水貂阿留申病病毒CIEP抗原结合蛋白初探

以水貂阿留申病病毒对流免疫电泳(CIEP)细胞抗原为材料,经酶印迹(Westemblotting)测定,水貂阿留申病病毒CIEI细胞抗原与多克隆阳性血清反应,分子量为60000,50000和25000,而与CIEP阴性的抗水貂阿留申病病毒的单克隆抗体(Y—2—9)反应,分子量为60000,50000.因此初步确定水貂阿留申病病毒CIEP细胞抗原决定族位于分子25000蛋白上.     

应用单克隆抗体检查伊氏锥虫抗原变异

用广西骡株伊氏锥虫可溶性抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP_2/O)融合,获得了在ELISA中能与广西骡株伊氏锥虫可溶性变异表面糖蛋白反应的2个分泌IgG_1的单克隆抗体(McAb)。用McAb于ELISA抑制试验对四份不同期的广西骡株伊氏锥虫阳性血清的抗体成分进行了分析,结果四份锥虫阳性血清对于McAb与相应抗原决定簇的结合均未出现明显的抑制作用。表明血清样本间很少或完全没有与McAb相类似的抗体。这证明伊氏锥虫存在多个血清型亦即变异抗原型。     

分泌抗兔出血症病毒单抗杂交瘤细胞株的建立

以纯化的兔出血症病毒(RHDV)免疫BALB/C鼠,应用杂交瘤技术获的了分泌抗RHDV单抗(McAb)杂交瘤细胞17诛。其中有3株杂交瘤细胞分泌单抗的ELISA效价为1:409600(腹水)、1:4096(上清);5株单抗具有血凝抑制活性。兔抗RHDV高免血清对17株McAb的ELISA抑制率都大于90％。5株McAb亚类为IgG_1,8株为IgG_20,4株为IgG_20。各株McAb与欧洲棕色兔病病毒无抗原交叉反应,也无沉淀反应特性。     

水貂阿留申病的诊治

水貂阿留申病是由阿留申病病毒引起的一种传染病.该病毒属细小病毒科,在水貂中主要引发两种不同类型的疾病.成年水貂感染病毒后,表现出典型的水貂阿留申病,以体内产生高水平的血清丙种球蛋白,浆细胞增多,持续性病毒血症及由免疫复合物沉积引发的严重肾小球肾炎并伴有动脉炎、肝炎、卵巢炎或睾丸炎等主要症状.     

水貂阿留申病毒结构蛋白与非结构蛋白在疾病诊断与疫苗研发中的应用

水貂阿留申病是由水貂阿留申病毒引起的一种持续感染性疾病,危害毛皮动物养殖业的发展.水貂阿留申病毒的致病特点、免疫机制等与其他细小病毒不同,存在自身的复杂性.目前,众多研究者寻求新的疫苗来预防水貂阿留申病的发生,但没有取得理想的效果.疾病诊断及疫苗研发对防控水貂阿留申病具有积极的意义.水貂阿留申病毒结构蛋白在病毒感染、机...     

水貂阿留申病PPA-ELISA诊断方法的研究

用感染水貂阿留申病病毒G株(ADV-G)的猫肾传代细胞(CRFK)建立了检测水貂阿留申病病毒抗体的PPA-ELISA法。该方法敏感性高于CIEP 16倍,具有快速,准确的优点,可用于病原定位,是水貂阿留申病检疫和研究较为理想的方法.     

