卡那霉素浸种对盐芥幼苗生长的影响

卡那霉素浸种是一种简单、方便的转基因植株鉴定技术。试验以不同浓度的卡那霉素溶液对耐盐模式植物——盐芥的种子进行浸泡处理，研究其对卡那霉素的敏感性。结果表明：卡那霉素可抑制盐芥幼苗生长，且这种抑制作用随卡那霉素水溶液浓度升高而增强，当卡那霉素浓度这400mg／L且处理30d时，90％左右的幼苗不能分化形成真叶，所以可用400mg／L卡那霉素水溶液浸种时转基因盐芥进行鉴定。     

NaCl对盐芥愈伤组织生长的影响

[目的]研究NaGl对盐芥愈伤组织生长的影响。[方法]选用盐芥山东生态型的种子,从幼苗诱导出愈伤组织,继代后转到含不同浓度NaCl的培养基上,研究NaCl对盐芥愈伤组织生长的影响。[结果]随着NaCl浓度的增加,盐芥愈伤组织的生长减缓,鲜重干重增加量减小。[结论]NaCl抑制盐芥愈伤组织的生长,并且抑制效果随NaCl浓度的增加而增加。     

卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响

[目的]确定马齿苋遗传转化时适宜的卡那霉素筛选浓度。[方法]在诱导愈伤组织培养基和愈伤组织增殖培养基中添加不同浓度的卡那霉素,通过统计愈伤组织诱导率和愈伤组织增长率来研究卡那霉素对马齿苋愈伤组织诱导和生长的影响。[结果]卡那霉素对愈伤组织诱导的影响很大,当卡那霉素浓度为20 mg/L时严重抑制了愈伤组织的诱导,而其愈伤组织在卡那霉素浓度为100 mg/L时仍能少量生长,但随着卡那霉素浓度的增大,增长速度变慢,褐化程度逐渐增加。[结论]在进行马齿苋的遗传转化时,愈伤组织诱导阶段可采用20 mg/L卡那霉素作为选择压,如果直接以愈伤组织为转化受体,则可采用80 mg/L作为选择压。     

毛木耳958对4种抗生素的敏感性研究

[目的]检测毛木耳958对青霉素、硫酸链霉素、制霉菌素和卡那霉素4种抗生素的敏感性,以寻找适合原生质体融合育种的抗性筛选标记。[方法]以毛木耳958为试验材料,在PDA培养基中加入不同浓度的抗生素,测定菌丝生长速率、菌落形态特征和锁状联合菌丝数量。[结果]适宜浓度的青霉素和硫酸链霉素对毛木耳958菌丝生长都有显著的促进作用,而制霉菌素和高浓度的卡那霉素对菌丝生长有明显的抑制作用;4种抗生素对毛木耳958菌落形态特征影响较小;青霉素、制霉菌素和卡那霉素高于300μg/m L时,毛木耳958锁状联合菌丝比率呈明显的下降趋势,硫酸链霉素对其无显著作用。[结论]毛木耳958对制霉菌素和高浓度的卡那霉素具有较强的敏感性,做筛选标记时控制好抗生素的浓度,尽量减少其对锁状联合菌丝比率的影响。     

卡那霉素对萝卜种子发芽及幼苗生长的影响

[目的]为了筛选萝卜种子卡那霉素最佳致死浓度。[方法]以2个萝卜自交系为试材,研究了不同浓度卡那霉素对萝卜种子发芽和幼苗生长发育的影响。[结果]卡那霉素对不同萝卜自交系种子的萌发影响不同,但对萝卜幼苗的生长发育都有明显的抑制作用,随着卡那霉素浓度的升高,致死率升高、主根和下胚轴长度变短。不同萝卜品种对卡那霉素的敏感性不同,各自的致死浓度也不一样。[结论]在经卡那霉素溶液浸泡后播种时,07Lb36-9和07Lb39的卡那霉素致死浓度分别为150mg·L~(-1)和300mg·L~(-1),这2个浓度可以作为萝卜自交系07Lb36-9和07Lb39的转基因种子的筛选浓度。     

