细胞的抗原表位研究方法

多表位疫苗有望成为预防多种病原体感染的理想疫苗,因而被认为是将来疫苗的发展方向。抗原表位是研究抗原的免疫机制和表位疫苗的基础,近年来在表位研究方面取得了一些可喜的进展,特别是抗原表位的研究方法。B细胞表位的研究方法已经不局限于通过交叠合成多肽进行研究,又诞生了噬菌体随机肽库以及表位预测等方法;在T细胞抗原表位的研究方面也有了相应的预测方法,尤其是将ELISPOT试验、体外抗原提呈试验等应用于T细胞表位活性的鉴定,极大的促进了T细胞表位的研究进展。文章全面系统地对B细胞表位与T细胞表位的研究方法的进展进行了综述。旨在为表位和表位疫苗的研究提供先进的多种技术方法。     

猪瘟病毒E2蛋白抗原表位的研究

蛋白质抗原表位 (抗原决定簇 )是蛋白质抗原性的物质基础 ,一个蛋白质分子可带有多个不同的抗原决定簇 ,即抗原表位 (epitopes)。通常 ,抗原表位是指氨基酸序列已经清楚的抗原决定簇。蛋白质抗原表位的研究 ,对于设计具有免疫原性和中和活性的多肽、新型疫苗分子及新型诊断试剂具有较大意义。B细胞蛋白抗原表位的预测自从80年代Hopp和Woods提出亲水性参数对抗原表位预测的方法以来 ,已有许多参数、算法发表 [1～10],对B细胞蛋白抗原表位研究起到了巨大的推动作用。本文就猪瘟病毒(SFV)E2蛋白抗原表位的研究概况作一介绍。1猪瘟病毒E2抗…     

肿瘤多肽疫苗研究进展

肿瘤的发生、发展和治疗与机体免疫系统功能密切相关,伴随着肿瘤抗原、抗原递呈、T细胞识别机制的突破性研究进展,研究者发现抗肿瘤多肽疫苗能够通过肿瘤抗原多肽识别抗原递呈细胞表面的主要组织相容性复合体(MHC)分子,形成肽-MHC-T细胞受体复合物,引起相应的细胞毒性T淋巴细胞免疫反应,从而杀伤肿瘤。因此,研制既能打破肿瘤患者存在的免疫耐受又能诱发针对肿瘤相关抗原特异性免疫应答的高效多肽疫苗已成为肿瘤免疫治疗研究的热点。论文综述了肿瘤多肽疫苗抗肿瘤相关机制及其在该领域所取得的最新临床研究进展。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原表位研究进展

根据病毒表位与受体细胞结合部位的差异可分为B细胞抗原表位和T细胞抗原表位。对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的抗原表位的研究已有大量报道,论文根据PRRSV的基因组结构蛋白和非结构蛋白基因编码区特点,对鉴定的PRRSV相关抗原表位进行简要综述,为进一步开发PRRSV快速鉴别诊断方法和多表位疫苗奠定基础。     

口蹄疫病毒O型泛亚株VP1蛋白的二级结构及抗原表位预测

为获得口蹄疫病毒（FMDV）O/PanAsia毒株VPl蛋白的抗原信息,从而为制备多肽疫苗提供理论依据,运用生物信息学软件,对O/PanAsia毒株的结构蛋白VP1理化性质、结构功能以及细胞表位进行分析,预测抗原表位以选择合适肽段。应用ProParam、TMHMM Server、ProScale和SignaIP 等在线工具,分析VP1蛋白氨基酸序列,运用计算机技术和分子生物学软件,分析预测VP1蛋白的基本理化性质、结构功能以及可能的B细胞和T细胞抗原表位,筛选B细胞表位肽段并对VP1的两个主要T细胞表位CTL和Th细胞表位进行预测。结果显示：O/PanAsia毒株VP1 蛋白的等电点为9.49,相对分子质量为23 520.83;VP1蛋白的B细胞表位为8~23、135~149和193~205位氨基酸。预测该VP1有10个CTL和10个Th细胞抗原表位,表明其具有较好的免疫原性;最终筛选出VP1蛋白的5个CTL和5个Th优势表位。用生物信息学方法预测O/PanAsia毒株VPl蛋白为稳定性蛋白,含有T、B淋巴细胞抗原表位。本研究为FMDV的进一步研究和疫苗制备奠定了基础。     