鸡马立克氏病病毒(MDV)单克隆抗体(McAb)的研究——Ⅰ.抗血清Ⅰ型MDV-McAb的制备及其主要特性的研究

将MDV京-1株强毒高温致弱毒株(B-1/at)感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)培养物经冻融、超声波裂解和差速离心制成粗提高毒抗原,免疫6～8周龄雌性BALB/C小鼠。取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,融合率为66％。用间接免疫荧光(IFA)法和间接ELISA法进行筛选,结果阳性率为25％,特异性阳性率为10.7％。通过有限稀释法克隆出D_(11)~3、D_(12)~3、和H_9~3三个分泌抗血清Ⅰ型MDV的McAb杂交瘤细胞株,其核内染色体数D_(11)~3为103±6条,D_(12)~3为96±6条,分泌的抗体均为IgG_1,k链。琼脂扩散试验(AGP)表明,无论有无聚乙二醇(PEG6000)存在,这些McAb均不产生特异性沉淀线,其IFA阳性反应能被特异性阳性血清阻断,经IFA、ELISA试验、IFA吸收试验和IFA、ELISA阻断试验等证明,这些McAb只与血清Ⅰ型MDV反应,不能与血清Ⅱ型MDV、血清Ⅲ型HVT和鸡的多种其它病毒发生交叉反应,也不与猪伪狂犬病病毒(Prv)双城株发生交叉反应,D_(12)~2株McAb有较明显的中和活性。经体内、外连续传代和冻存、复苏,两株细胞的分泌抗体能力稳定,     

水貂循环免疫复合物检测方法的建立及应用

本试验建立了检测水貂循环免疫复合物(CIC)的微量PEG沉淀比浊法和固相C_(1q)—SPA—ELISA.用这两种方法检测了38例健康水貂血清、126例阿留申病(AD)病貂血清.微量PEG沉淀比浊法的结果(OD值,(?)±S)为:健康水貂0.081±0.042,AD病貂0.198±0.066;固相C_(1q)—SPA—ELISA的结果(OD值,(?)±S)为:健康水貂0.245±0.057,AD病貂0.503±0.167,敏感性为0.25μg/mL.经统计学处理,健康水貂与AD病貂血清OD值之间呈极显著差异(P<0.01),表明水貂阿留申病的病理过程与CTC有关.建立的两种方法均具有快速、简便、重复性好和敏感性高等特点,两种方法的相关性显著.     

水貂阿留申病对流免疫电泳用诊断抗原的制备和试用

本文报道从金州水貂场的银蓝貂中分离出一株水貂阿留申病毒(ADV),定名为《辽金81-02》株。用它人工感染8月龄健康水貂并连续传代,可以保持病毒的强毒力。收获急性感染9天后发病貂的脾、肝及淋巴结作为种毒材料加以结冻保存,并成功地用它们制取阿留申病毒对流免疫电泳抗原,用于检测抗阿留申病毒的抗体,诊断疾病。 制取病毒抗原的方法:首先是用氟炭提取含毒组织乳剂,再经重复超速离心加以浓缩及部分提纯,并用盐酸-甘氨酸处理进行活化。每批抗原要用对照抗原及阳性血清进行抗原活性鉴定。 用这种初步纯化的活性抗原,能在水貂感染后7天,在对流免疫电泳中检出阿留申病毒的沉淀性抗体。试验证实:用对流免疫电泳检测阿留申病毒和抗体是特异性的,这要比碘凝集试验的特异性和敏感性高得多。经过对比试验,我们所制10批抗原的特异性、复制性及敏感性均可和美国的商品抗原相比。电泳时,可在45分钟内,在1％琼脂糖凝胶板的抗原抗体孔之间出现清晰可见的沉淀线。 Cho及Greevfield已报告,可以成功地用对流免疫电泳试验从病貂群中清除阿留申病。我们用试制抗原在金州水貂场对1500只各色型水貂进行AD抗体检测,结果扑杀阳性貂所提示的典型阿留申病的病理病变是符合一致的;与美国同类商品抗原平行检测130只貂的结果,也是符合     

水貂阿留申病免疫效果判定方法的确立及应用

用三种不同的生物制剂免疫阿留申病抗体阴性水貂,接种后如果循环免疫复合物含量较低(PEG沉淀法的OD值为0.09以下)可以获得一定的免疫力,抗体效价的高低不能决定其是否免疫; ANAE~+细胞百分率对判断阿留申病免疫确实或失败具有重要参考价值.     