不同浓度潮霉素对盐芥根生长的影响

为了研究不同浓度的潮霉素对盐芥根生长的影响,将春化后的盐芥种子种在潮霉素浓度分别为0、2.5、5.0、10.0、20.0 mg/L的1/2 MS培养基上,垂直培养,测量根生长的长度,以根长作为衡量盐芥生长的标准。结果表明,潮霉素对盐芥根生长有抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显。潮霉素浓度达20.0 mg/L时,根几乎不生长。     

卡那霉素和潮霉素对芦竹不定芽诱导与生长的影响

[目的]研究组培条件下芦竹（Arundo donax Linn.）对植物基因工程常用抗生素卡那霉素和潮霉素的敏感性,为芦竹基因工程载体构建及转基因植株筛选奠定基础。[方法]芦竹外植体预培养3 d后接种于添加不同浓度卡那霉素或潮霉素的不定芽诱导培养基中培养,研究2种抗生素对芦竹外植体不定芽诱导及生长的影响。[结果]2种抗生素在一定浓度下对芦竹外植体不定芽诱导和生长都有影响。潮霉素浓度在5～50 mg/L时,随着浓度增大,对芦竹不定芽诱导及生长的抑制作用均增强;浓度达到50～100 mg/L时,外植体生长、分化逐渐停止直至死亡。卡那霉素浓度在5～100 mg/L时,对不定芽诱导产生促进作用。[结论]潮霉素在较低浓度下对芦竹外植体不定芽诱导和生长产生抑制作用,适合作为芦竹转基因选择标记。     

卡那霉素对紫花苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响

[目的]研究紫花苜蓿叶片在诱导愈伤组织阶段、愈伤组织分化阶段对卡那霉素的敏感程度。[方法]确定卡那霉素对紫花苜蓿叶片愈伤组织形成的影响,并在形成愈伤组织的基础上,进一步确定卡那霉素对愈伤组织分化的影响。[结果]不同浓度的卡那霉素对紫花苜蓿叶片诱导愈伤与分化均有一定的抑制作用,而且随浓度升高,抑制作用增强;卡那霉素对愈伤组织分化阶段的敏感程度比诱导愈伤阶段高;分化阶段选择压力要控制在25 mg/L以下;延迟加入卡那霉素或在分化阶段降低卡那霉素浓度是对筛选转化苗的可取办法。[结论]该研究为利用农杆菌介导法转化紫花苜蓿奠定了基础。     

大豆子叶节对卡那霉素的敏感性研究

[目的]研究大豆子叶节对卡那霉素的敏感性,以期为大豆的遗传转化和抗性筛选提供试验依据。[方法]选用3个不同基因型大豆为试验材料,以黄化率和分化率为指标,研究了不同浓度的卡那霉素对大豆子叶节分化和丛生芽生根的影响。[结果]不同基因型大豆对卡那霉素的敏感性不同,子叶节分化的卡那霉素临界筛选浓度为:垦农18为40 mg/L、绥农14和垦农4为60 mg/L;丛生芽生根的卡那霉素临界筛选浓度为:垦农18为15 mg/L、绥农14和垦农4为20 mg/L。[结论]该研究结果为大豆的遗传转化和抗性筛选奠定了基础。     

盐生植物盐芥高效率嫁接体系的构建

[目的]构建盐生植物盐芥高效率嫁接体系。[方法]利用拟南芥下胚轴水平切割的方法进行了盐芥的无菌嫁接。[结果]苗龄是影响嫁接成功与否的关键因素,萌发7~10 d的幼苗为最佳嫁接苗,苗龄过小或过大均不利于嫁接,同时不同的蔗糖浓度及铁盐也对嫁接有一定影响。[结论]盐芥嫁接体系的成功构建为进一步研究盐生植物地上与地下互作及长距离信号传递的耐逆分子机理提供了参考。     

