学依据。于2015-09—2016-08跟踪测定了青海省海晏县牧户草场天然牧草产量以及牦牛干物质采食量、体重和血清生化指标,同时分析平均日增重与血清生化指标的相关性。结果表明:天然牧草可食草产量7月份高于其他月份;春季牦牛干物质采食量显著高于秋、冬季(P0.05),秋季显著低于其他季节(P0.05);1月份、2月份、3月份、10月份、11月份、12月份牦牛平均日增重呈现负增长,4月份后逐渐上升,6月份、7月份显著高于其他月份(P0.05);血清葡萄糖(GLU)的含量7月份显著高于除6月份、10月份外的其他月份(P0.05);2月份、3月份血清尿素氮(UN)含量及碱性磷酸酶(ALP)活性低于其他月份;由相关性分析可知,平均日增重与血清UN含量呈显著的正相关(P0.05)。综合得出,青海省海晏县10月份至次年3月份为饲草供给不足,牦牛平均日增重呈现负增长,4月份后平均日增重逐渐上升,因此,建议轮牧的放牧形式下,10月份至次年3月份,采用天然草场配合补饲饲料的饲养方式。     

青海省海晏县羔羊“肝子病”的病因诊断

根据流行病学、剖检变化、显微镜检查,细菌分离培养和动物试验,确诊青海省海晏县羔羊“肝子病”的病原为坏死杆菌。     

ELISA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒

用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阳性１３例，后１３例包括在前１６例中。从８４例腹泻犬粪样中随机取３８例作ＣＣＶ、犬细小病毒（ＣＰＶ）双项检测，ＣＣＶ阳性１６例，ＣＰＶ阳性６例，ＣＣＶ、ＣＰＶ混合感染４例。结果显示，在南京地区流行的犬腹泻中，ＣＣＶ感染比例有超过ＣＰＶ的趋势。     

海晏县牦牛衣原体病的血清学调查

应用衣原体间接血凝试验(IHA),对海晏县的321份牦牛血清进行了衣原体的血清学检测,结果检出牦牛血清阳性19份,牦牛血清的阳性率为5.9%。     

青海省海晏县线叶嵩草内生细菌的生物功能鉴定及测定

对线叶嵩草（Kobresia capillifolia）内生细菌部分生物功能进行鉴定及测定;采用组织分离法从青藏高原青海省海西线叶嵩草根部分离出10株内生细菌。结果表明,10株内生细菌均能固氮,2G1和2G10能够产IAA;其中2G2、2G3、2G4、2G5、2G6、2G7、2G8和2G9对指示菌均有拮抗作用,对马铃薯炭疽菌Colletotrlchum coccodes的拮抗作用最强,抑菌率达88.58%。通过培养性状和形态特征,结合16S rDNA序列相似性分析,将2G1和2G10分别鉴定为苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis和Bacillus simpix,2G2和2G9鉴定为亲甲基醇芽孢杆菌Bacillus methylotrophicus,2G3和2G6鉴定为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens,2G4和2G5鉴定为云南苏铁芽孢杆菌Bacillus siamensis,2G7和2G8鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。该研究结果为青藏高原极端生境牧草根部内生细菌的多样性及功能菌株的开发提供依据。     

祁连县绵羊群中流产类疾病的血清学检测

应用虎红平板凝集试验(Rose-Bengal Plate Agglutination Test,RBPT)、衣原体、弓形虫、绵羊支原体间接血凝试验(Indirect Hemagglutination Assay,IHA),对采自青海省祁连县两个村绵羊的199份血清进行了布氏杆菌、衣原体、弓形虫的血清抗体检测。结果:在199份被检血清中,未检出布氏杆菌和衣原体的血清阳性;检出弓形虫阳性血清9份,阳性率为4.5%;羊传染性胸膜肺炎阳性血清13份,阳性率为6.5%。     

青海省达日县退化草地研究 Ⅱ 退化草地成因分析与评估

通过对１９８５年至１９９７年两次草地畜牧业资源调查资料的分析认为,达日县产草量和载畜量的年减少量分别为３万ｔ青草和ｌ万个羊单位;黑土滩增加到８１８．９７ｋｍ２。在个别地区、个别时间、局部草地有超载,但从整体上讲,整个草地并不过牧;全球气温升高所引起的荒漠化,应是处于半干旱—半湿润干旱区的达日县草地退化、大片黑土滩产生的主要原因。