当归RAPD反应条件的优化

以当归DNA为模板,对影响当归RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立当归RAPD反应的最适体系。通过正交法及单因素试验对RAPD反应条件进行优化,7个试验因子的最适条件为:模板DNA 0.5 ng/μL,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,Taq酶0.8 U,退火温度36~37℃,循环次数40。     

余甘子基因组DNA提取及RAPD反应条件优化

以余甘子叶片为材料,研究了余甘子基因组DNA提取方法及RAPD反应条件.结果表明,采用改良的SDS方法,提取的DNA质量较高,适宜于RAPD-PCR分析.在25μL反应体积中,RAPD分析的优化反应体系为:0.6mmol·L-1Mg2+、500-600μmol·L-1dNTP、300nmol·L-1随机引物、25ngDNA、1.00-1.25UTaqDNA聚合酶.     

基因组DNA的提取及RAPD条件优化

提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U Tag酶     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl２ 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。     

亚麻RAPD的反应体系优化及引物筛选

对亚麻RAPD反应条件进行了优化：在25μL反应体系中,含10×Buffer,Mg^2＋（1mmol·L^-1）,Taq酶1U,Ge-nome DNA 50ng,dNTP0．25mmol·L^-1,RAPD primer 1．5／μmol·L^-1。PCR反应程序为：94℃预变性4min;94℃变性40s,37℃退火1min,72℃延伸90s。40个循环;72℃延伸10min。同时利用3个有代表性的亚麻品种从70条引物中筛选出12条多态性好、重复性高的引物,为亚麻的分子鉴定奠定了基础。     

抗旱型小麦基因组DNA的提取及RAPD反应体系优化

采用CTAB法和SDS法提取抗旱性小麦基因组DNA.结果表明:CTAB法提取的DNA纯度高,RNA和蛋白质含量低,可用于RAPD反应.同时对影响RAPD反应的5个重要因素进行了筛选,确定了RAPD最优反应体系:25μL反应体系为2.5 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L dNTP,10 pmol引物,25 ng模板,0.75 UTaq酶.     

枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化

[目的]研究枸杞基因组DNA的提取及RAPD反应体系的优化。[方法]采用了进一步优化的CTAB法提取枸杞基因组DNA,检测所提取的DNA的浓度范围,并对RAPD反应体系进行了科学、合理的优化。[结果]结果表明,浓度范围在3．5～5．5μg/μl,完全能够满足RAPD—PCR的要求。[结论]该方法具有步骤少、费用低、效率高等特点,比较适用于枸杞基因组DNA的提取。     

人参黑斑病菌RAPD反应体系的优化

采用改良的CTAB法提取人参黑斑病菌的基因组DNA,建立人参黑斑病菌RAPD反应的体系.最佳体系容积为25μL,其中包括10×Taq配套缓冲液2.5μL,模板DNA 20 ng/μL,引物15 pmol/L,dNTP 150μmol/L,Taq DNA聚合酶1 U,Mg2+1.5 mmol/L,其余部分用DW补充.PCR扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性1 min,40℃退火1 min,72℃延伸2 min,40次循环,72℃延伸7 min.     

苜蓿基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

比较了CTAB法和SDS法提取苜蓿基因组总DNA的效果,这两种方法得到的全基因DNA具有较好的完整性,但从DNA的提取纯度可以看出,CTAB法优于SDS法.实验对苜蓿RAPD反应条件进行了优化:在25μL反应体系中,含10×Buffer(20mM MgCl2),1UTaq酶,25ng的模板DNA,150 mol/L的dNTPs,0.2 mol/L引物.PCR反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性15 s,37℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸10 min;最后4℃保存.     

苹果RAPD反应体系的研究

对苹果基因组 DNA的 RAPD扩增体系各参数进行筛选比较 ,建立的最佳反应体系为 :模板 DNA 1 .0 mg/L ,引物 1 .5mg/L ,Taq DNA聚合酶 0 .1 mol/(L· min) ,Mg2 +2 .5mmol/L,d NTPs0 .4mmol/L。     

春兰基因组DNA提取及RAPD反应体系的优化

以春兰为研究材料,对春兰基因组DNA的提取以及RAPD-PCR反应体系进行了优化。结果表明,在提取液中加入PVP和β-巯基乙醇去除酚类物质,采用高盐沉淀DNA和多次洗涤去除糖类,可以得到高质量春兰基因组DNA。电泳检测表明,所获得的DNA完整,无降解,完全可以满足R-APD等分子标记分析的需要。同时对春兰RAPD-PCR反应体系中各个影响因素进行了优化,建立了适合春兰R-APD分子标记的最佳反应体系,即20μl反应体系中含1UTaqDNA聚合酶,60μmol／L dNTPs,2．25mmol／L Mg^2＋,1．0μmol／L引物,1．5ng／μl模板DNA。     

