豆瓣绿胚性愈伤悬浮培养条件优化及体细胞胚发生

本研究以豆瓣绿无菌苗叶片为外植体诱导获得质地疏松、稳定性高的颗粒状胚性愈伤组织,开展胚性细胞悬浮培养研究。结果表明:豆瓣绿胚性愈伤组织最适继代培养基为MS+0.6%琼脂+3%蔗糖+2,4 D1.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔14 d;体细胞悬浮最佳培养基为MS+3%蔗糖+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L,继代间隔7 d;体细胞悬浮最佳碳源为蔗糖,蔗糖最佳浓度为30 g/L;体细胞悬浮摇床最佳转速为110 r/min。本研究考察激素种类、激素浓度、碳源种类、糖浓度、摇床转速对体细胞胚悬浮体系的影响,并采用解剖镜进行形态学观察,为后期研究体细胞胚胎形态结构提供基础数据。     

红景天愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养

红景天的细胞培养是充分利用该树种优良特性的生物工程基础.试验以红景天的茎为外植体,研究愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系.结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS 1.0mg/L6-BA 0.2mg/L NAA 0.1 mg/L2,4-D,在此培养基上诱导的愈伤组织生长速度快、质地均一疏松;愈伤组织最佳生长培养基为MS-t0.6mg/L6-BA 0.1mg/LNAA 1.0mg/L2,4-D;且选择松散型愈伤组织和3.0×105个/ml的起始细胞浓度,25℃黑暗培养18d为红景天细胞最适悬浮培养体系.     

宁夏主栽水稻品种高频再生体系的建立

通过对宁夏多个主栽水稻品种愈伤组织的培养,结果表明,诱导水稻愈伤组织的最适培养基是:N6+2mg/L 2,4-D+0.5/L水解酪蛋白+0.5g/L L-脯氨酸+8g/L琼脂+30g/L蔗糖;水稻愈伤组织最适分化培养基是:MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA;水稻的最适生根培养基为:MS+0.5mg/L NAA.筛选出了诱导愈伤组织和愈伤组织分化的最适激素浓度配比和最适分化条件.     

马铃薯晋薯16号愈伤组织再生体系的建立

为建立马铃薯品种晋薯16号组织再生体系,以晋薯16号无菌苗为材料,对外植体类型、外植体表面消毒试剂浓度和根的诱导条件进行筛选,同时优化了愈伤组织诱导和分化的最佳植物激素组合及浓度。结果表明:愈伤组织诱导的最佳外植体为茎段;2%的次氯酸钠消毒效果较好;根的诱导使用含50g/L蔗糖的MS培养基较好;愈伤组织诱导培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+NAA 0.5mg/L为佳;愈伤组织分化培养基以MS+6-BA 1.5mg/L+GA3 2.0mg/L+ZT 1.0mg/L为佳。     

不同激素配比对橡胶树叶片愈伤组织诱导的影响

为拓宽橡胶树外植体来源,促进其组织培养技术的发展,本试验以橡胶树无菌苗叶片为外植体材料,采用不同激素及其配比,诱导其叶片愈伤组织的产生。当6-BA浓度一定时,随着NAA浓度的提高,叶片愈伤组织率有逐步提高的趋势,达到1.5 mg/L时,愈伤诱导率最高,而当6-BA浓度>1.5 mg/L时,愈伤诱导率呈现下降的趋势;通过KT与NAA的不同浓度配比组合发现：大多数培养基的愈伤诱导率都低于10%,其中有些还为0;NAA浓度相同时,6-BA的愈伤组织诱导能力明显好于KT。橡胶树叶片愈伤组织的诱导必须依赖于植物激素,在不含激素或单独使用某种激素的培养基中均不能诱导愈伤组织的形成,叶片愈伤组织诱导率最佳培养基为改良MS培养基+1.5 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,其诱导率达到26.7%。     

剑麻悬浮细胞体系的建立

为了获取良好的剑麻悬浮细胞体系,以剑麻无菌幼苗嫩叶为诱导材料,对剑麻胚性愈伤组织的获得,建立细胞悬浮系和影响悬浮细胞增殖的主要影响因子进行了探讨。结果表明:幼叶在培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA上诱导的愈伤组织,经1～2次继代培养后获得了颗粒状、浅黄色的胚性愈伤组织;接种于液体培养基接种量为2 g (鲜重),继代周期为7 d,经4～5次继代震荡培养建立了细胞悬浮系,细胞生长符合"S"型曲线,细胞浓度可达6.1×105～4.6×106个/m L以上;在悬浮细胞生长前期,pH值明显下降,在细胞对数生长期,pH值略有升高,并趋于平缓;最适宜的细胞悬浮培养基为(MS+1.5 mg/L 2,4-D+4.0 mg/L6-BA+350 mg/L水解酪蛋白, 30 g/L蔗糖, pH值为5.8)。通过建立剑麻悬浮细胞培养体系的方法,为进一步应用于剑麻悬浮细胞转化体系和多倍体育种等研究。     

