放线菌NB8菌株对致病疫霉抑制作用的实验初报

为获得高效拮抗致病疫霉的放线菌菌株,对从土壤中分离出的放线菌NB8菌株的活体及发酵液抑菌活性进行了探讨,并对该菌株发酵液中的抑菌物质的稳定性进行初步研究。结果表明,NB8菌株活体和发酵液对致病疫霉的抑制率分别为97．33％和92．00％;该菌株发酵液中的抑菌物质对光和热都很稳定,在pH6-8保持较高活性,在室温下可储藏2个月,可连续传代10代而抑菌活性基本保持稳定,表明利用NB8控制马铃薯晚疫病有较大的应用潜力。     

农用抗生素产生菌A2C菌株发酵液的抗菌谱及稳定性测定研究

对农用抗生素产生菌A2C菌株发酵液进行抗菌活性室内测定,结果表明:该菌株发酵液对供试的18种植物病原真菌、3种病原细菌均有一定的抑制活性,其中对小麦赤霉病菌、番茄早疫病菌、葡萄白腐病菌、桃腐烂病菌和柳腐烂病菌的抑制率达到100%,对玉米小斑病菌、苹果轮纹病菌、小麦根腐病菌、苹果褐腐病菌和烟草赤星病菌的抑制率均达到90%以上,抑制率达到80%以上的病原菌占供试病原菌总数的77.8%.A2C菌株发酵液稳定性试验表明,该发酵液对光和热稳定,在灯光和日光处理24 h或在60℃和80℃水浴里处理60 min,其抑菌活性几乎不变,但对酸碱稳定性差.菌株传代试验结果表明, 该菌株连续传代10次(2 d/代),其发酵液的活性没有明显下降.     

内蒙古地区土壤放线菌分离及其杀虫活性研究

为发现具有杀虫活性的放线菌，采用选择性分离方法对采自内蒙古地区特殊生境12份土样的放线菌进行分离；先后以卤虫、淡色库蚊3龄幼虫为供试对象进行菌株发酵液杀虫活性筛选，测定高活性菌株发酵液对3种农业害虫（朱砂叶螨、小菜蛾和粘虫）的毒杀活性。结果表明，从采自内蒙古地区的12份土样分离获得放线菌183株，其中，菌株11 09 3、11 09 49、12 09 10对卤虫、淡色库蚊3龄幼虫具有较好的毒杀活性，菌株11 09 3的发酵液对小菜蛾的毒杀活性为96.67%，对朱砂叶螨的毒杀活性为93.10%，菌株11 09 3值得进一步研究。     

稻瘟病生防放线菌菌株A11发酵液中 抗菌物质的稳定性测定

在实验室分离获得的放线菌A11菌株,其发酵液采用对峙培养对植物病原真菌均表现良好的抑菌活性。对发酵液在不同温度和不同pH下的稳定性进行测定,结果表明菌株A11发酵液在中性及酸碱条件下都稳定,在极酸和极碱条件下抑菌活性丧失;A11发酵液能经受75℃温度60min,仍保持原来的抗菌活性,温度升高到100℃时活性丧失。     

放线菌A19菌株次生代谢产物的初步研究

【目的】对放线菌A19菌株发酵液中的次生代谢产物进行初步研究,以了解其抑菌活性及其稳定性。【方法】采用抑制菌丝生长法、管碟法、盆栽试验等方法,测定了A19菌株发酵液的抑菌活性和发酵液中有效成分的热稳定性及酸碱稳定性;并以活性追踪为指导,采用大孔吸附树脂、硅胶柱层析、高效液相色谱等技术对其有效成分进行了分离。【结果】室内生测发现,A19菌株发酵液对10种供试病原真菌均有明显的抑制作用,其中对小麦根腐病菌的抑制效果最好,抑制率达100%;对枯草牙孢杆菌、金黄色葡萄球菌和L-链球菌3种病原细菌也有较好的抑制作用,其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强,抑菌圈直径达到21 mm。盆栽试验表明,A19菌株发酵液对小麦白粉病有一定的保护作用和治疗作用,防治效果分别为54.3%和65.0%。A19菌株发酵液对热稳定,对酸碱不稳定。从A19菌株的发酵液中分离得到15-1,15-2和15-3 3种化合物,其中15-2鉴定为7-羟基-3异丁基六氢吡咯[1,2-α]吡嗪-1,4-二酮。【结论】放线菌A19菌株发酵液抗菌谱较广,具有较好的研究价值。     

丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3的抑菌活性及鉴定

【目的】探究丛生盔形珊瑚共附生放线菌NLG-3对植物病原菌的抑菌活性,对其分类地位进行鉴定,为丛生盔形珊瑚共附生放线菌的开发利用提供依据。【方法】采用平板对峙法测定NLG-3对12种植物病原真菌的抑菌活性;采用滤纸片法测定NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对5种病原细菌的抑菌活性;通过改变pH、温度及光照条件,测定该菌株发酵液的稳定性;采用几丁质平板培养法测定该菌株产几丁质酶的能力;通过基因扩增检测该菌株是否含有非核糖体多肽合成酶(NRPS)和聚酮合成酶(PKS)基因;结合菌株形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列分析对该菌株进行分类鉴定。【结果】菌株NLG-3具有广谱抑菌活性,对供试病原真菌均有不同程度的抑制作用,其中对香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)和胶孢炭疽病菌(C.gloeosporioides)的抑菌率均在85%以上。NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物可以明显抑制蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的生长,1 mg/mL NLG-3发酵液乙酸乙酯粗提物对蜡样芽孢杆菌的抑菌圈直径达(2.20±0.11) cm。NLG-3发酵液在中性(pH=7)条件下抑菌活性突出,经40℃及以上高温处理其活性丧失,光照对其抑菌活性无影响。NLG-3能产生几丁质酶,分解培养基中的几丁质。该菌株具有合成酶基因PKS-Ⅱ和NRPS,经初步鉴定该菌株为白刺链霉菌(Streptomyces albospinus)。【结论】NLG-3抑菌活性较好,具有潜在防治热带植物病害的应用价值。     

放线菌HJ1-2菌株发酵液抑菌谱及稳定性的研究

采用菌丝生长速率法、管碟法和活体组织法测定发酵液的抑菌活性,在不同条件下测定发酵液的稳定性,捷克溶剂系统纸层析法鉴别发酵液中抗生素类型.发酵液的抑菌活性测定结果表明,放线菌HJ1-2菌株发酵液对20种供试病原真菌均具有不同程度抑制作用,其10倍稀释液对其中10种病原真菌菌丝生长的抑制率达到80%以上;供试7种细菌中放线菌HJ1-2菌株发酵液对白菜软腐病菌的抑制作用最强,抑菌圈直径为17.75 mm;放线菌HJ1-2菌株发酵液对油菜菌核病和番茄灰霉病的抑制率分别为100 %和71.39 %.发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,发酵液在80℃处理后抑菌活性开始下降,发酵液在pH3～9条件下抑菌活性稳定.捷克溶剂系统纸层析法测定表明,发酵液中主要抑菌活性物质为大环内酯类抗生素.该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定开发价值.     

放线菌P3-2的抗菌活性筛选及发酵液稳定性研究

对贵州高坡地区不同类型的土壤中分离出的256株放线菌进行发酵液拮抗性筛选,得到1株放线菌菌株P3-2。采用菌丝生长速率法,对其抗菌活性进行研究,并在不同条件下测定发酵液的稳定性,结果表明,放线菌P3-2菌株发酵液对14种供试病原菌均具有不同程度的抑制作用,其10倍稀释液对其中9种病原真菌菌丝生长的抑制率达到85%以上,尤其对油菜菌核病菌和黄瓜灰霉病菌的抑菌效果最好,抑制率达到100%。发酵液的稳定性测定结果表明,发酵液对热、酸和紫外线均较稳定,对碱稳定性较差。该菌株的代谢产物具有广谱抑菌活性和较强的稳定性,具有一定的研究开发价值。     

