山羊胚胎心肌细胞分化发育的超微结构研究

利用透射电镜观察了山羊胚胎心肌细胞分化发育过程中超微结构的变化，结果表明：26日龄的山羊胚胎心肌细胞内肌节初步形成，随着胚胎发育，心肌细胞的肌节逐步完善，心肌细胞内的线粒体数量逐渐增多，排列规则，线粒体嵴逐渐变密，心肌细胞之间的连接也随着胚胎的生长发育逐渐形成和加强，26日龄山羊胚胎心肌内可见粗面内质网，34日龄的山羊胚胎心肌细胞胞浆内可见肌浆网，肌膜下池，横小管和二联管已形成，山羊胚胎心肌细胞内糖原粒丰富，随着胚胎日龄的增长，胞质内散布的糖原颗粒呈减少的趋势，而肌丝之间的颗粒呈增加趋势，26日龄的山羊胚胎心房肌内出现少量特殊颗粒。     

山羊胚胎肝脏发育的超微结构观察

运用透射电子显微镜对山羊胚胎期肝脏进行了超微结构观察。结果表明 ,山羊肝细胞在胚胎早期就有明暗之分。胆小管在胚胎早期已经形成 ,胆管由肝母细胞演化而来 ;窦状隙随机发生 ;肝脏造血以红细胞为主 ,且随胚胎的发育 ,造血功能逐渐降低。     

山羊胚胎心脏发生发育的形态学研究

应用光镜观察了山羊胚胎心脏的发生和发育过程，结果表明：15日龄20时的胚胎处于胚层分化阶段，中胚层上已有微血管发生；16－18日龄的胚胎在前肠门两侧发生两条对称的心内皮管；18－20日龄的胚胎在前肠腹面两条心内皮管合并成单管状心。同时，心管发生扭曲，心管内部开始分隔过程；20－34日龄的胚胎心脏的分隔基本完成；34－105日龄属于胚胎心脏进一步发育成熟的阶段。试验还发现山羊心骨骼中的纤维三角发生初期是由致密结缔组织构成，随着胚胎的发育转变为透明软骨，具有种特异性。     

山羊胚胎心脏发生发育的形态学研究

应用光镜观察了山羊胚胎心脏的发生和发育过程 ,结果表明 :15日龄 2 0时的胚胎处于胚层分化阶段 ,中胚层上已有微血管发生 ;16～ 18日龄的胚胎在前肠门两侧发生两条对称的心内皮管 ;18～ 2 0日龄的胚胎在前肠腹面两条心内皮管合并成单管状心。同时 ,心管发生扭曲 ,心管内部开始分隔过程 ;2 0～ 34日龄的胚胎心脏的分隔基本完成 ;34～ 10 5日龄属于胚胎心脏进一步发育成熟的阶段。试验还发现山羊心骨骼中的纤维三角发生初期是由致密结缔组织构成 ,随着胚胎的发育转变为透明软骨 ,具有种特异性     

山羊胚胎脊髓灰质的发育

对山羊胚胎脊髓灰质形成和发育的形态学变化进行了系统研究。结果表明 :山羊脊髓神经管闭合以后 ,其组织发生持续近 2 0 d才形成完整的 3层同心圆结构 ;山羊脊髓神经管的组织发生和脊髓灰质的形成在时间上有很大程度的重叠性 ;脊髓灰质各结构形成和发育的规律也不完全一致 ,有些结构发生早 ,而神经元分化较晚 ,如侧角、胶状质 ;有些结构发生虽然晚 ,但其中的神经元胞体分化和发育则较早 ,如 Clarke氏背核 ;有些结构发生早 ,神经元发育也早 ,如腹角运动神经元。     

山羊卵母细胞成熟的超微结构研究

应用光、电镜技术研究山羊排卵后和体外成熟培养后的卵母细胞的形态学变化。结果表明，排卵后４ｈ的输卵管卵母细胞和体外培养２４～２６ｈ的卵泡卵母细胞已具有充分成熟（获能）的形态学特征，卵周隙大，微绒毛竖起，ＭⅡ纺锤体长轴在质膜下呈垂直状，最大数量的皮质颗粒呈线形排列在质膜下，线粒体散在分布，本研究结果为山羊卵母细胞体外成熟和体外受精最佳时期提供了可靠的形态学依据。     

山羊2-细胞胚胎的电融合试验

对山羊2-细胞胚胎的电融合参数进行了研究。结果表明,从融合率、卵裂率、胚胎死亡率三个指标综合衡量,电场强度1.2kV/cm,脉冲时程40μs是适宜的参数。     

山羊卵母细胞成熟的超微结构研究

应用光、电镜技术研究山羊排卵后和体外成熟培养后的卵母细胞的形态学变化。结果表明：排卵后４ｈ的输卵管卵母细胞和体外培养２４～２６ｈ的卵泡卵母细胞已具有充分成熟（获能）的形态学特征，卵周隙大，微绒毛竖起，ＭⅡ纺锤体长轴在质膜下呈垂直状，最大数量的皮质颗粒呈线形排列在质膜下，线粒体散在分布。本研究结果为山羊卵母细胞体外成熟和体外受精最佳时期提供了可靠的形态学依据。     