苦豆子愈伤组织培养及其药用成分含量测定

本研究利用组织培养技术考察外植体种类、激素水平、水解酪蛋白浓度等不同因子对愈伤组织的生长状态的影响;同时采用分光光度法和HPLC测定不同继代次数愈伤组织中总黄酮和槐定碱的含量。结果表明,苦豆子愈伤组织诱导的最适外植体是子叶;愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,最佳继代培养基为MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 4.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L;总黄酮和槐定碱在第5次继代培养的愈伤组织中含量最高,分别为0.53%和0.0112%。因此,可选择第5次继代培养的愈伤组织作为苦豆子细胞悬浮培养的材料。     

激素配比对甘薯组织培养及试管苗移栽后生长的影响

研究植物外源激素6-BA和NAA不同配比对甘薯愈伤分化、继代扩繁、试管苗移栽后生长的影响,建立高效的甘薯茎尖离体脱毒培养和快速繁殖技术体系。以推广应用面积较大的甘薯品种‘烟薯25’、‘普薯32’、‘龙薯9号’和‘商薯19’为试验材料,在MS培养基中添加6个不同浓度配比的6-BA、NAA,配制愈伤分化培养基和继代扩繁培养基。探讨茎尖组织愈伤率、成苗率、愈伤组织直径、叶片数,同时调查试管苗移栽成活率、叶片数量、株高、基部茎粗等的差异,研究组培苗愈伤分化、继代扩繁和移栽后生长的最佳配方。‘烟薯25’和‘普薯32’的愈伤分化成苗率在A4处理(1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA)下最高,‘龙薯9号’和‘商薯19’愈伤分化成苗率在A3处理(1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA)下最高;‘烟薯25’在B4处理(0.5 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA)下继代扩繁培养长势较好,移栽后成活率高、生长快,‘普薯32’、‘龙薯9号’和‘商薯19’在B3处理(0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA)下继代扩繁培养长势较好、移栽后成活率最高、生长快。在...     

水曲柳松散愈伤组织的悬浮培养和超低温保存

以成熟水曲柳胚的三个不同部位作为外植体,利用四种不同类型培养基研究对水曲柳松散愈伤组织诱导产生的不同影响,选出适合诱导松散型和胚性愈伤组织的外植体与培养基组合,进一步探讨悬浮培养以及超低温保存的适宜条件,为水曲柳高效微繁打下基础。主要结果如下:(1)选出较为适宜诱导松散型愈伤组织培养基是WPM+1 mg/L NAA+0.8 mg/L 6-BA+1 g/L CH+20 g/L蔗糖+5.3 g/L琼脂。(2)水曲柳悬浮培养体系的建立确定悬浮培养的培养条件为:接种量为25 mL液体培养基中加入1.5 g愈伤组织,转速120 r/min、蔗糖浓度2%,细胞15 d后增殖1.41倍;悬浮组织直径在约2 mm时易于保持松散型细胞悬浮状态。(3)超低温冷冻保存,在-196℃条件下进行愈伤组织冷冻保存,保护剂采用30%甘油+15%乙二醇+15%DMSO+0.4 mol/L蔗糖时,解冻条件为40℃、暗培养,细胞生命力最高保持在83.3%,其中愈伤组织恢复生长率为3.0%。     

油梨愈伤组织诱导及分化研究

摘要：[目的]研究不同激素及外植体类型对‘哈斯’油梨（Persea Americana Mill.cv.Hass）愈伤组织诱导及分化的影响,筛选最佳诱导条件和外植体。[方法]通过间接器官发生途径。主要探讨（1）单一激素萘乙酸（1-Naphthylacetic acid,NAA）、2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-dichlorophenoxy acetic acid,2,4-D）;6-苄氨基腺嘌呤（6-Benzylaminopurine,6-BA）分别与2,4-D和NAA 结合时对‘哈斯’油梨叶片愈伤组织的诱导效应。（2）不同外植体（叶片、叶柄、茎尖、茎段）在相同条件下（基本培养基：MS+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.1NAA mg/L）的愈伤组织诱导效应。（3）单一激素 6-BA（或与NAA结合）对油梨愈伤组织芽分化的效应。[结果]结果表明：以MS为基本培养基,（1）添加1.0 mg/L 2,4-D/NAA,其诱导效果最佳,诱导率分别为45.3%和20.2%;但NAA诱导的愈伤质地较佳。（2）1 mg/L NAA与1.0 mg/L 6-BA结合,诱导效果较好,其诱导率最高可达84%。（3）诱导愈伤组织的最适外植体为茎段,其诱导率≥72.8%。叶柄次之,叶片和茎尖较差。[结论]综上,不同激素种类及其浓度和外植体类型对‘哈斯’油梨愈伤组织诱导影响显著。最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂。愈伤组织诱导最佳外植体为茎段,但诱导形成的愈伤组织难以分化出芽。     