不同生防放线菌组合防治枯、黄萎病研究

【目的】探讨优良放线菌及其组合对西瓜枯萎病和茄子黄萎病的生物防效,筛选出具有良好防效和促生作用的复合菌株。【方法】采用离体抑菌作用测定法和温室人工接菌法,研究不同生防放线菌及其组合对西瓜枯萎病和茄子黄萎病的防效和促生效果。【结果】离体抑菌作用测定结果表明,菌株SC11和SE2的菌体、发酵液和发酵滤液对大丽轮枝菌和西瓜枯萎菌均表现出显著的抑制作用,孢子萌发抑制率高;盆栽试验表明,菌株SC11和SC1复配的C2组合对西瓜枯萎病和茄子黄萎病防效显著,防效分别达到84.93%和71.48%,且高于各菌株单一使用的效果;C3组合的发酵液对西瓜的株高、叶面积和叶绿素含量等生理指标影响突出,经C3处理后的西瓜根系还原强度值最大,对茄子的促生作用仅次于菌株SF6。【结论】生防放线菌组合的防病促生作用优于单个菌株,组合菌株间通过协同作用可达到优势互补,只有全面考虑各菌株的习性并进行合适的组合,才能充分发挥其生防效果。     

水稻立枯病拮抗菌株抗病机理研究

通过平板对峙培养,钢圈法测定拮抗菌株发酵液、提取液及灭活提取液的抑菌活性,发酵提取液酶活性测定,对拮抗水稻立枯病的DZW-3、DZW-21、DZW-47和ZLR-2、ZLR-11菌株机理进行研究,结果表明,DZW-3和DZW-21主要为重寄生作用;DZW-47为提取液中几丁质酶和β-1.3葡聚糖酶的协同作用;菌株ZLR-2和ZLR-11是抗生素类物质对病原菌的抗生作用.     

6株放线菌定殖能力测定及对苹果灰霉病控制效果

通过菌药结合试验,测定了6株生防菌株在套袋苹果和叶片表面定殖能力以及它们对苹果表面真菌的控制能力,并分别测定了其发酵液、菌悬液及发酵滤液对采后苹果灰霉菌(Botrytis cinerea)的抑制效果.结果表明:菌株15-3在套袋苹果以及苹果叶片上具有很强的定殖能力,对苹果表面的真菌也有较好的抑制效果;菌株SC1能够有效地抑制套袋苹果表面以及苹果叶片表面真菌的生长繁殖;6株生防放线菌发酵液对苹果灰葡萄孢都具有明显的抑制作用,菌株SC1、A3、SE2和15-3的发酵液对苹果灰葡萄孢的控制作用均超过80%,菌株15-3的菌悬液也具有一定的抑制效果.     

乳酸菌代谢物体外抑菌机理探讨

自健康动物肠道分离得到乳酸菌菌株1-3,对1-3菌株的MRS发酵液、发酵滤液、中和滤液进行了抑菌试验。结果发酵液和发酵滤液的抑菌活性无显著差别,表明1-3菌株的抑菌物质为胞外代谢产物;中和滤液仍有抑菌活性,说明除乳酸外,还有其他非酸抑菌物质。发酵液经70℃、100℃、121℃处理20min后仍有抑菌活性,说明抑菌物质具有耐热性。     

放线菌F24发酵液对灰霉菌拮抗作用初探

为筛选出对灰霉病菌有拮抗作用的生防放线菌株,采用生长速率法和抑制孢子萌发法测定不同放线菌株发酵液对灰霉病菌的抑制率,研究了F24,F25,F26,F27 4种放线菌株对灰霉病病原菌的拮抗作用,结果表明:F24放线菌株在液体培养基C和E中的发酵液呈褐色,菌丝呈球状、生长量最大。采用E和C 2种培养基培养的F24放线菌发酵滤液对灰霉病菌丝的抑菌作用最强,3 mL剂量处理的抑菌率分别为79.8%和78.9%。孢子萌发试验结果表明:F24菌株对靶标病原菌分生孢子萌发的抑制作用显著,培养基C和E稀释1倍发酵液的抑制率分别为82.76%,83.95%。     

