培养条件对三角枫愈伤组织生长及总黄酮含量的影响

以MS为培养基,研究了光照、温度、植物生长调节剂等条件对三角枫愈伤组织诱导生长和总黄酮含量的影响。结果表明:光照对愈伤组织中总黄酮的积累有极显著影响,对愈伤组织鲜重生长有显著影响,对愈伤组织干重生长影响较小。与暗条件相比,连续光照不利于愈伤组织形成,但有利于愈伤组织中总黄酮积累,间断性光照有利于愈伤组织形成,但不利于总黄酮积累;黑暗不利于愈伤组织中总黄酮积累。三角枫愈伤组织生长及黄酮类化合物生物积累的适宜温度为25℃,与之相比,低温(15℃)或高温(35℃)培养时愈伤组织生长及总黄酮积累均受到抑制,变温(15℃转25℃、25℃转35℃)培养减弱愈伤组织生长,不利于黄酮的积累。4种供试植物生长调节物质对三角枫叶愈伤组织生长和总黄酮积累的影响均达到了极显著水平,愈伤组织生长的最佳生长调节剂组合是0mg/L2,4-D+1.0mg/L6-BA+0.5mg/LNAA+0.5mg/LIBA;促进总黄酮积累的最佳生长调节剂组合是0mg/L2,4-D+1.5mg/L6-BA+1.0mg/LNAA+1.0mg/LIBA。     

苹果叶片愈伤组织的诱导培养

为获得优质的愈伤组织,以国光和富士苹果的幼嫩叶片为外植体,研究了不同的消毒方法、植物生长调节剂种类及其浓度、光照条件、叶片放置方式等因素对叶片愈伤组织诱导的影响。结果表明:(1)直接进行光培养,愈伤诱导率只有50%～55%,先暗培养14 d再光培养与先暗培养21 d再光培养叶片的愈伤组织诱导率都达100%,但前者产生的愈伤组织结构紧密呈淡黄色,后者出现白化疏松的愈伤细胞。暗培养14d为诱导叶片愈伤组织形成的有利条件。(2)未添加激素的MS基本培养基比添加激素的MS培养基有利于降低叶片的褐变率。(3)采用叶片远轴面接触培养基比近轴面接触培养基的愈伤诱导率高约25%～30%,且诱导愈伤组织形成的时间较早。(4)国光叶片在MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基中,富士叶片在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA的培养基中愈伤组织的诱导效果最佳。     

天山雪莲组织培养体系的优化

通过研究天山雪莲种子消毒萌发条件、愈伤组织培养和继代培养条件,优化出了一套能获得总黄酮成分含量较高的天山雪莲愈伤组织的组织培养体系。结果表明:将种子用70%乙醇处理30 s、0.1%升汞溶液处理10 min,并种植于MS培养基,可获得生长状态良好的雪莲苗。比较了7种培养基对天山雪莲无菌苗叶片愈伤组织的诱导情况,愈伤诱导率均能达到100%,其中4种培养基获得愈伤组织适合继代培养。在继代培养中,①号培养基的愈伤组织易分化出根,②号培养基、③号培养基的愈伤组织易分化出芽;④号培养基可得到较多黄绿色致密愈伤组织。对①号、②号、③号、④号培养基获得愈伤组织的总黄酮含量检测,发现其总黄酮含量为1.14%～7.37%,远高于《中华人民共和国药典(2015版)》不少于0.15%的规定,以②号培养基的愈伤组织总黄酮含量最高。     

毛桃叶片愈伤组织诱导

分别以毛桃组培苗和胚培苗叶片为外植体,探讨了不同植物生长调节剂质量浓度组合对毛桃叶片愈伤组织诱导过程中愈伤组织形成率和愈伤组织相对生长量的影响,并对不同处理诱导产生的愈伤组织进行评价。结果表明适合毛桃组培苗叶片愈伤组织再生的最适培养基为MS+1.2 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L Ag NO3,其愈伤组织形成率和愈伤组织相对生长量分别为88.09%和3;适合毛桃胚培苗叶片愈伤组织再生的最适培养基为MS+1.0 mg/L TDZ+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L Ag NO3,其愈伤组织形成率和愈伤组织相对生长量分别为69.77%和4。2种来源叶片外植体最适培养基中诱导产生的愈伤组织其愈伤组织形成率和愈伤组织相对生长量虽有差异,但所产生的愈伤组织均为黄绿色,紧实有突起,具备良好的再生能力。     