大花蕙兰与国兰花粉活力及柱头可授性分析

花粉和柱头具有较高的活力是保证杂交育种工作有效开展的关键。采用氯化三苯基四氮唑（TTC）,碘,碘化钾（I2-KI）和醋酸洋红等3种染色法测定了大花蕙兰Cymbidium hybridum和国兰不同种和品种的花粉活力,用联苯胺-过氧化氢法测定了大花蕙兰和国兰部分品种的柱头可授性并观察柱头分泌黏液情况。研究结果表明：碘一碘化钾染色法和醋酸洋红染色法都不适合大花蕙兰和国兰花粉活性的测定,TTC染色法是观察花粉活力最直观的方法。大花蕙兰与国兰的花粉活力是随着开放时间的延长,经历从弱变强再变弱的过程,大花蕙兰和国兰的花粉分别在开后25～35d和15～25d活力最佳。大花蕙兰和国兰的柱头在整个花期中均具有一定的可授性,其中大花蕙兰在20～40d内的可授性最强,45d以后其柱头可授性逐渐减弱。国兰在15～25d内的柱头可授性最强,30d以后柱头的可授性逐渐消失。总体而言,整个柱头可授性是随着时间的变化从弱到强再到弱的一个过程。     

兰属品种的RAPD鉴定和亲缘关系分析

用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对兰属7个种的9个品种进行遗传多样性和亲缘关系分析。从60个随机引物中,筛选出6个对9个供试兰花品种均能产生多态性谱带的引物。在这6个引物所检测的64个位点中,61个位点为多态性位点,占总位点数的95.3%。聚类分析结果表明,不同兰花品种之间存在明显的遗传差异,而且根据RAPD标记进行的兰花品种聚类结果与传统的形态学分类结果基本一致,只是莲瓣兰与建兰组的分类地位有一些差异。     

芫荽RAPD体系优化

以芜萎基因组DNA为模板,对RAPD扩增反应条件进行优化,以期建立适合芜荽的RAPD的最优反应体系,结果表明:PCR扩增体系(总体积20μL)为:模板DNA1.0 ng·μL-1,dNTP 0.45 mmol·L-1,随机引物1.3μmol·L-1,Taq酶0.6 U,Mg2+2.0 mmol·L-1,退火温度39℃,...     

平菇基因组DNA的提取及RAPD体系的优化

应用SDS与β-SH乙醇结合的方法对平菇菌丝体、原基、菇蕾和成熟子实体4种材料的基因组DNA进行了提取,并对影响RAPD反应的各因素进行了优化,20 μL反应体系中,模板加入量为6～10 ng,引物加入量10 pmol,dNTPs(各2.5 mmol)加入量为1.5～2 μL,Taq酶加入量为0.5U,退火温度设置在略低于引物Tm值的范围.     

砀山酥梨基因组DNA提取和RAPD条件优选

分别以砀山酥梨不同品系的成熟叶片、幼叶和芽为材料,采用SDS法提取基因组DNA,比较了不同材料的提取效果,并以此为模板进行RAPD反应,优化了RAPD反应条件。结果表明:用幼叶和芽均能提取高质量的基因组DNA,可直接用于RAPD分析,而用成熟叶片虽能提取到基因组DNA,但不能直接用于RAPD分析;优化的RAPD反应体系为:反应体积50μL,包含80ng左右模板DNA、5μL市售10×PCRBuffer、2.0mmol/LMgCl2、120μmol/LdNTPs、3U的Taq酶、0.5μmol/L随机引物;热循环程序为94℃预变性5min,使模板DNA充分变性,然后进入下列温度循环,94℃变性30s,36℃退火45s,72℃延伸90s,循环数40,最后72℃延伸7min。     

春兰根状茎的增殖与分化条件优化

以春兰种子无菌萌发的根状茎为材料,采用正交设计方法,研究了春兰根状茎增殖与分化的适宜条件.结果表明,根状茎增殖适宜的培养基为1/2MS+3 mg·L-1BA+蔗糖3%+香蕉5%+琼脂0.8%,根状茎分化适宜的培养基为1/2MS+3.0mg·L-1BA+1.0mg·L-1NAA+0.8mg·L-1IBA+蔗糖3%+琼脂0.8%.使用100 g.L-1香蕉作为附加物,春兰根状茎在培养30d后重量可达初重的2.1倍.根状茎在固体培养过程中不发生褐变现象,添加活性炭能促使根状茎产生根毛类似物.     

五种林木蚜虫的RAPD分析

对洋槐蚜Aph is robin iae、桃蚜Myzus p ersicae、女贞卷叶绵蚜P rociph ilus ligustrifoliae、中华忍冬圆尾蚜Amph icercidus sina lon icericola和柏大蚜C inera tujaf ilina等5种危害林木的蚜虫进行了随机扩增多态性DNA(RAPD)分析。研究结果表明:从6种随机引物中筛选出扩增效果好、多态性明显的3种引物S169、S147和S18,这3种引物在5种蚜虫中总共扩增出45个RAPD标记,分子量在238~2 355 bp范围之间,多态频率达100%,利用这3种引物均可单独区分5种蚜虫。     

苜蓿基因组总DNA提取及RAPD反应条件优化

采用CTAB改良法,从苜蓿成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA.对RAPD反应程序的重要参数进行摸索和优化试验,建立的适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,模板DNA浓度135 ng·μL-1,10×缓冲液浓度2.5 mmol·L-1,10碱基引物浓度15pmol,TaqDNA聚合酶1U,dNTP浓度1.5 mmol·L-1,Mg2 浓度2.5 mmol·L-1.