肿瘤多肽疫苗的研究进展

肿瘤的发生、发展和治疗与机体免疫系统功能密切相关,伴随着肿瘤抗原、抗原呈递、T 细胞识别机制的突破性研究进展,研究者发现抗肿瘤多肽疫苗能够通过肿瘤抗原多肽识别抗原呈递细胞（antigen presenting cell ,APC）表面的主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex ,M HC）分子,形成肽‐M HC‐T细胞受体（T cell receptor ,TCR）复合物,引起相应的细胞毒性 T 淋巴细胞（cytotoxic T lym‐phocyte ,CTL）免疫反应,从而杀伤肿瘤。因此,研制既能打破肿瘤患者存在的免疫耐受又能诱发针对肿瘤相关抗原（tumor‐associated antigen ,TAAs）特异性免疫应答的高效多肽疫苗已成为肿瘤免疫治疗研究的热点。文章综述了肿瘤多肽疫苗抗肿瘤相关机制及其在该领域所取得的最新临床研究进展。     

噬菌体呈现技术在抗原表位研究中的应用

抗原不是通过它的完整分子来发挥功能的 ,它的特异性是通过其表位 ( epitope)来实现的。通过对抗原表位的分析既可为抗原分子与机体免疫应答的研究奠定基础 ,又可为疫苗设计、药物研制以及特异血清学诊断方法的建立提供依据 ,所以该领域备受免疫学家的关注。研究抗原表位的方法有多种 ,其中噬菌体呈现技术依据其能容纳大量多肽信息的特性 ,成为抗原表位分析的有利工具之一。1　噬菌体呈现技术的原理噬菌体呈现技术是由 George Smith[1] 于 1 985年建立的一种基因表达筛选技术 ,其基本原理是将目的基因克隆在特定表达载体如 M1 3、fd、f1等…     

猪圆环病毒2型免疫学研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)感染猪体后,可引发猪体内相应的细胞免疫反应和体液免疫反应,同时可造成免疫系统损伤,其中包括CD4+/CD8+/MHC II T细胞和B细胞显著减少,相关细胞因子γ-干扰素、IL-a和IL-10增加,产生病毒中和抗体等。人们已鉴定了PCV2衣壳蛋白的多个B/T细胞抗原表位,其中包括PCV2特异的氨基酸残基231～233和195～202和PCV1和PCV2共有的氨基酸残基156～162和175～192位;T细胞抗原表位包括Rep蛋白的第81～100位和201～220位氨基酸和ORF3蛋白的第31～50位氨基酸。在PCV2疫苗研究中,灭活疫苗和亚单位疫苗成为现时养猪生产中的常用疫苗、病毒活载体疫苗和DNA疫苗也成为疫苗研究的热点。     

多表位疫苗构建研究进展及其兽医临床应用

<正>多表位疫苗(multiepitope vaccine)也称鸡尾酒式疫苗,是一种基于目标抗原表位氨基酸序列设计的新型亚单位疫苗。根据设计方法不同,可分为线性串联多表位疫苗、多价抗原肽表位疫苗、病毒颗粒样疫苗等形式。根据抗原表位类型不同可分为B细胞表位疫苗、T细胞表     

抗原表位及其在血吸虫疫苗研究中的应用

血吸虫病是世界上危害最严重的寄生虫病之一，其疫苗的研究是世界血吸虫病防治的一项工作重点也是一大难题。抗原表位是疫苗设计和免疫识别的基础，本文对抗原表位在疫苗设计中的分子理论基础做了阐述．介绍了其在血吸虫疫苗设计中的应用，并提出了一些问题与展望。     

鸡传染性法氏囊病病毒VP3蛋白的原核表达及其B细胞抗原表位鉴定

为鉴定鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP3蛋白中的B细胞抗原表位,本研究将IBDV的VP3基因亚克隆于pET-28a中,构建了表达重组质粒pETVP3,经IPTG诱导在E.coli BL21(DE3)中表达了重组蛋白(rVP3).Western blot鉴定表明,rVP3能被IBDV抗血清特异性识别.同时,根据IBDV VP3的氨基酸序列,合成覆盖VP3全序列的重叠多肽,并与载体蛋白BSA藕联制备多肽人工结合抗原.Peptide-ELISA和Dot-ELISA检测结果表明VP3中有2个线性表位可以被已制备的单克隆抗体(MAb)识别,即~(728)PRDWDRLPYLNL~(739)和~(982)PKPKPKPNAPTQ~(993);Dot-ELISA结果显示,在VP3中还存在另外4个线性多克隆抗体识别位点:~(818)SLANAPQAGSKSQRA~(831),~(851)QREKD TIUSKKMETMGIYFATP~(872),~(876)ALNGHRGPSPGQLKYWQNTREI~(897)和~(961)QMKDLLLTAMEMK~(973).这些抗原表位的鉴定为开发IBD表位疫苗奠定了基础.     

