血耳原生质体制备及其再生条件研究

采用L16(45)正交设计方法探讨了酶解体系、酶解温度、酶解时间、菌龄、渗稳剂对血耳原生质体制备及其再生的影响。结果表明:静置培养5 d菌丝体以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,采用1%溶壁酶+1%蜗牛酶,32℃酶解3 h,制备率为2.950×107个/mL,其再生率可达4.508×10~(-3)。     

灵芝原生质体制备与再生条件的研究

本文研究了不同酶浓度、酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂及菌龄等对灵芝菌丝原生质体制备与再生的影响，结果表明，菌龄为60h的菌丝，采用浓度为2％的溶壁酶以0．6M的甘露醇作渗透压稳定剂于pH6.5，30℃下酶解2h，当酶解液中湿菌体含量对0．1g/mL时，其原生质体数可达2^*10^7个/mL，且再生率达8．5％。     

灰树花原生质体制备与再生条件的研究

本文对灰树花 51 #菌株原生质体制备及再生条件进行了研究。结果表明 :液体摇瓶振荡培养 7天的菌丝 ,以 0 .6M的甘露醇作渗透压稳定剂 ,采用浓度为 2 %的真菌溶壁酶 ,在pH5 .5、30℃条件下酶解 5小时 ,原生质体制备率最高 ,可达到6 .6× 1 0 6 个 /ml,所得原生质体在两种不同的培养方式中均实现了再生。     

云芝菌丝体原生质体制备与再生条件的研究

研究了不同酶种类、酶浓度、酶解温度和时间、渗透压稳定剂、pH值及菌龄等因素对云芝原生质体制备以及不同再生培养基对云芝原生质体再生的影响。结果表明,菌龄3d的云芝菌丝体用3％溶壁酶,以pH5．5,0．4mol／L的KCl为稳定剂,30℃酶解5h获得的原生质体产量最高;用RMl再生培养基培养,原生质体再生率最高。     

金顶侧耳原生质体制备与再生条件的研究

采用单因素以及正交试验法探究金顶侧耳原生质体的制备及再生条件,结果显示:加富PDA液体培养基培养5天的菌丝,在以蔗糖为渗透压稳定剂配制2%浓度的溶壁酶条件下,30℃酶解2.5 h,原生质体得率为2.36×107个/m L;选择蔗糖再生培养基,再生率可达0.71%。     

毛木耳原生质体制备与再生条件的研究

通过对毛木耳原生质体制备与再生条件的系统研究,确定了原生质体制备的最佳出发菌龄、融壁酶浓度、酶解温度及酶解时间、渗透压稳定剂种类、浓度及最佳再生培养基配方。     

香菇YJ-01原生质体制备与再生条件的优化

以香菇菌株YJ-01为试材,以原生质体产量与再生率为指标,探究酶种类、酶解时间、酶解温度、pH、稳渗剂种类、稳渗剂浓度及菌丝菌龄等7个因素对原生质体产量与再生率的影响。通过单因素试验,选出了4个因素(酶解温度、酶解时间、菌龄和稳渗剂浓度)利用四因素二次通用旋转设计进行优化。结果表明:(1)YJ-01原生质体最佳制备条件:pH 5.0,0.5 mol/L MgSO_4溶液作稳渗剂,对5日龄菌丝体于28℃条件下酶解3 h。各因素对原生质体产量的影响作用依次为酶解温度酶解时间菌龄稳渗剂浓度。(2)YJ-01原生质体最佳再生条件为,当p H 5.5,以0.5 mol/L蔗糖溶液作稳渗剂,对6.5日龄菌丝体在27.8℃酶解2.9 h。各因素对原生质体再生率的影响作用依次:稳渗剂浓度酶解时间菌龄酶解温度。     