人参组培过程中SERK和WUS基因的表达特性

为研究人参叶片、愈伤组织以及从愈伤组织诱导出来的芽中与体细胞胚发生相关的基因的表达特性,在已报道的与植物愈伤组织诱导及体细胞胚发育密切相关的2个标志基因SERK和WUS,以actin为内参基因,采用RT-PCR方法分析这2个基因在人参叶片、愈伤组织及从愈伤组织长出来的芽中的表达特性。结果表明:虽然SERK和WUS在所有样品中均有表达,但在叶片和愈伤组织中的表达量无明显差异,而愈伤组织中分化出来的芽当中的表达量明显高于叶片和愈伤组织。     

苦荞种子萌发条件和愈伤组织的诱导

为提高荞麦种子萌发率及其愈伤组织的诱导效果,研究了不同激素对苦荞(FagopyrumtataricumGaertn.)种子萌发以及外植体诱导愈伤组织的影响.结果表明:(1)在25℃时,未经赤霉素预处理,但在附加4mg/L赤霉素的MS培养基上培养的苦荞种子萌发率最高;(2)下胚轴的愈伤组织的诱导率明显高于子叶和上胚轴,下胚轴是最理想的外植体;(3)在附加4mg/L24,-D和0.1mg/L6-BA的MS培养基上,荞麦愈伤组织诱导效果最好.     

光质对野葛叶片愈伤组织的诱导及其可溶性蛋白含量的影响

对不同光质诱导野葛叶片愈伤组织及其可溶性蛋白含量的变化进行了研究.结果表明:蓝光对野葛叶片愈伤组织的诱导效果最好;蓝光下,野葛叶片愈伤组织的可溶性蛋白含量最高.     

白木香愈伤组织与叶片DNA快速提取方法的确定

[目的]确定白木香愈伤组织与叶片DNA的快速提取方法.[方法]用TE、ES1、ES2 3种提取液及相应的方法提取叶片和愈伤组织总DNA,通过琼脂糖凝胶电泳检测提取产物,通过普通PCR及荧光定量PCR检查DNA的可用性,并将PCR产物经克隆测序验证.[结果] ES1法提取的叶片和愈伤DNA条带清晰,纯度较高;普通PCR和荧光定量PCR可扩增出200和600bp左右的目的条带.ES2法提取液电泳不能检测到DNA条带,但PCR可扩增出愈伤组织200bp左右目的条带.TE法得到的提取液检测不到DNA条带且PCR不能得到目的条带.[结论] ES1提取液及相应的提取方法可用于白木香愈伤和叶片DNA高通量快速提取,为沉香属植物种质研究和分子研究奠定基础.     

玉竹愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养体系的建立

以玉竹叶片和根状茎为外植体,研究植物生长调节剂、碳源和pH对玉竹愈伤组织诱导的影响以及植物生长调节剂对愈伤组织增殖的影响,通过正交试验初步建立并优化玉竹愈伤细胞的悬浮培养体系。结果表明,叶片和根状茎愈伤组织诱导的最佳培养基均为MS+1.0mg·L~(-1)?6-BA+0.5mg·L~(-1)?NAA+30%蔗糖,培养基最佳pH5.6,叶片和根状茎愈伤组织增殖的最佳植物生长调节剂组合均为2.0mg·L~(-1)?6-BA+0.8mg·L~(-1)NAA,且根状茎愈伤组织的诱导率和增殖倍数均明显高于叶片。根状茎愈伤细胞悬浮培养的最佳接种量80g·L-1,最佳植物生长调节剂组合1.5mg·L~(-1)6-BA+0.6mg·L~(-1)?NAA,细胞生长曲线与多糖含量变化曲线均呈"S"形,细胞最佳继代周期16d,多糖含量在培养14d时最高,培养基pH呈先下降后上升然后趋于稳定趋势。     