CD8~+T细胞表位鉴定技术研究进展

CD8~+T细胞表位通过MHCⅠ分子呈递到细胞表面,激活CTL细胞从而介导并调节机体抗内源性抗原的免疫应答。MHC-peptide稳定性试验通过TAP缺陷的RMAS细胞转染克隆在细胞水平鉴定CD8~+T细胞表位与MHCⅠ分子的亲和力;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)通过检测IFN-γ的分泌水平评估抗原免疫后机体的细胞免疫应答能力,具有较高的敏感性和高效性。四聚体技术通过流式细胞仪分析抗原特异性CD8~+T细胞的表型和功能特征。论文介绍了CD8~+T细胞表位的特征和上述3种表位鉴定方法的基本原理和研究进展,为CD8~+T细胞表位的鉴定和表位疫苗的研制提供参考。     

新型多肽表位技术研究进展

多肽表位作为抗原的重要组成成分,可以被宿主免疫系统B细胞产生的抗体（Ig）和T细胞受体（TCR）识别,从而诱导机体产生免疫保护作用。传统的研究方法如交叠肽合成等费时费力,极大地限制了多肽表位的研究。随着生物信息学、高通量测序、CRISPR/Cas9、质谱（MS）等技术出现以及TAP非依赖型蛋白加工机制的不断阐述,使表位的研究得到不断完善。作者介绍了最新的多肽表位研究方法,包括利用计算机对B细胞和T细胞表位的预测、基于MHC与抗原肽结构作用为基础的方法、结合高通量测序技术的表位筛选方法、结合新型基因编辑技术的表位筛选方法、TAP非依赖性T细胞表位的最新研究等,并对今后多肽表位研究的发展进行了展望。     

非洲猪瘟病毒P72蛋白合成肽疫苗的构建及其免疫效力评估

【目的】构建非洲猪瘟病毒CAS19-01/2019株(GenBank登录号:MN172368.1)结构蛋白P72的合成肽疫苗,通过免疫小鼠评估合成肽疫苗的免疫效力。【方法】利用ProtParam、SOPMA等软件分析P72蛋白的理化性质与结构信息,通过ABCpred、SVMtrip、IEDB预测P72蛋白的T细胞与B细胞抗原表位,筛选出显著的表位多肽区域,合成多肽辅以弗氏佐剂腹腔注射免疫小鼠,检测免疫组小鼠产生的特异性抗体、T淋巴细胞亚群、脾脏淋巴细胞增殖、细胞因子白介素4(IL-4)、IL-2、γ干扰素(IFN-γ)、免疫球蛋白(IgG),从体液免疫与细胞免疫角度评估合成肽的免疫效力。【结果】综合分析得出P72蛋白是稳定性亲水蛋白,二级结构中α-螺旋、β-转角、延伸链、无规则卷曲分别占19.35%、5.42%、25.08%和50.15%。筛选出了P72蛋白的8个优势抗原表位,626－634、520－528、298－306、203－211位氨基酸处为T细胞抗原表位,587－606、232－251、110－129、39－58位氨基酸处为B细胞抗原表位。整合优势表位合成2个多肽P72-1与P72-2,首次免疫小鼠14 d时可检测到P72-1与P72-2的特异性抗体,首免后28 d达到最高值,其最高抗体效价分别为1∶25 600与1∶12 800;免疫后小鼠T淋巴细胞亚群CD4^＋/CD8^＋显著上升(P＜0.05);脾脏淋巴细胞增殖试验结果显示,免疫组淋巴细胞数量均极显著升高(P＜0.01);细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ含量均极显著增加(P＜0.01)。【结论】本研究成功研制2种合成肽疫苗,在免疫效力上P72-2高于P72-1,二者都能产生高水平的特异性抗体,刺激脾脏淋巴细胞增殖,诱导产生细胞因子IL-4、IL-2、IFN-γ,本研究为非洲猪瘟合成肽疫苗研制奠定技术基础。     

畜禽MHCⅠ分子抗原结合槽研究进展

主要组织相容性复合体Ⅰ（major histocompatibility complex, MHCⅠ）结构的解析可直观地阐释其结合抗原表位的机理,进而有效利用其特异性细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte, CTL）免疫应答。目前已报道的畜禽MHCⅠ精细结构包括牛（N*01301、N*01801）、猪（SLA-1*0401）和鸡（BF2*2101、BF2*0401、BF2*0201、BF2*1401）,以上MHCⅠ复合体结构由α1、α2和α3共3个α链和β₂m组成。其抗原结合槽多肽由A、B、C、D、E、F 6个口袋组成,一般B、F口袋决定了不同MHCⅠ分子结合不同性质的抗原多肽。鉴于同一物种不同的MHCⅠ等位基因及不同物种MHCⅠ基因的序列差异性,使得不同的MHCⅠ分子结合不同性质的抗原多肽片段,此外,不同MHCⅠ分子也可递呈同样的抗原多肽,实现不同MHCⅠ分子的交叉递呈。畜禽MHCⅠ的结构清晰地阐释其递呈抗原多肽的机理,促进了畜禽免疫学和疫苗应用的研究。     