猪瘟病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及阻断ELISA抗体检测方法的建立

为了建立一种经济可靠的猪瘟病毒(CSFV)抗体检测方法,本研究利用杆状病毒表达系统表达可溶性CSFV E2蛋白,并免疫BALB/c小鼠,制备了45株可稳定分泌抗CSFV E2蛋白单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞。经CSFV阳性血清阻断试验筛选出4株具有阻断活性的McAb,并经抗原表位鉴定确定单抗15A9识别的是可用于鉴别CSFV和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的线性表位TAVSPTTLR。利用辣根过氧化物酶(HRP)标记的15A9建立了CSFV阻断ELISA抗体检测方法,用此方法检测猪瘟疫苗免疫的猪血清,免疫后2周即可检测到抗体,且该方法检测BVDV阳性血清为阴性。本研究建立的CSFV阻断ELISA抗体检测方法为CSFV的疫苗免疫效果评估及其与BVDV的抗体鉴别提供了一种有效、便捷的方法。     

MD病毒抗独特型抗体的研制

制备鸡马立克氏病病毒(MDV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2模拟抗原诱导免疫应答的能力.用MDV免疫SPF鸡,分离提纯鸡抗MD-IgG(Ab1),Ab1免疫BALB/C鼠,用鼠脾细胞与SP2/0细胞制备Ab2杂交瘤细胞株,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,经克隆、纯化2×株抗MDV独特型抗体杂交瘤细胞株(6E5,7A12),其中6E5培养上清、腹水ELISA效价分别为4000×、10000×,免疫20 d攻毒,具有抗MDV感染保护.     

传染性法氏囊病病毒抗原表位分析--单克隆抗体的制备与鉴定

将传染性法氏囊病病毒(IBDV)分离毒株ZB和TA3的细胞培养物采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法浓缩纯化病毒,免疫BALB/c小鼠,运用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,建立了6株分泌抗IBDV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系1C1、1E6、2B2、2G8、3A2、3E2。间接ELISA测定,杂交瘤细胞培养上清液的抗体效价为102,诱生腹水的抗体效价为106～107。相加ELISA分析,这6株单克隆抗体对应不同的病毒抗原表位。中和试验结果表明,2G8对病毒有较强的中和能力,腹水的中和效价为105。用2B1和3E2配对建立的夹心ELISA可特异地检测IB DV。     

羊型布鲁氏菌单克隆抗体的研究 Ⅰ.M28 1D_2C-1杂交瘤株的建立

将NS-1小鼠骨髓瘤细胞与经羊型布鲁氏菌M23菌种免疫的Bal B/C鼠脾细胞融合,获得一株分泌高滴度单克隆抗体的M2B 1D_2C-1杂交瘤细胞。染色体数为87～104,平均为97±3.4。分泌物以ELISA法检测,滴度在1:30,000以上。抗体经ProteJnA Sepharose-CL4B亲和层析法提纯,在十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)泳出一条区带。抗体用2-ME还原后出现两条区带,显示了抗M28的McAb均来自免疫鼠脾细胞的重链和轻链,是均一性的单克隆抗体(McAb)。本抗体与抗鼠IgG_3标准血清免疫扩散试验呈阳性反应。杂交瘤细胞连续传代所产生的抗体,滴度稳定,将为研究其理化性质和生物学特性等问题提供了方便试剂。     

5株水貂阿留申病毒的分离与鉴定

为给水貂阿留申病疫苗的研制奠定基础,对疑似感染阿留申病死亡的水貂内脏处理后,接种猫肾传代细胞（CRFK）分离病毒,并对分离的毒株进行PCR鉴定及动物回归试验。与此同时,首次应用免疫过氧化物酶单层细胞实验（IPMA）对所分离的水貂阿留申病毒进行TCID50的测定。结果成功分离并鉴定出5株水貂阿留申病毒株,分别命名为ADV-DL124、ADV-DL125、ADV-ZJ3、ADV-QD2、ADV-QD3,各分离株的TCID50分别为105.7TCID50/ml、105.0TCID50/ml、104.6 TCID50/mL、105.2 TCID50/mL、104.1 TCID50/mL。动物回归实验显示,所分离的病毒对水貂具有致病性,为水貂阿留申病毒强毒株。     