糙皮侧耳原生质体制备与再生条件

原生质体制备是通过体杂交或基因转导进行种质改良的基础。探讨了糙皮侧耳原生质体制备及再生条件。用ＭＹＧ培养菌丝，以甘露醇为稳渗剂，用１．５％溶壁酶Ｌｙｗａｌｌｚｙｍｅ进行酶解脱壁，在菌龄７天，酶液ｐＨＷＦＨＧ４．５，温度２８℃，酶解４ｈｒ的条件下原生质体产量最高（２０×１０＾６／ｍｌ，０．１ｇ湿菌丝），其再生率大于８％，菌丝培养前对接种物进行予切碎处理可进一步使产量提高约２倍，而再生率不并显著下降。     

灵芝原生质体的制备与再生研究

以泰山灵芝为试材,研究了菌龄、酶浓度、酶解时间、酶解温度、酶解pH、渗透压稳定剂对灵芝原生质体制备和再生的影响.结果表明:菌龄为7d,以甘露醇为渗透压稳定剂,采用酶浓度2.0％的溶壁酶,pH为6.0,31℃条件下酶解2.5h为灵芝原生质体制备的最适条件;并在原生质体再生固体培养基(以0.6 mol/L蔗糖为渗透压稳定剂)上,原生质体的再生率最高.     

松茸原生质体制备与再生的研究

本文针对酶种类及其浓度 ,酶解时间、渗透压稳定剂的种类及其浓度、菌龄及菌丝形态等对松茸菌丝原生质体制备与再生影响的研究。结果表明 ,采用三角摇瓶培养 3 d后、静置培养60 h的松茸菌丝体 ,在 3 0℃ ,p H6.5的条件下 ,以 0 .6M蔗糖为渗透压稳定剂 ,通过 2 .5 %溶壁酶、0 .5 %崩溃酶的复合酶进行2 .5 h酶解 ,松茸原生质体制备率与再生率最高     

猪苓质量标准的研究

以收集自全国部分省市的20批猪苓药材为试材,参照2010版《中国药典》,通过常规检查、薄层色谱鉴别及有效成分含量的测定,分析优化了猪苓饮片的质量标准,以期为猪苓药材的质量标准制订提供依据.结果表明:20批猪苓药材的有效成分含量及水分、灰分、浸出物含量均存在一定差异;为了更全面地衡量药材质量,建议规定酸不溶性灰分的含量不得超过3.5％,水溶性浸出物含量不低于11.0％,猪苓多糖含量不低于0.50％.     

白灵菇原生质体制备及再生的研究

研究了酶解时间、酶解温度、菌龄和渗透压稳定剂对白灵菇原生质体制备与再生的影响。结果表明,自灵菇用1％蜗牛酶与1％纤维素酶的混合酶液制备原生质体,酶解时间应控制在3h之内,以2h为最宜;酶解温度28℃左右;适宜菌龄为5目龄;以0．6mol／L蔗糖配制酶解液和作为制备与再生渗稳剂均最优,再生率最高,可达2．1％,比以甘露醇作为渗稳剂再生率提高近3倍。     

香菇孢子单核体原生质体的制备和再生的研究

本研究以香菇四种交配型的孢子单核本为材料,用酶解的方法制备出高得率的具四种交配型的原生质体,且均可再生。研究表明：四种交配型原生质体的再生率大小,与原生质体的得率高低并不是一致的,但与菌丝生长速度、再生菌落出现的时间以及交配型之间有一定的关系。这为原生质体的再生能力是受交配型基因控制的推断提供了实验证据。单一交配型的单核原生质体的大量获得也为蕈菌遗传学提供了一种新的研究材料。     

草菇原生质体制备与再生及诱变效应研究

研究了草菇原生质体制备与再生的最佳条件。试验结果表明,溶壁酶浓度2％,温度32℃,pH自然,以0．8mol／L甘露醇为渗透压稳定剂,用菌龄3d的菌丝酶解2h,可获得最佳原生质体再生效果。试验还分析了紫外线(UV)、^60Co-γ射线、硫酸二乙酯(DES)对草菇原生质体的诱变效应。     

