采用荧光显微技术对枣疯病病原进行鉴定

采集越冬期条枣品种枣疯病枝条对其进行水培,以正常枝条水培为对照,采用荧光显微技术(DAPI)对水培枝条的幼茎进行对比诊断研究。结果表明,越冬期枝条水培采集最佳时间为1月份,水培适宜溶液为1%霍兰格营养液,试材需固定在5%戊二醛溶液中放置于4℃冰箱2 h以上、1.0μg/m L DAPI染色剂中染色20 min,便可快速、便捷、定量定性判断枣疯病病原。     

枣疯病研究的进展

本文综述了近年来对枣疯病的发生、症状发展过程、症状形成的病生理学基础、传病介体昆虫、病原菌在枣树体内的运行规律以及枣疯病MLO单克隆抗体的检测技术等的研究新进展。     

枣疯病的危害及其防治

枣疯病 (jujubewitchesbroom .)是我国枣树上的严重病害之一 ,一旦发病 ,翌年很少结果。病树又称“公枣树” ,发病 3～ 4年后即可整株死亡 ,对生产威胁极大。全国各枣区均有分布 ,河北、山东、山西、河南、陕西、甘肃、新疆、辽宁、安徽、广西、湖南、江苏、浙江等地均有不同程     

枣疯病药剂防治技术研究初报

摘要：1999～2003年，针对由植原体(Phytoplasma)引起的、严重影响大枣生产的重要毁灭性病害枣疯病，通过有效的药剂筛选组配和田间筛选试验，筛选出对枣疯病具明显有防治效果的2种复配药剂，暂定名枣疯灵1号和枣疯灵2号。探索出采用主干钉孔和主干锯环，于春秋两季将药剂均匀涂抹于锯口内，用塑料布包扎的2次用药防治枣疯病新技术。应用该技术取得了明显的防病效果，对枣疯病的防治有效率高达95．0％，治愈率高达75．0％。解决了多年来对于枣疯病防治无有效方法和防病效果不理想的问题。     

荧光显微技术在土壤微生物可视化研究中的应用

对近年来荧光显微技术在土壤微生物可视化研究中的应用进行了综述,介绍了荧光显微镜技术、激光共聚焦技术、荧光原位杂交技术,并综合分析了各项技术的优缺点。     

DNA条形码技术在病原真菌分类鉴定中的应用

病原真菌是一种具有致病性的真菌,对植物有极大的危害。DNA条形码技术是通过对足够变异、短、能够作为标准目的基因的DNA序列进行分析,并进一步对未知物种进行快速、高效地分类和鉴定或者发现新物种的一项新技术。在介绍DNA条形码技术概况的基础上,对DNA条形码技术在病原真菌分类鉴定中的应用前景进行展望,以推进我国病原真菌DNA条形码在相关研究和应用领域的发展。     

大鲵赤皮病病原分离鉴定及防治试验

对人工养殖大鲵发生的“赤皮病”病原菌进行了分离培养,人工感染试验,鉴定出该病的致病菌为１－型荧光假单胞菌,发病大鲵表现症状为全身肿胀,呈充血发炎的红斑块和化脓性溃疡。菌株对链霉霉,氯霉素,氟哌酸,庆大霉素,“鱼病康－Ｉ”均高度敏感。治愈率为９３．４％,养殖中铒料加入“鱼病康－Ｉ”,可防治该病的发生。     

冀北枣疯病发生规律及防治技术

1 发病规律 枣疯病病原是一种类菌质体,寄主是枣树和酸枣树.据多年观察,该病一般是在枣树上一个枝或几个枝的枣股上先发病,有的是根蘖先发病或与枝同时发病,而后扩展到全株.     

植原体的侵染对不同抗性枣叶片内源IAA、ZT的影响

对不同抗性枣品种组培苗嫁接接种前后叶片内源激素含量进行的高效液相色谱分析结果表明,枣各抗病品种比敏感品种内源游离IAA含量水平高,不同抗性的枣品种接种病原后较健康对照含量低,且都存在极显著差异。枣敏感品种内源ZT含量水平高于抗病品种,且有至少5%差异水平。接种后较接种前内源ZT含量水平提高,且达到了极显著水平。     

基于secY基因对山东临沂枣疯病植原体的分子鉴定

利用FD9f／r引物对采自山东临沂的枣疯病样品进行secY基因的PCR扩增,并进行了序列测定,结果表明,该特异片段大小为1421bp。对获得的序列与NCBI数据库中相关植原体序列进行同源性分析、构建系统进化树和模拟RFLP分析,结果显示山东临沂枣疯病植原体属于secYV—C亚组,与secYV—B亚组的樱桃致死黄化株系（CLY5）和secYV—N亚组的桃树致死黄化印度分离株系（PY—IN）的亲缘关系最近,在亚组水平上进一步明确了山东临沂枣疯病植原体的分类地位。     

枣疯病植原体新疆分离物16S rDNA基因克隆与序列分析

利用植原体16SrDNA基因保守序列通用引物对新疆阿克苏地区和喀什地区的疑似枣疯病植株总DNA进行常规PCR和巢式PCR检测,分别扩增出1.5kb和1.2kb的特异性片段。对片段进行克隆、序列测定分析及系统发育树构建,结果表明,新疆枣疯病阿克苏分离物和喀什分离物的16SrDNA基因序列同源性极高,达到100%,与16SrⅤ组植原体的同源性达到98.4%以上,并且与16SrⅤ-B亚组中的枣疯病山东莱芜株系、山东龙口株系同源性最高,达到99.5%,因此归属于榆树黄化组16SrⅤ-B亚组。首次报道新疆枣疯病植原体16SrDNA的序列,确定新疆枣疯病植原体的分类地位,为枣疯病的早期诊断和检测提供依据。     