放线菌WZ162菌株发酵液抗香蕉枯萎病菌稳定性研究

放线菌WZ162菌株发酵液对香蕉枯萎病菌具有良好的抑菌活性,对其发酵液在不同条件下的稳定性测定结果表明,WZ162菌株的发酵液在温度低于80℃的条件下热稳定性良好;在自然光照及紫外照射条件下稳定,发酵液不发生分解或化学结构上的改变;在酸性条件下发酵液对香蕉枯萎病菌的抑菌率在24．92％-34．73％之间,在碱性条件下抑菌率在11．21％-25．39％之间,发酵液在酸性条件下的稳定性比在碱性条件下的好;pH为1-12的发酵液经不同时间的100℃水浴处理后对香蕉枯萎病菌的抑制作用明显低于未经水浴加热处理的,其中pH为1时的发酵液稳定性比在其他pH条件下的好。     

94株土壤放线菌抑菌活性的初步筛选

以油菜菌核病菌、番茄灰霉病菌、番茄叶霉病菌为指示菌,采用生长速率法对94株土壤放线菌进行抑菌活性筛选。发现AXW4-1菌株等10株放线菌发酵液至少对3种病原真菌中的1种有60%以上的抑制率,占总测试菌株的10.64%。对这10株放线菌进行抑制孢子及菌核萌发试验,结果获得4株活性较高的菌株,其中AXW4-1和HVA29-2菌株发酵液对番茄灰霉病菌的孢子萌发抑制率分别为86.9%和78.8%,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液10倍稀释液对油菜菌核病菌的菌核萌发抑制率均为86.1%;油菜叶片组织法试验表明,X-1-8和GSA26-2菌株发酵液对油菜菌核病的药效均在90%以上。     

石油烃降解菌Rhodococcus sp.15-3的分离鉴定及特性研究

从原油污染土壤中分离筛选到一株石油烃降解菌15-3,根据其形态特征、生理生化特性及16S rDNA序列同源性分析,将其初步鉴定为红球菌(Rhodococcus sp.).采用室内培养的方法,研究了15-3菌株对原油、原油中的烃类及正十八烷的降解作用.结果表明,15-3菌株能以正十八烷为惟一碳源生长,在48 h内对500 mg·L-1的正十八烷降解率达96.9%.15-3菌株降解正十八烷的最适温度、pH值和盐浓度(NaCl)分别为30℃、7.0、2%,在低温(10℃)及高盐(4%～5%NaCl)环境下也有良好的降解能力.15-3菌株可以降解原油中C,13～C,32的正构烷烃、芳香烃及姥鲛烷.在含5 g·L-1原油的培养基中,30℃培养5d后,菌株15-3对原油的降解率为60.3%,对原油中C,13～C,31烷烃的降解率均大于90%,对原油中芳香烃的降解率为63.6%.该菌株以石蜡为惟一碳源生长时能产生表面活性剂,将发酵液表面张力由58.11 mN·m-1降到36.6 mN·m-1,表明菌株15-3具有较强的乳化和分散石油的能力.     

一株链霉菌发酵液对小菜蛾的杀虫作用研究

为了合理开发和利用链霉菌发酵液,通过测定链霉菌菌株HNll8发酵液对小菜蛾卵和不同龄期幼虫的杀虫活性,研究其杀虫作用。结果表明：链霉菌菌株HNlt8发酵液对小菜蛾卵无作用,对2龄和3龄小菜蛾幼虫防效较好,校正死亡率平均值达到70％以上,可以确定该菌株具有一定的杀虫活性。     