B细胞抗原表位预测方法的研究进展

抗原表位是抗原分子的主要功能单位。B细胞抗原表位的准确定位对疫苗设计、诊断试剂的研发及高通量抗体的制备均具有重要意义。作者对目前常用的B细胞线性表位预测方法和B细胞构象表位预测方法进行概述,并对不同预测方法进行比较,旨在为病原微生物抗原表位研究提供一定的理论参考。     

恙虫病立克次体蛋白抗原分子生物学研究进展

恙虫病立克次体是以恙螨为惟一传播媒介的病原体,目前研究较多的恙虫病立克次体蛋白抗原主要是相对分子量(Mr)为22000,47000,56000,58000和110000的蛋白。综述了Mr56000和58000等蛋白抗原的结构、基因结构及同源性、B细胞表位和T细胞表位、在诊断和分型上的应用价值以及作为候选疫苗的应用前景等,以期为恙虫病防治提供理论依据。     

鸡主要组织相容性复合体分子结构与抗病性关系研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分，主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中，诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来自细胞质中蛋白多肽，MHCⅡ分子结合来自细胞内囊泡中蛋白多肽和细胞外源性多肽。MHC等位基因多态性对其分子空间结构和结合肽段特性非常重要。不同单倍型MHC由于等位基因的差异其肽结合基序也存在差异，进而影响MHC分子递呈抗原肽数量，影响T细胞免疫应答强度，最终导致不同单倍型鸡对同一病原体表现出抗性或易感性。与人MHC分子相比，紧凑且简单的鸡MHC优势表达单个Ⅰ类分子的特性可以决定鸡是否会对某种病原体存在抗性。为了更好地认识鸡MHC分子在病毒感染过程中的作用及抗病性机制，解析其结构并进行功能研究非常必要。作者主要介绍了鸡MHC的分子结构特征，重点比较了不同单倍型MHC分子结构差异与抗病性的关系，总结了鸡MHC肽结合基序和禽流感病毒抗原肽的鉴定工作，为进一步理解MHC分子递呈肽给T淋巴细胞的机制和开发T细胞表位疫苗奠...     

病毒抗原表位及其研究方法

免疫细胞通常难以借助其表面受体识别整个抗原分子,而仅识别抗原大分子上的一个特定部分,称为表位(epitope),又称抗原决定簇(antigenic determinant).因而表位代表了抗原分子上的一个免疫活性区,负责与抗体分子或免疫细胞表面的抗原受体结合,严格说来,抗体的特异性是针对表位而不是针对完整的抗原分子的[1].病毒抗原表位分析一直是病毒学研究的热点.近年来分子生物学方法的广泛运用,使病毒及蛋白抗原表位筛选、研究方法的不断提高.抗原表位的研究对于我们了解病毒致病的分子机理、研制合成肽疫苗将有很大帮助,如根据口蹄疫病毒结构蛋白表位研制的合成肽疫苗.在HIV的防治方面,近期研制的针对HIV gP160的表位疫苗(epitope vaccine)等都是表位研究应用的极好例子[2].目前,人们甚至能够精确到表位上1～2个氨基酸在保护性抗体诱导、致病力等方面的作用.     

1株非洲猪瘟病毒p30蛋白单克隆抗体识别的B细胞抗原表位的鉴定

旨在研究非洲猪瘟病毒(ASFV) p30蛋白的B细胞抗原表位,本研究制备了p30蛋白的单克隆抗体(mAb),并以该单克隆抗体为工具进行B细胞抗原表位定位。首先,通过原核表达及Ni柱亲和纯化获得p30蛋白,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠进行杂交瘤细胞制备,通过间接酶联免疫吸附试验(iELISA)筛选出阳性杂交瘤细胞,并以细胞表达的方法制备单克隆抗体;采用间接免疫荧光试验(IFA)和蛋白质免疫印迹(Western blot)对单克隆抗体的特异性进行鉴定。利用IEDB表位预测软件对p30蛋白B细胞抗原表位进行预测,根据预测结果对CP204L基因进行截短表达,利用IFA、Western blot和iELISA对其抗原表位进行鉴定。最后,利用噬菌体十二肽库对制备的p30单克隆抗体进行4轮生物淘选,筛选多肽表位,并与上述基因截短表达筛选方法进行比对。特异性鉴定结果显示,该单克隆抗体能成功识别感染猪肺泡巨噬细胞的ASFV;基因截短表达筛选结果表明,其识别的抗原表位区域为⁸⁴M～K¹⁴²;噬菌体淘选试验结果表明,¹¹⁶TSSFETLFE¹²⁴为本试验制备的单克隆抗体所识别的p30蛋白抗原表位核心序列,该结果进一步缩小了表位分布范围。本研究制备了p30蛋白的1株单克隆抗体,并对其抗原表位进行鉴定,为血清学诊断试剂的研发和p30蛋白功能研究奠定基础。