用蓝舌病优质琼扩抗原进行ELISA的试验研究

经用125份牛羊血清进行定性定量精确比较和对原用解聚抗原检测过的3020份血清的平行重复试验证明,优质琼扩抗原与解聚抗原在ELISA中检测效果一致,具有等效性。     

七种国内外蓝舌病琼扩和ELISA检测试剂的比对试验及结果分析

在国际贸易中．在双边签定的动物检疫条款中．检测蓝舌病的血清学方法一般要求用琼扩试验或ELISA试验。     

羊口蹄疫O型-亚洲1型二价灭活疫苗免疫后O型抗体水平的检测

为了探讨口蹄疫O型-亚洲1型二价灭活苗免疫接种羊后产生的O型抗体效价,采用不同免疫剂量和不同免疫时间免疫接种羊,应用正向间接血凝试验(IHA),检测其抗体消长规律.结果表明,羔羊母源抗体水平及维持时间与母羊抗体水平呈正相关,有效保护抗体能维持70 d左右;首免每只1 mL、2 mL同时免疫的4组间免疫抗体水平经方差分析差异不显著,首免不能产生有效的保护抗体水平;二免2 mL、2.5 mL不同时间免疫的4组,首免后15 d与首免后28 d进行二免产生的抗体经t检验差异极显著(P<0.01),首免后28 d二免的不同剂量组经方差分析差异不显著,有效抗体能维持约170 d,首免后15 d二免的免疫抗体水平最低;每只三免2 mL、3 mL的2个剂量组产生的有效抗体均能维持180 d,两组抗体经t检验差异不显著(P>0.05).     

A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗与全菌灭活疫苗的安全性和免疫效力的比较研究

制备了六批兔A型产气荚膜梭菌类毒素疫苗和其全菌灭活疫苗,并且对其安全性和免疫效力进行了比较研究。结果表明,类毒素灭活疫苗无毒副作用,局部刺激小,安全性好于全菌灭活疫苗。免疫效力结果二者无明显差异,两种疫苗的攻毒保护率均不低于4/5,免疫期均在6个月以上。     

应用Nested—PCR技术检测人工感染绵羊蓝舌病病毒

实验采用6只绵羊分成3组,一组作为对照接种BHK21细胞上清液,另二组分别接种BIV10和中国分离株Z1株,攻毒定期采血提取抗原并提取病毒RNA,同时进行琼脂扩散试验、普通PCR、Nested-PCR试验。结果在整个攻毒期间,琼脂扩散方法检测不到抗原,普通PCR方法只能在攻毒后12d-15d测得抗原,而Nested-PCR在攻毒后6d即可测得病毒RNA,并且可一直持续到30d。试验证明,Nested-PCR方法是高度敏感的检测抗原的方法。在临床上能够较早地检出抗原,这对于及时采取有效措施,控制疾病流行具有积极的意义。     

蓝舌病Ⅰ型灭活疫苗免疫绵羊后中和试验和cELISA检出抗体的特点与关系

为比较蓝舌病病毒(BTV)cELISA和血清中和试验(SNT)检测方法的特点与关系,通过灭活、浓缩,制备抗原含量为1、5、10、50、100μg/mL的BTV-1型灭活疫苗。每个含量为1组,并设对照组,每组6只绵羊,分别在0、3周免疫。每周采血1次,共采血6次。对所采血样分别用cELISA和SNT方法进行抗体检测。cELISA检测结果显示,免疫后第1周,抗体阳性率达到80.00%,第4周全部免疫羊转为抗体阳性,抗体产生较为迅速;SNT检测结果显示,中和抗体阳性率从免疫后第1周的6.67%持续上升至第3周的36.67%,至第4周达到70.00%,中和抗体产生持续而缓慢。随着时间延长,2种检测方法的符合率由23.33%增加到76.67%。当绵羊同时产生中和抗体和cELISA抗体时,中和抗体效价与cELISA抑制率间有显著的线性相关关系(r=0.63),相关方程为y=0.38+0.05χ。分析认为,中和抗体出现的时间之所以晚于cELISA抗体,可能是因为与宿主细胞识别并吸附的主要部位VP7蛋白位于病毒衣壳的中间位置,其主要表面抗原位点暴露需要时间。     