小盐芥下胚轴再生体系的建立

以小盐芥下胚轴为外植体,研究了不同激素与不同浓度组合对愈伤诱导和不定芽分化的影响。结果表明,MS 6-BA 2,4-D组合能诱导出愈伤,诱导率为100%。MS 6-BA NAA组合既能诱导出愈伤又能分化不定芽,愈伤诱导率为100%,激素不同浓度不定芽分化率不同,最佳分化培养基为MS 2.5mg/L 6-BA 0.1mg/L NAA,不定芽分化率为43%。生根培养基为1/2MS,生根率为74%。     

不同激素对降香黄檀愈伤诱导的影响

利用降香黄檀无菌苗为试验材料,以降香黄檀无菌苗的根、茎和叶为外植体,研究不同激素配比对根、茎、叶诱导愈伤的影响。结果表明,培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L激素比例对降香黄檀外植体的茎和叶愈伤的诱导效果最佳,而培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L激素比例对根的愈伤的诱导率最佳。本研究为今后降香黄檀在组织培养及细胞悬浮培养奠定了一定基础。     

‘杂花’薰衣草再生体系的建立

为了获得高效稳定的薰衣草再生体系,本研究以‘杂花’薰衣草叶片为试材,研究了不同激素及浓度对愈伤组织诱导、不定芽分化及不定根形成的影响。结果表明：6-BA与NAA及6-BA与2,4-D组合均能诱导愈伤组织形成,最佳培养基配方分别为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L和MS+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,出愈率分别为95.2%、92%;6-BA与NAA组合诱导不定芽的效果显著优于6-BA与2,4-D的组合,适合诱导再生芽分化的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,分化率为68.1%;最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂7 g/L,生根率为91.1%。本研究建立了‘杂花’薰衣草的再生体系,为利用转基因技术培育高产优质的薰衣草新品种提供技术支持。     

不同激素和浓度对夏天无愈伤组织诱导的影响

以夏天无块茎、芽及叶柄作为外植体,采用不同激素浓度配比对夏天无进行愈伤组织诱导的研究,摸索夏天无组培快繁的条件.结果表明:(1)对夏天无块茎愈伤组织诱导效果较好的激素种类及浓度配比是1/2 MS +6-BA(2 mg/L)+NAA(1 mg/L);平均诱导率达59.38％,形成愈伤组织的时间约20d,但后期愈伤组织未分化出芽.(2)对夏天无的芽进行愈伤组织诱导研究表明,效果较好的激素种类及浓度配比是1/2 MS +6-BA(3.5 mg/L)+ NAA(0.1 mg/L);平均诱导率为100％,愈伤组织7d左右形成,且后期大多分化出芽.(3)对夏天无叶柄愈伤组织诱导效果较好的激素种类及浓度配比是1/2 MS +6-BA(3 mg/L) +2,4-D(2 mg/L);平均诱导率仅为13.89％,且后期愈伤组织未能分化成芽.     

基因型和激素对转基因马铃薯植株再生的影响

本研究对影响农杆菌介导的马铃薯转基因植株再生的基因型和激素两个因素进行了探讨。试验结果表明,基因型对愈伤诱导率和芽诱导率均有很大影响,不同品种的愈伤诱导率为72.22%~95.83%,最高的是"Russet Burbank";芽分化率为0~11.54%,最高的是"费乌瑞它"。不同6-BA和NAA浓度对加拿大品种"Russet Burbank"的愈伤诱导和不定芽分化有明显影响,6-BA在2.5 mg/L和NAA 0.2~0.3 mg/L的处理愈伤诱导率最高,每块芽数以2.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA最高。NAA浓度影响叶盘的愈伤诱导率且有一定的后效作用。     

金钱松细胞悬浮培养关键技术研究

目的:建立金钱松细胞的悬浮培养体系,并筛选出金钱松细胞的最佳培养基配方和其培养条件.方法:利用金钱松叶原基诱导产生的翠绿色、较分散的愈伤组织为悬浮培养材料,通过研究其不同激素配比、接种量、蔗糖浓度以及pH值对金钱松细胞悬浮培养的影响.结果:在金钱松细胞的悬浮培养过程中,最佳的培养基配方为MS+2,4-D 0.3 mg/L+6-BA 1.0mg/L,并且选择的最佳蔗糖浓度为40 g/L、pH值为6.0以及接种量为2.0 g/L.     