水貂肠炎病毒VP2基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

为了对水貂肠炎病毒(MEV)疫苗免疫后抗体水平的监测和疫苗免疫效力的评价,本研究在分析MEV VP2蛋白抗原性的基础上,设计1对特异性引物克隆VP2蛋白抗原性较好的基因片段,将克隆的基因片段定向插入到pProEXHTb原核表达载体中,构建了VP2基因原核表达重组质粒pProEXHTb-VP2A,并实现在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,经鉴定表达的重组蛋白以包涵体形式存在,免疫印迹试验表明获得的重组蛋白具有与抗体较好的反应原性.应用His-Bind亲和层析柱纯化重组蛋白VP2A,以纯化后的重组蛋白作为ELISA诊断抗原,并对反应条件进行优化,初步建立了检测MEV抗体的VP2A-ELISA方法.确定了抗原最佳包被浓度为9.65 μg/mL,血清最佳稀释倍数为1:10.判定标准为S/P值≥0.312为阳性,S/P值≤0.243为阴性,介于两者之间为疑似.该抗原不与犬瘟热病毒、阿留申病毒阳性血清反应,具有良好的特异性.采用VP2A-ELISA对180份水貂血清样品进行检测,结果显示VP2A-ELISA与HI试验的符合率达到87.8%,表明建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,为现地免疫貂群抗体检测和MEV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法.     

水貂阿留申病的流行特点及病理变化

<正>水貂阿留申病又称浆细胞增多症,是由阿留申病毒引起的水貂以终生毒血症、全身淋巴细胞增殖、血清免疫球蛋白增多、肾小球肾炎、动脉血管炎和肝炎为特征的慢性病毒病。1流行病学1.1主要感染水貂,对其他动物感染情况不清自然或人工感染雪貂,可见到大部分阿留申病病状并检测到抗体。据报道,应用对流免疫电泳法检测发现有2%的狐、3.7%的浣熊、65.3%的臭鼬存在阿留申病抗体。人工感染大白鼠、小白鼠、     

水貂阿留申病的检测技术总结

为了有效地控制水貂阿留申病的发生 ,保护养貂业的健康发展 ,提高养貂的经济效益 ,用对流电泳免疫法进行了水貂阿留申病的检测。1　材料与方法被检血清 :采自某养貂场自留种貂 440只 ,其中母貂 35 0只 ,公貂 90只。貂趾尖毛细血管采血 ,2 0 0 0～ 30 0 0 rpm离心 2～ 5 min,分离血清备用。抗原 :采用猫肾传代细胞培养的阿留申病毒国家标准毒株 vtah- 1研制而成 ,专供水貂阿留申病对流免疫电泳实验诊断用。由农业部动物检疫所提供。阿留申病阳性和阴性参考血清 ,用于对照 ,由农业部动物检疫所提供。琼脂糖凝板的制备 ,取 3mm厚 1 0× 9cm的普…     

水貂阿留申病对犬瘟热及细小病毒性肠炎疫苗免疫的影响

对81份水貂血样进行了水貂阿留申、犬瘟热及细小病毒性肠炎的抗体进行检测,并对检测结果进行了对比分析,表明阿留申抗体阳性水貂的犬瘟热及细小病毒性肠炎抗体合格率、均值,均远低于阿留申抗体阴性貂,验证了阿留申病对水貂的免疫应答有较为明显的影响。     

对虾白斑综合症病毒双抗体夹心ELISA方法的建立

用将纯化的对虾白斑综合症病毒VP28蛋白免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了2株（2G9,3E5）可以稳定分泌抗对虾白斑综合症病毒特异性单抗的杂交瘤细胞株。用纯化的VP28蛋白免疫家兔,按常规方法制备多抗。选用单抗（3E5）包被ELISA板,用兔多抗作为捕获抗体,建立了对虾白斑综合症病毒的双抗体夹心ELISA检测方法。该方法具有良好的特异性和敏感性,为对虾白斑综合症病毒的检测提供了有效工具。