抗稻瘟病的生防细菌筛选与鉴定

为获取优良的水稻抗稻瘟病的生防菌株,以稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)为指示菌,针对2016年和2017年采自辽宁省7个水稻主产区的46份水稻田土样,采用土壤稀释平板法从土样中分离纯化得到541株菌株,其中真菌137株,细菌288株,放线菌116株;再经菌株发酵液处理水稻种子,清水和氨基寡糖素处理为空白对照,待水稻长至3叶1心期时采用活体苗期接种的方法对已分离出的菌株进行筛选,得到对稻瘟病有较好诱导抗性的生防菌株5株,标记为DdN5-6、DdN6-1、PJN13-7、PJN13-5和YKN8-7,防治效果为76.13%～58.03%,其中DdN6-1防治效果最好,达到76.13%。本试验研究菌株发酵液浸种对水稻生长的促进作用,室内种子萌发试验结果表明,经菌株DdN6-1和PJN13-5发酵液浸种处理后的水稻种子发芽率分别达到88.89%和90.00%,明显高于对照;在相同的生长时间和生长条件下,经菌株PJN13-5发酵液处理的水稻根长最长,达到9.57 cm,高于其他菌株处理;经5株菌株发酵液处理的水稻种子,长至3叶1心期时与对照相比根系较粗壮,其中DdN6-1发酵液处理的水稻幼苗抗病效果最好,菌株PJN13-5发酵液处理的水稻幼苗促生效果最好。结合形态特征、生理生化特性和16S rDNA基因序列测定对筛选出的菌株进行鉴定,鉴定结果表明:菌株DdN5-6、PJN13-7和YKN8-7为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium);菌株DdN6-1为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus);菌株PJN13-5为纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fuormis)。     

胜利油田土壤中石油降解菌分离和鉴定及代谢产物的研究

从胜利油田29-8#和29-681#油井附近土壤中筛选到13株石油降解菌,并通过重量法测定其石油降解率,再筛选出3株高效降解菌株DH-5、DH-8和DH-9,其降解率均高于40%。通过形态学观察、生理生化试验和16S rDNA序列分析,发现菌株DH-5、DH-8和DH-9分别属于假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter sp.)和克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.)。进一步研究3株菌株的底物利用能力,且通过气相色谱法分析了原油代谢产物中的脂肪酸含量,发现以常见石油产品和石油中典型烷烃类和芳香烃类化合物为唯一碳源培养时,菌株DH-5在长链烷烃和环烷烃中生长较好,DH-8在多环芳烃中生长较好,而DH-9在低链烷烃和环烷烃中生长较好,3株高效石油降解菌对原油组分利用的广谱性从大到小依次是DH-5、DH-9和DH-8;分析原油代谢产物发现,发酵液中主要的小分子有机酸是乙酸,菌株DH-5和DH-8的发酵液中还含有C8～C18的长链脂肪酸,菌株DH-9的发酵液中含有C8～C24的长链脂肪酸。上述结果表明:筛选出的高效降解菌株DH-5、DH-8和DH-9代谢原油的方式很可能是单末端氧化和直接脱氢途径。     

餐厨垃圾中胶原蛋白和几丁质原位降解菌株的筛选与鉴定

从餐厨垃圾、畜肉市场和屠宰场等处采样,采用平板透明圈法和猪皮消化试验初筛胶原蛋白降解菌,采用平板透明圈法和虾壳消化试验初筛几丁质降解菌,通过测定发酵液胶原蛋白酶和几丁质酶活性复筛菌株,对目标菌进行形态学、生理生化和16S r DNA序列鉴定,并用该菌室外原位降解富含胶原蛋白和几丁质的餐厨垃圾。分离到11株高效降解胶原蛋白的菌株,其中的B3和C3具有较高的几丁质酶活,并能有效消化虾壳;B3的胶原蛋白酶活性和C3差异不显著(P0.05),而几丁质酶活性显著比C3高(P0.05)。B3被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),该菌室外原位降解富含胶原蛋白和几丁质的餐厨垃圾2 d,降解效果达到24.78%,比对照高15.74百分点。