鸡鮙菌和粗柄鸡菌的原生质体制备与再生研究

在适宜培养条件下,振荡培养4～5d的鸡纵菌(Termitomyces albuminosus)和粗柄鸡■菌(T.robustus)幼嫩菌丝,经过滤洗涤收集,以0.6mol/L KCl为渗透压稳定剂,用1％纤维素酶加0.5％蜗牛酶的混合酶液处理,于28℃酶解3～4h,可获大量原生质体,产量达2.82×10~6～3.24×10~6/mL。但所形成的原生质体再生能力较差,再生率仅0.6％～1.2％。本文还详细研究了菌龄、酶系统、酶解温度和时间等多种因素对这两种鸡纵菌原生质体形成和再生的影响。     

猴头菌融合育种原生质体制备与再生条件优化

以猴头菌0605为试材,采用单因素试验和正交实验,研究了酶系统、酶解时间、酶解温度、菌龄、恒温摇床转速单因素对其原生质体制备与再生的影响。结果表明:原生质体制备和再生的最佳条件为菌龄10 d的菌丝体,在酶系统2.0%溶壁酶+0.5%崩溃酶作用下,32℃酶解2.5 h,恒温摇床转速为120 r·min-1。该试验在最佳条件下获得的猴头菌原生质体数量与再生率均较高,为进一步开展猴头菌原生质体融合育种奠定基础。     

芹菜胚性细胞悬浮系原生质体分离及再生植株

利用芹菜胚性细胞悬浮系成功分离得到大量原生质体, 获得芹菜大量原生质体的最佳反应体系为: 酶液组成为3.0%纤维素酶Onozuka R210、1.0%离析酶R210、11%甘露醇、0.5% CaCl₂ ·2H₂O和0.1% MES; 摇床转速为80 r/min, 温度(25 ±2) ℃, 酶解时间5～6 h; 原生质体产量为25.00 ×10⁶ /g, 原生质体活力83.41%。原生质体浅层培养, 培养基为1 /2 MS + 1 mg/L 2, 4-D + 0.5 mg/L KT + 11%甘露醇+ 500 mg/L水解络蛋白, 两天后, 重新再生细胞壁之后进行第1次分裂, 逐步降低渗透压至甘露醇3% ,大约30 d形成小细胞团。小愈伤组织经增殖培养后在1 /2MS + 500 mg/L CH + 0.25 mg/L KT固体分化培养基诱导出不定芽, 30 d后再转入MS基本培养基, 获得完整的再生植株。     

影响灵芝原生质体再生的几个因素

本文比较系统地研究了培养基、酶解时间及单双层培养法等因素对灵芝原生质体再生的影响。结果表明,纤维二糖培养基及双层培养法比较适合灵芝原生质体再生。考虑到灵芝原生质体的得率以及不同酶解时间制备的灵芝原生质体的再生率,酶解2.5h的灵芝原生质体用于再生比较合适。     

猴头菌栽培模式研究

应有正交试验设计Ｆｕｚｚｙ分析法,研究了猴头菌袋料栽培中不同菌株、出菇方式及料袋袋宽对生物学效率的影响。结果表明,菌株Ｈ８９０８、袋宽１８０ｍｍ的料袋、两端出菇的组合为最佳栽培模式。以此模式栽培猴头菌,生长学效率达１６５％。     

香菇原生质体工程菌株的构建研究——I.香菇原生质体的分离与再生行为

本研究通过电镜观察与酶解分析确定香菇(Lentinula edodes)菌丝细胞壁组成.并进行了双核菌丝原生质体的分离和培养.研究发现:酶解过程中,菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来.合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是原生质体得率的重要保证;原生质体再生菌丝过程是一个间歇性的依赖于原生质团涌动流向的过程,再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起-哑铃状-分枝状等不同形态类型的再生阶段;再生菌丝体在形态上没有观察到锁状联合,栽培后未能结实,初步判断为单核菌株.