当归愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究

为了建立当归愈伤组织的诱导及其细胞悬浮培养的技术体系,采用正交试验法研究不同植物生长调节剂对当归叶柄、根尖和叶片愈伤组织诱导的影响,以及采用植物细胞悬浮培养技术研究当归不同外植体细胞的生长特性及其活性成分的积累规律.结果显示,叶柄最易诱导出愈伤组织,其次是根尖和叶片,2,4-D对当归不同外植体愈伤组织的诱导均具有极显著的效果,其中诱导叶柄和根尖愈伤组织形成的最佳组合均为1.0 mg/L 2,4-D+ 0.2 mg/LNAA+ 0.4 mg/L 6-BA,诱导率达到80％以上.此外,当归根尖和叶柄细胞分别悬浮培养至15、21 d时,细胞量分别为926.7、990.6 mg/L;根尖细胞悬浮培养至21 d时,阿魏酸和藁本内酯的含量分别达到为96.6、167.5μg/g.结论为,当归叶柄和根尖均是诱导愈伤组织形成的适宜外植体和应用于细胞悬浮培养的最佳细胞来源.     

明党参组织培养研究

采用正交设计方法,研究了NAA、6-BA、MS培养基对明党参叶片与叶柄愈伤组织诱导的影响.结果表明,叶片和叶柄都可以诱导出愈伤组织,但叶片较叶柄更易诱导出愈伤组织;在不同激素配比的培养基中,以1/2MS+NAA 1.0mg/l+6-BA 2.0mg/L的培养基激素组合对明党参愈伤组织诱导效果较好.     

骏枣叶片组织培养及植株再生技术研究

通过对骏枣叶片诱导愈伤组织、愈伤组织诱导不定芽、不定根的分化及再生植株移植的最佳条件的探讨,建立了稳定的骏枣叶片离体培养及再生植株体系.     

何首乌叶愈伤组织的诱导和二苯乙烯苷含量的检测

[目的]对何首乌叶进行愈伤组织诱导并检测叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量。[方法]在25℃暗箱培养条件下,将何首乌叶在含有浓度为1 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和浓度为0.4 mg/L萘乙酸（NAA）的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,共转接3次,并通过HPLC法检测叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量。[结果]诱导出的愈伤组织生长状况良好,并且测得叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量为0.37 mg/g。[结论]由叶诱导出的愈伤组织中含有二苯乙烯苷,该愈伤组织可以用于进一步的生理生化研究。     

中国石竹叶片愈伤组织形成·分化及植株再生

[目的]为了研究中国石竹叶片愈伤组织的诱导及植株的再生。[方法]通过叶片愈伤组织诱导再分化和叶片直接诱导不定芽2种途径获得了石竹的再生植株。[结果]以植株中部带叶基的叶片愈伤组织诱导再分化效果最好。叶片愈伤组织在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.3mg/L培养基中不定芽分化率最高(50%～60%)。幼叶在MS+NAA 0.3mg/L+6-BA1.0mg/L培养基上培养47d可直接诱导出不定芽。与愈伤组织分化成芽相比,幼叶直接诱导不定芽芽数少,但生长快,苗较高。最佳增殖培养基是MS+6-BA 0.2mg/L+IAA 0.2mg/L,最佳生根培养基是1/2MS+IBA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+0.2%活性碳。[结论]叶片作为外植体具有来源丰富、取材方便、操作简单的优点,探讨植物叶片的再生分化特性具有实际的意义。     