甜叶菊花药离体培养技术体系的建立

以‘皖甜1号’甜叶菊花蕾为试验材料,利用正交设计L9(34),分别以MS、B5和N6为基本培养基,研究了不同浓度的NAA、6-BA以及蔗糖和低温预处理、暗处理时间等条件,对甜叶菊花药愈伤组织诱导的影响以及不同培养基对甜叶菊花药愈伤组织分化影响。试验得出甜叶菊花药愈伤组织最佳诱导的培养基配方为MS+3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+60 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,低温预处理1 d、暗培养14 d有利于甜叶菊愈伤组织的诱导,甜叶菊愈伤组织分化诱导的最佳培养基配方为MS+1 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6 g/L琼脂,不定芽在不加任何植物生长调节剂的MS培养基上伸长后,接种在1/2 MS+0.1 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+6 g/L琼脂培养基上生根效果好,生根率可达93.33%。该试验初步建立了甜叶菊花药离体培养技术体系,获得了甜叶菊花药培养再生植株,为甜叶菊新种质的创制和新品种的选育提供了帮助。     

魔芋试管微球茎繁殖技术研究

针对目前魔芋生产存在种芋繁殖系数低的问题,研究可用于大规模生产魔芋试管微球茎的诱导技术。实验通过3种不同方法切割魔芋愈伤组织分化的幼苗,分别置入不同激素配比的4种培养基中培养。培养基MS 6-BA2.0mg/L NAA0.5mg/L 蔗糖6%和MS 6-BA0.8mg/L NAA0.5mg/L 蔗糖6%适合愈伤组织的形成和不定芽的分化。培养基1/2MS NAA0.08mg/L 蔗糖6%和1/2MS BA0.8mg/L 蔗糖6%适合叶柄基部带愈伤组织的幼苗生根培养,其中1/2MS NAA0.08mg/L 蔗糖6%的培养基适合叶柄基部带少量愈伤组织的幼苗诱导微球茎,将形成的微球茎,从叶柄基部撇断,可看到微球茎上有芽点。通过研究发现魔芋试管微球茎的形成不仅与培养基的组成有关,还与叶柄基部的切割方式有关。     

川续断愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

为解决川续断种苗快速繁殖的问题,需建立高效的组培苗再生体系。本研究利用植物组培技术,筛选川续断组培的最佳外植体,运用响应面优化法对川续断愈伤组织及丛生芽的诱导体系进行优化。结果显示,适合川续断组培的最佳外植体为幼苗叶片,最佳愈伤组织诱导培养基:MS+6-BA0.93mg/L+NAA0.64 mg/L+KT 0.55 mg/L,诱导率98.62%,不同激素对愈伤组织诱导率大小的影响顺序:NAA6-BAKT,不同激素组合对愈伤组织诱导率大小的影响顺序为:NAA+KTNAA+6-BA6-BA+KT;丛生芽诱导的最佳培养基:MS+6-BA 0.76 mg/L+GA_3 3.51 mg/L+IAA 0.93 mg/L,诱导率88.49%,不同激素对丛生芽诱导率大小的影响顺序为:GA_36-BAIAA,不同激素组合对丛生芽诱导率大小的影响顺序为:GA_3+6-BAGA_3+IAA6-BA+IAA;生根壮苗的最佳培养基:1/4MS+6-BA 0.1 mg/L+GA_3 0.5 mg/L+0.5%活性炭,生根率81.92%。本研究建立的川续断组培苗高效再生体系,可为下一步研发川续断快繁优质种苗提供关键技术资料。     

不同激素配比对诱导栓壳红山茶愈伤组织的影响

为建立最优的栓壳红山茶（Camellia phellocapsa）诱导愈伤组织体系,分别以其嫩叶及嫩茎段为外植体材料,研究了不同的6-BA与NAA激素浓度配比对诱导愈伤组织的影响。结果表明：叶片正面向上放置时的出愈率高于正面向下放置,且褐化率较低;6-BA浓度对诱导叶片愈伤组织的影响达极显著水平,最佳激素配比为6-BA 0.2 mg/L、NAA 2.0 mg/L,此时出愈率高达97.5%;嫩茎段的愈伤组织诱导出现不同程度的褐化,出愈率极低。