日本牡丹品种花粉超低温保存

为解决杂交育种工作中的时空不遇,延长花粉寿命,本文对23个日本牡丹品种花粉进行了超低温保存研究。对新鲜花粉及超低温保存花粉离体萌发率测定结果表明:不同日本牡丹品种新鲜花粉生活力存在差异,23个品种中,‘大藤锦’花粉萌发率最高,达到60.89%,而‘岛大臣’最低,仅3.49%;室温条件下,日本牡丹品种花粉寿命仅15d左右,而超低温保存可以使日本牡丹品种花粉寿命至少延长至2年。经超低温保存2年,花粉仍然具有较高的萌发率,有的甚至超过保存前水平,因此超低温保存技术可用于日本牡丹品种花粉的长期保存。     

芍药花粉超低温保存前后氧自由基变化研究

花粉超低温保存后花粉活力因材料不同有很大差异,导致这种差异的原因尚不完全清楚。以液氮保存前后花粉萌发率变化不同的2个芍药品种为对象,研究了花粉在超低温保存前后活性氧及其膜脂过氧化的关系,以探讨超低温保存对它们的影响。结果表明,2个品种保存前后萌发率变化不同,但活性氧水平均无显著变化;2个品种的抗氧化酶活性均上升,抗坏血酸含量在冻存后也明显上升,而‘大红赤金’冻存前后无显著变化;同时,液氮保存前后‘大红赤金’的丙二醛含量和相对电导率均明显上升,而‘紫凤朝阳’无显著变化。以上表明,虽然这2个品种的活性氧水平均没有显著差异,但抗氧化系统已启动并清除了多余的活性氧,超低温保存对花粉的生理有一定影响。其中花粉生活力下降的‘大红赤金’发生了膜脂过氧且抗坏血酸含量无显著变化,表明抗坏血酸的作用可能更关键。     

花楸花粉超低温保存及再生

【目的】探讨花楸(Sorbus pohuashanensis)花粉超低温保存及再生的方法,以延长其花粉保存时间,为科研、生产提供理论和实践依据。【方法】分别设置不同培养基配方、不同光照、不同采集时间处理,进行花楸花粉离体萌发试验,测定各试验处理的花粉萌发率;设置不同冷冻方式和化冻方式处理,测定两种方式不同处理的花粉萌发率;制备不同含水率的花粉,分别测定其在超低温保存前、后的萌发率。【结果】(1)培养基为100g·L~(-1)蔗糖+100 mg·L~(-1)硼酸的处理,花粉萌发率最高,达72.42%;(2)黑暗处理花粉萌发率为77.24%,比光照处理高8.96个百分点;(3)一天中,10∶00和14∶00采集的花粉,其活力显著高于其他时间采集的花粉;(4)-20℃预冷冻培养30min后投入液氮保存24h的处理效果最好,花粉萌发率达43.15%;(5)超低温保存后40℃水浴解冻5min处理比其他解冻方式处理的花粉活力高,萌发率为35.70%;(6)花楸花粉超低温保存最适含水率为7.72%,此含水率下花粉超低温保存后萌发率最高,为31.53%。【结论】花楸花粉采用超低温技术保存24h后仍具有活力,黑暗条件、花粉采集时间、花粉萌发培养基、花粉含水率、冷冻与化冻方式均会对花楸花粉超低温保存效果产生显著影响。     

密花石斛花粉的保存方法研究

研究了密花石斛花粉不同保存方法下的花粉寿命,并对密花石斛花粉的超低温保存技术程序进行了研究。 结果表明:1)密花石斛花粉采用室温（(27±2)℃）、冷藏（4℃）、冷冻（-20℃）保存,花粉寿命分别为5、23、17 d,超低温保存(-196℃)的花粉120 d后仍可检测到花粉萌发,且萌发率与新鲜花粉相同,超低温保存方法至少可以保存密花石斛花粉4个月;2)密花石斛花粉超低温保存的程序为新鲜花粉（含水量43.26%）直接投入液氮（LN）保存,需用时采用室温、自来水或水浴化冻即可。      