小麦蓝矮病植原体延伸因子(EF-Tu) tuf基因序列的同源性分析

 【目的】利用分子生物学方法分析小麦蓝矮病植原体延伸因子tuf基因，从亚组水平上确定小麦蓝矮病植原体的分类地位。【方法】电镜观察自然发病的小麦蓝矮病病叶；用引物fTufu/rTufu对小麦蓝矮病植原体延伸因子tuf基因进行PCR扩增；核苷酸序列测定及分析。【结果】经电镜超微结构观察，在韧皮部观察到大量典型植原体。通过PCR扩增得到约850 bp的特异片段。感受态转化后，进行测序，结果表明小麦蓝矮病植原体tuf基因片段长842 bp，编码280个氨基酸。分析比较15种植原体延伸因子tuf基因的同源性，结果表明小麦蓝矮病植原体与三叶草绿变（KVF）亲缘关系最近，核苷酸同源性为99.9％，氨基酸同源性为100％。【结论】从亚组水平上确定了小麦蓝矮病植原体的分类地位，为研究小麦蓝矮病植原体的来源及致病分子机理提供理论依据。     

枣疯病病树中内源激素的变化研究

【目的】揭示枣疯植原体对枣树内源激素的影响，弄清枣疯病病树中内源激素的变化趋势。【方法】应用HPLC法分别对健株、病株和盐酸土霉素治疗后转健植株中的细胞分裂素（玉米素，Zeatin）、生长素（吲哚乙酸，IAA）、赤霉素（GA3）和脱落酸（ABA）的含量进亚周年检测。【结果】在根部，健株、治疗株和病株中IAA、GA3和ABA的含量没有明显区别，但在7、8月份病株根部中Zeatin的含量要明显高于健株；在叶部，健株、治疗株和病株中的IAA、GA3和ABA的含量也没有明显区别，但在生长后期病株叶片中Zeatin含量显著高于健株。不同患病程度叶片中激素的比较结果表明，患病程度越重，Zeatin/IAA（C/A）比值越高。【结论】植原体侵染枣树植株后致使其内源激素失衡，主要是细胞分裂素含量的增加，最终导致了枣疯病症状表现。     

犬细小病毒病分子生物学诊断研究进展

就近年发展起来的犬细小病毒病的分子生物学诊断技术作一阐述。     

用荧光显微镜技术观察药用野生稻(Oryza officinalis Wall)和转基因水稻的不亲和性

 采用荧光显微镜技术观察转基因水稻花粉在药用野生稻柱头上的萌发及在花柱内的生长过程,以明确两者之间不亲和性发生的阶段,为判断其能否发生基因漂流提供依据。结果表明,两种转基因栽培稻(Y003和99t)的花粉在药用野生稻柱头上的萌发率均比药用野生稻自花授粉的低,花粉管在花柱中的生长速度较慢,且分别在到达花柱中部(Y003)或花柱基部(99t)时停止生长,顶端异常膨大,杂交子房逐渐萎缩,结实率为0。药用野生稻与栽培稻杂交不亲和的原因是花粉管在花柱中停止生长、不能进入胚囊完成受精,在自然条件下转基因栽培稻中的外源基因     

枣树VA菌根侵染率的田间调查

本研究对河北省赞皇县、高邑县、望都县、河北农业大学标本园等地枣树的ＶＡ菌根自然侵染率进行了调查。结果表明：所调查的枣树均有ＶＡ菌根菌侵染,但ＶＡ菌根的自然侵染率因立地条件、树龄、品种不同而异。树龄越大,侵染率越高;土壤肥力高或过低均不利菌根菌的侵染。     

胶束增溶荧光体系测定微量铁的研究

在HAc-NaAc缓冲介质（pH值5.00）中,发现溶液中的铁（Ⅲ）能与茜素黄-罗丹明B反应生成稳定的络合物且使其内源性荧光明显猝灭。据此,建立铁（Ⅲ）-茜素黄-罗丹明B-吐温80体系荧光猝灭体系法测定铁的新方法。该体系的最大激发波长λex=365nm,最大发射波长λem=585nm,铁（Ⅲ）的浓度在1.20×10^-7～1.80×10^-5mol/L时与其荧光强度差值△F呈良好的线性关系。方法的检出限为8.02×10^-8mol/L,相对标准偏差为1.02%,回收率为97.64%～102.39%。采用该方法测定水和茶叶中的铁,结果令人满意。     

烤烟感染赤星病后4种酶动态的研究

 本文研究11个烤烟品种接种赤星病病菌后,过氧化物酶(POD)同工酶、多酚氧化酶(PPO)、硝酸还原酶(NR)和抗坏血酸氧化酶(AAO)活性的变化规律,结果表明,相对抗赤星病强的品种,PPO在接种36h内活性升高,以后下降;POD同工酶活性变幅大,变化快,接种初期活性稍下降,然后增强,其中以阴极端2,4同工酶带增加较快,接种180h后就由弱酶带变为强带;NR活性变化不大;AAO活性提高.相反,抗赤星病弱的品种,ppo活性低于对照;POD同工酶变化不大,呈下降趋势;NR活性变幅大;AAO在接种初期活性下降,84h后回升.通过对不同品种的烤烟烟株接种赤星病菌后的4种酶活性的测定,探察到了一些抗病机理,为进一步筛选烟草抗赤星病的生化指标作了研究.