藤茶植株叶果与组培物中二氢杨梅素含量的比较研究

为比较藤茶经组织培养后不同组织中二氢杨梅素的含量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定藤茶叶片、果实、悬浮培养液、嫩叶、愈伤组织、老叶中二氢杨梅素的含量。结果表明:嫩叶、叶片、老叶、果实、愈伤组织、悬浮培养液中二氢杨梅素的含量分别为:25.528%、13.709%、13.337%、6.255%、11.616%、0.829%。愈伤组织中二氢杨梅素含量与叶片接近,悬浮液中含量最低,可以尝试运用愈伤组织培养法生产二氢杨梅素。     

夹竹桃叶提取液的抑菌作用研究

用杯碟法,以夹竹桃叶提取物为材料,选用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母、拟康氏木霉为实验菌种,测定了夹竹桃叶的丙酮提取物对各实验菌种的抑菌圈并比较了各浓度提取液放置不同时间的抑菌效果.试验结果表明,夹竹桃叶提取液对各实验菌种均有抑制作用,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最为明显.     

噻苯隆对月季芽增殖及月季叶片愈伤诱导的影响

为研究噻苯隆( TDZ)对月季的影响,以皇家巴西诺月季的茎段和叶片为外植体,MS为基本培养基,添加一定浓度的细胞分裂素和生长素及不同浓度的TDZ,对其芽增殖和叶片愈伤组织诱导进行了研究.结果表明:促进侧芽增殖的最佳培养基为MS+NAA 0.lmg/L+6BA1.0mg/L+TDZ 2.0mg/L,诱导月季叶片形成愈伤的最佳培养基为MS+NAA 0.5mg/L+2,4D5.0 mg/L+ TDZ 1.0mg/L,0.5 cm×1.0 cm的切块有利于愈伤组织的产生.     

高粱幼嫩叶段愈伤诱导与植株再生

[目的]为了建立以幼嫩叶段为外植体的高粱组培技术。[方法]选用育种上常用的8个高粱恢复系材料,进行愈伤组织诱导与分化再生,研究2,4-D浓度对初级愈伤组织诱导的影响,分别对8个材料的诱导率和分化率进行统计,并观察愈伤组织形态。[结果]结果表明,2,4-D是幼嫩叶段诱导愈伤的关键因素,未添加2,4-D的培养基中不能产生愈伤,适宜的2,4-D浓度为2 mg/L。基因型对愈伤组织的质量和形态有很大的影响,不同基因型材料的诱导率和分化率存在很大差异。[结论]通过比较,筛选出了3个诱导率高、愈伤形态优良且分化率较高的基因型三尺三、R111、8643变。     

割手密(Saccharum spontaneum L.)幼叶的组织培养

 研究了从割手密幼叶诱导愈伤组织的条件,试验表明,培养基以MS附加2,4-D1～4mg/L为佳,所接种的幼叶以4cm以内为适宜的区段.不同材料在诱导愈伤组织和分化成苗方面都表现出明显的差异,说明云南的割手密在生理和遗传上存在着丰富的种内变异.     

辣椒枣试管苗叶片再生植株研究

以辣椒枣(Ziziphus jujuba Mill.)组培苗叶片为试材,研究了不同培养方式、接种方式以及不同生长调节剂对离体叶片诱导不定芽再生的影响。结果表明,适当的暗处理有利于辣椒枣叶片愈伤组织的形成,并能促进愈伤组织尽快形成芽点,有利于缩短叶片再生培养时间;叶片反放便于愈伤组织及芽点的观察,褐化率低,最终的不定芽再生数高于叶片正放,是辣椒枣叶片再生培养的最佳放置方式。正交试验结果表明,基本培养基,TDZ,IBA和糖4个因子对辣椒枣叶片再生影响大小排序为:基本培养基>糖>TDZ>IBA;1/2 MS(大)为最优培养基,WPM不适合作为辣椒枣的叶片再生培养基;辣椒枣组培苗叶片再生的最优培养基为1/2 MS(大)+TDZ 0.3 mg/L+IBA 0.1 mg/L+糖20 g/L,平均每叶片再生不定芽能达到5.4个。