山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育的超微结构研究

电镜研究表明,山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养７ｄ时,其超微结构基本与发育速度一致。在培养后期（１６ｄ）,卵母细胞的超微结构表现了不同的发育阶段,试验中观察到ＧＶＢＤ期,核膜开始部分消失的现象,并记录到１枚成熟卵子老化后的结构特征。但大多数卵母细胞培养结束时,未观察到ＣＧｓ质膜下的排列现象,有的卵母细胞线粒体仍为椭园形,板状嵴,细胞器迁移不完全正常。推测该时期有的卵母细胞部分代谢机能失调,从而导致某些合成（如ＣＧｓ）障碍或某些细胞器的迁移发生障碍。因此,培养后期可能是影响卵母细胞成熟的关键时期。     

山羊胚胎小脑皮质的形成和发育

对山羊胚胎小脑皮质形成及其神经元发育的形态学变化进行了研究。结果表明:(1)山羊胚胎小脑形成于第6周末,小脑皮质的外颗粒层、分子层首先形成。(2)发育过程中,山羊胚胎小脑的外颗粒层呈现出非常复杂的变化趋势:第7～10周外颗粒层达到一定厚度,第11～12周开始变薄,此后外颗粒层又开始变厚,直到第15～16周又变薄,17～18周再次增厚,此后再次变薄,直到出生前1周外颗粒层已经较薄,仅有4～5层细胞。(3)山羊胚胎的蒲肯野氏细胞可能在第8周以前就已聚集定位,第14周以后,蒲肯野氏细胞内部结构逐渐发育成熟,这说明蒲肯野氏细胞虽然发生较早,但其开始发育的时间较晚。     

影响羊早期胚胎发育阻滞相关基因的筛选

采用单胚构建的mRNA差异显示技术,探讨经体内发育和体外培养获得的山羊8~16细胞期胚胎基因的表达情况,并从在体内发育胚胎特异表达的片段中选择1个片段进行分析。结果表明:该片段与牛肥胖基因具有86%的同源性。该基因对卵母细胞的成熟以及早期胚胎的分裂和分化具有明显的作用,可调节母体的妊娠生理,影响生殖激素的分泌,从而对克服早期胚胎发育阻滞具有重要的作用。     

出生前山羊小脑皮质神经元超微结构的观察

应用超薄切片技术研究了第6周到出生前山羊小脑皮质神经元超微结构发育的变化。结果表明:(1)出生前山羊小脑皮质内颗粒层细胞在第10周龄以前一直处于未分化状态,第10周龄以后开始分化,但直到出生前山羊小脑皮质内颗粒层细胞内细胞器的种类和数量都增加缓慢。(2)小脑浦肯野氏细胞在第7周龄以前处于未分化状态;在第7周龄开始分化,第7～14周龄处于不成熟期;第15～18周龄浦肯野氏细胞处于发育成熟期,细胞内各种细胞器均出现并充满整个胞体,细胞核膜趋于成熟,核内常染色质发达,中央核仁发育成熟;浦肯野氏细胞自第19周龄开始进入成熟期,细胞内尼氏小体开始形成并发育,但其体积较小,界限不明显,这表明浦肯野氏细胞在出生前尚未完全成熟,出生后仍存在一个较长生后发育过程。     

波尔山羊胚胎徒手分割试验

在体视显微镜下，用含20％NCS的PBS液作为操作液，用显微玻璃针徒手分割波尔山羊早期囊胚。将13枚A级囊胚用于分割，其中11枚对称分割为两半胚，2枚为不对称分割。将13对半胚手术移植于13只同期发情的受体羊黄体侧子宫角．有5只受体妊娠，半胚移植受体妊娠率38．5％（5／13）。其中有2只妊娠受体发生流产，观察到3只流产胎儿，其余3只受体妊娠到期，获得3只正常半胚后代。     

杜泊绵羊和波尔山羊冷冻胚胎引进移植扩大试验

从南非引进杜泊绵羊(218枚)和波尔山羊(104枚)冷冻胚胎,以本地小尾寒羊(165只)和奶山羊(114只)为受体,经同期发情处理,分别向受体羊子宫角内植入1～2枚解冻的可用胚胎。结果表明:绵羊受胎率为36.7%,其中单胚受胎率为23.3%,双胚受胎率为46.8%。山羊受胎率为31.3%,其中单胚受胎率为25.0%,双胚受胎率为45.8%。胚胎移植绵羊和山羊双胚的受胎率均高于单胚(P<0.05)。而且与自然繁殖的羔羊相比,1～3月龄体重和平均日增重基本一致(P>0.05),羔羊的生长发育正常,经济效益显著。     