牦牛ETEC灭活疫苗的研制及免疫效力试验

制备了耗牛ETEC铝胶灭活苗、油佐剂苗和蜂胶灭活苗。分别使用3种佐剂灭活苗进行对比试验。经抗体监测表明在免疫后7天，蜂胶苗产生的抗体效价最高（2^7），随着时间的推移，油苗抗体儿价最高（2^9-10)，于免疫后29日，使用ETEC进行攻毒，免疫兔全部保护，对照兔全部死亡。证明牦牛ETEC3种佐剂灭活疫苗均能有效保护家兔免受ETEC攻击。     

牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻每后，牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明，灭活苗免疫后，牛的CD4^ 显著升高，可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关，攻毒后，γδT细胞均显著上升，免疫组在攻毒后3周仍保持在相当的高水平，IL－2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高，而CD8^ 细胞没有明显变化。     

禽流感油乳佐剂疫苗质量快速检测方法的建立

通过对低温冻融法、研磨法、稀释高速捣碎法、95%乙醇法及三氯甲烷法破乳效果比较,确定三氯甲烷为油乳剂疫苗的破乳剂.将不同抗原含量的H9和H5亚型灭活与非灭活疫苗破乳后分离上层水相,采用红细胞凝集(HA)试验,测定其HA价,结果发现脱乳后上层水相与未做成油乳疫苗并做相应稀释的原液的HA价下降1～3个滴度,且将不同稀释度制备H5亚型疫苗经脱乳处理后上层水相的HA价与荧光定量PCR结果基本一致.所建立的禽流感油乳剂疫苗质量的检测方法具有快速、经济、简便,尤其适合于对大批量及基层应用.     

蛋鸡免疫重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活疫苗抗体消长规律的研究

为了在临床上制定合理的禽流感疫苗免疫程序,用重组禽流感病毒H_5亚型二价灭活疫苗(H_5N_1,Re-5株+Re-4株)分别在14日龄、49日龄、105日龄免疫蛋鸡,免疫剂量分别为0.3ml/只、0.5ml/只、0.5ml/只。分别在第1、6、10、14、20、28、35、42、49、56、63、70、77、86、94、105、120、150、180日龄采血测定HI抗体效价。结果表明首免后HI抗体上升较慢较低,只有第二次免疫后,抗体才迅速升高。在70日龄(二免后3周)H5N1,Re-4HI抗体达到9.60log2,H_5N_1,Re-5HI抗体达到7.86log2。在120日龄(三免后2周)H_5N_1,Re-4HI抗体达到9.30log2,H_5N_1,Re-5HI抗体达到9.25log2。     

"禽福、亿妙灵"对雏鸡IBD疫苗接种后免疫细胞数量的影响

分别应用免疫组织化学和组织化学方法对使用免疫增强剂“禽福”和“亿妙灵”的1日龄SPF雏鸡接种IBD疫苗后,对其免疫器官胸腺、法氏囊、脾脏的T细胞和IgG、IgM、IgA抗体生成细胞数量的动态变化进行了较全面系统的研究。结果表明,不论是使用“禽福”,还是“亿妙灵”的雏鸡,接种IBD疫苗后,其上述各项被检指标均不同程度地高于IBD疫苗单独接种雏鸡。其中,“禽福”IBD疫苗接种雏鸡又较“亿妙灵”IBD疫苗接种雏鸡明显增加。表明免疫增强剂“禽福、亿妙灵”能明显提高雏鸡对IBD疫苗的免疫应答,增强IBD疫苗接种雏鸡对vvIBDV攻击的免疫保护率。     

4种佐剂对绵羊肺炎支原体的免疫辅佐效力研究

不同种类的佐剂对同种抗原的免疫辅佐效力不同。为筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)灭活疫苗的理想佐剂,本研究制备了4种不同佐剂的MO灭活疫苗,分别免疫成年家兔,用MO间接血凝试剂盒测定免疫后1～9周血清抗体效价。检测结果显示,4种疫苗在免疫后都能迅速产生抗体,其中用MO Buonavoglial's和ISA-760佐剂疫苗免疫家兔,产生抗体均于免疫后第3周达到高峰((5.67±0.70) log2,6.00 log2),到第9周时维持抗体高峰(6.00 log2,(6.00±1.00) log2);MO ISA-206和白油佐剂疫苗免疫抗体均于免疫后第4周达到高峰((4.33±0.57) log2,5.00 log2),至第9周下降约1个滴度。统计学分析结果显示,ISA-760、Buonavoglial's佐剂对MO的免疫增强效力显著优于ISA-206和白油佐剂(P<0.05),是MO灭活疫苗的理想候选佐剂,为高效MO灭活疫苗的研发提供了科学依据。