不同浓度NaCl胁迫下盐芥与拟南芥有机渗透调节物质与抗氧化酶系统的比较

本试验检测了盐芥（Thellungiella halophila）和拟南芥（Arabidopsis thaliana）有机渗透调节物质脯氨酸和可溶性蛋白的含量,以及抗氧化系统中超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化物酶（POD）的活性。结果表明,高浓度NaCl（〉100 mmol/L）处理后盐芥的渗透调节物质含量显著高于拟南芥。拟南芥抗氧化系统酶活性尤其是CAT活性,明显受制于高浓度NaCl环境（〉100mmol/L）,而盐芥的抗氧化系统并没有受到显著的不良影响。     

盐芥黑芥子酶活性测定方法

采用盐芥为材料,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联体系（GOD-POD）对莲座叶中提取的黑芥子酶活性进行了测定并对酶液存储条件进行了探讨。结果表明,在1 ml的酶液反应体系中与底物反应15 min时,黑芥子酶活性最高;酶液在-80℃保存活性显著下降。改进后的方法取样量小、操作较简便,适于较多盐芥样品的平行测定。     

盐芥ThNHX1基因的生物信息学分析

利用相关的生物信息学软件分析了盐芥ThNHX1基因编码蛋白的氨基酸组成、等电点、结构域、特征位点、二级结构等蛋白质性质,并与3种甜土植物蛋白做了对比.结果表明,盐芥ThNHX1基因编码蛋白的分子式为C2790H4328N690O760S25,属于稳定蛋白;二级结构主要是以无规则卷曲和α-螺旋为主.在所分析的指标中.盐芥ThNHX1与3种甜土植物的NHXl相比,存在着一定的差异.     

小盐芥下胚轴再生体系的建立

以小盐芥下胚轴为外植体,研究了不同激素与不同浓度组合对愈伤诱导和不定芽分化的影响。结果表明,MS 6-BA 2,4-D组合能诱导出愈伤,诱导率为100%。MS 6-BA NAA组合既能诱导出愈伤又能分化不定芽,愈伤诱导率为100%,激素不同浓度不定芽分化率不同,最佳分化培养基为MS 2.5mg/L 6-BA 0.1mg/L NAA,不定芽分化率为43%。生根培养基为1/2MS,生根率为74%。     

盐芥(Thellungiella halophila)DREB1E基因的克隆

以盐生植物盐芥为材料,依据拟南芥中DREB1E的序列信息设计引物,扩增出盐芥中DREB1E的部分序列,然后使用SMARTTMRACE等方法,从盐芥中克隆到全长的DREB1E cDNA序列.将这一基因命名为ThDREB1E.同源性分析结果表明,ThDREB1E与拟南芥DREB1E cDNA编码区的同源性为83.78%;根据基因核酸序列推测的氨基酸序列同源性为81.18%.     

Screening Method for Transgenic Maize with Kanamycin Resistance

[Objective]The paper was to establish simple and effective method to screen marker gene in maize with kanamycin resistance.[Method]Using inbred line "Chang 7-2" and hybrid "Zhengdan 958" of maize as test materials,their seeds were soaked with different concentrations and volumes of kanamycin for3 and 4 d,respectively,the rate of albino seedlings and average seedling height after sowing for10 d were investigated.[Result]The rate of albino seedlings not only was related to kanamycin concentration,but also had relationship with solution volume during soaking process.The difference between inbred line and hybrid was no significant.When 100 ml of kanamycin solution with concentration of 200 mg/L was used to soak seeds for 3 d,the rate of albino seedlings basically could reach 100%.When 100 ml of kanamycin solution with concentration of 100 mg/L was used to soak 20 seeds for 3 d to carry out resistance screening,the accuracy was up to 84.8% after verifying the screening test of T1 transgenic maize plants.[Conclusion]The method was feasible,which could be used as a simple method for screening transgenic gene maize with kanamycin resistance.     

盐芥叶片组织培养再生植株的研究

以盐芥叶片的切段为外植体,在MS培养基上再生出完整的小植株。在培养基中添加BA 3.0 mg/L或NAA 0.05 mg/L,BA 3.0mg/L较适合于愈伤组织和不定芽的诱导。研究建立起盐芥离体培养植株再生体系。