影响绵羊、山羊超数排卵及胚胎移植效果因素分析

在生产条件下，对3个优良品种的127只绵羊（道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只）和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素（FSH）实施超数排卵处理，然后对1231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植，旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明，使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚／只，显著高于澳大利亚产FSH效果（平均7．59枚／只）（P〈0．05）．而中国科学院产FSH的超排效果（平均10．38枚／只）与新西兰产无显著性差异（P〉0．05）；进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种绵羊实施超数排卵结果，获得平均可用胚胎数均无显著性差异（P〉0．05）；使用腹腔内窥镜法和常规手术法胚胎移植结果表明，移植妊娠率分别为57．44％和60．20％．2种方法间无显著性差异（P〉0．05）。由于中国科学院产FSH价格便宜，而腹腔内窥镜法胚胎移植可大大缩短操作时间，两者结合可降低成本、提高效率，适宜羊胚胎移植产业化应用。     

用单胚mRNA差异显示技术筛选山羊早期胚胎发育相关基因

用单胚构建的mRNA差异显示技术,对体外培养的山羊早期2、4、8~16细胞期胚胎的基因表达进行研究,并选择1条在2细胞期胚胎特异表达的条带进行分析。结果表明:该片段与人类肽基精氨酸脱亚胺酶基因具有83%的同源性。该基因通过对组蛋白和细胞骨架蛋白翻译后的修饰作用,对早期胚胎发育过程中基因转录和表达的调控起着重要作用,是羊早期胚胎发育过程中的重要影响因子。     

奶山羊乳腺发育过程中肥大细胞的分布

肥大细胞是乳腺内重要的免疫细胞,参与乳腺的免疫防御、发育与重建.对不同发育时期山羊乳腺内肥大细胞的分布特点进行研究,用卡诺氏液固定乳腺组织,甲苯胺蓝染色,肥大细胞呈蓝紫色.结果表明,肥大细胞在乳腺发育的青春期和退化期数量较多,妊娠期数量明显少于青春期(P<0.05).泌乳期内乳腺肥大细胞数量最少,与其他时期差异显著(P<0.05).     

体外培养山羊早期胚胎基因表达的研究

用单胚构建的mRNA差异显示技术,对体外培养的山羊早期2、4、8～16细胞期胚胎的基因表达进行研究,并选择1条在8～16细胞期胚胎特异表达的条带进行分析。结果表明：该片段与牛NADH脱氢酶1a亚复合体4基因具有97％的同源性。该基因影响细胞内ATP的合成,可能与羊早期体外培养胚胎的正常发育有关。     

山羊胎儿不同发育时期组织结构特点

【目的】获得安徽白山羊出生前后不同时期骨骼肌、肾脏、肝脏及腿骨组织结构的发育特点,以补充山羊组织系统发育资料,丰富山羊胚胎学相关内容。【方法】安徽白山羊在同期发情及配种后,采集胚龄65 d(F65)、120 d(F120)、135 d(F135)以及出生24 h(B0)胎羊和规范饲喂90 d(B90)羔羊的骨骼肌、肾脏、肝脏及腿骨,进行石蜡切片及HE染色,运用常规电镜技术对安徽白山羊不同发育阶段各组织结构进行观察。【结果】除F135与B0外的其余时期,骨骼肌同一部位、不同发育阶段的肌纤维细胞直径以及所有时期肌纤维细胞数量和密度的变化均差异显著(P0.05);在F120时期,初级肌纤维已完全转变为次级肌纤维。肾脏质量在除F120到F135时期外的其他时期均差异显著(P0.05),长度在所有发育时期均差异显著(P0.05),宽度则在除F120到F135以及F135到B0时期外的其他发育时期差异显著(P0.05)。F65时期肾脏远曲小管和近曲小管有较为明显的区别,在F135时期具有较为清晰的肾小囊,于F65到B0时期完成了肾小体的发育。肝脏质量也在除F120到F135时期外的其他发育时期均有显著差异(P0.05),长度在F65到F120时期及B0到B90时期变化显著(P0.05),厚度则是在除F65到F120时期和F120到F135时期外的其他时期间存在显著差异(P0.05)。在F65时期肝脏合胞体较多,至F135肝小叶基本形成,B0时期巨核细胞基本消失,B90时期肝细胞呈颗粒及泡沫状。股骨质量与胫骨质量均以B90时期显著高于其他时期(P0.05),胫骨和股骨长度在每个发育阶段均存在显著差异(P0.05)。在F120时期已经出现类似骨单位的结构,至B90时期已形成完整的骨单位。【结论】依据安徽白山羊骨骼肌肌细胞的直径、数量及密度推测,安徽白山羊肌纤维细胞从增殖到膨大的关键转折期处于胎龄65～120 d。