黄帝陵古侧柏花粉生活力及其保存方法的研究

以黄帝陵千年古侧柏花粉为试验材料,用离体萌发法测定花粉的生活力,研究不同保存方法对花粉萌发率的影响,探讨花粉含水量、投入方式、化冻方式对超低温保存效果的影响。结果表明:古侧柏花粉在9%蔗糖+0.01%硼酸的培养基中离体培养4 d萌发率最高。90 d内,随着保存时间的延长,室温（20℃）保存的花粉迅速失活,低温（0℃、-20℃）保存的花粉萌发率呈逐渐下降趋势,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率最高且保持效果最好,为古侧柏花粉长期保存的适宜方法。在超低温保存中,花粉以未经干燥、直接投入液氮、37℃恒温水浴化冻5 min保存效果最好;花粉含水量、投入方式、化冻方式之间交互效应显著。     

6个铁线莲品种花粉保存方法

为了探究铁线莲花粉保存的最佳条件,研究比较了花粉采集时间(开花第1、2、3天)、干燥时间(12、24、48h)和保存温度(4、-20、-196℃)对花粉萌发率的影响。结果表明,花粉粒的平均直径均随着开花时间的延长而上升,且差异显著,其中‘蓝龙’花粉粒直径上升幅度最大为4.53μm,‘如梦’的上升幅度最小,为1.13μm。开花第2天采集的‘爱莎’、‘第一夫人’、‘冰美人’、‘亨利’和‘如梦’花粉萌发率最高,而开花第3天采集的‘蓝龙’花粉萌发率最高;‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’分别经过12~48h干燥后4℃保存的花粉相对存活率最高,分别为新鲜花粉的87.86%、71.27%和67.24%;‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’花粉干燥24h后-196℃保存的相对存活率最高,分别为新鲜花粉的59.65%、78.74%和69.33%。-20℃保存的铁线莲花粉相对存活率仅为0~56.85%。利用4和-196℃保存的花粉进行杂交验证试验,平均坐果率为70.7%~100%,初步明确了‘第一夫人’、‘爱莎’和‘蓝龙’花粉适合4℃保存,而‘亨利’、‘冰美人’和‘如梦’则适合液氮超低温保存,这为解决铁线莲品种间杂交的花期不遇问题奠定了基础。     

芍药花粉超低温保存4年后的生活力检测

为了探讨花粉长期保存的最佳方法,以及为芍药花粉库的建立提供依据,该文比较了冷冻保存（-20℃）和超低温保存（-196℃）芍药花粉的不同效果,检验了17个芍药品种花粉经超低温保存4年后的生活力。结果表明,超低温（-196℃）保存的花粉萌发率普遍高于冷冻保存和对照,而大部分品种花粉经冷冻保存（-20℃）4年后萌发率明显降低。离体萌发试验表明,超低温保存芍药花粉的效果因品种而异,但绝大部分品种（94.1%）花粉保存效果良好（相对保持率＞50%）。初步人工授粉试验表明,超低温保存4年后的芍药花粉仍具有受精结实能力。      

超低温保存花粉技术在温室玉米加代育种上的应用

授粉是作物品种改良的重要技术环节。本研究对玉米花粉超低温保存过程中的干燥、液氮保存、快速解冻和精量授粉等技术环节进行了研究，并对超低温保存花粉技术在温室玉米加代育种上应用的可行性进行了分析。结果表明：花粉相对含水量是影响玉米花粉超低温保存成功的主要因素，其中玉米花粉超低温保存的最适宜相对含水量为11.3％～14.7％。超低温保存玉米花粉为温室玉米加代的顺利开展提供了保障。     

甘蓝自交不亲和系花粉的离体保存

盛花期甘蓝花粉低温和超低温保存前脱水至花粉含水量为9.93%～14.18%时,保存效果最好;不脱水或过度脱水的效果均差.花粉于4℃下保存,活力仅维持1个月左右;而在-20℃,-70℃下保存,保存时间虽可适当延长,但萌发率逐渐降低.-196℃(液氮)下保存6个月后,甘蓝花粉仍有很高的萌发率.预冻处理可提高花粉保存效果,-20℃中预冻的效果最佳,萌发率达38.17%.此外,在室温化冻、水浴化冻和缓慢复苏3种解融方式中,水浴化冻的花粉萌发率最高(36.37%).     

不同无核葡萄品种花粉贮藏及其生活力的测定

以‘京丰无核’‘爱神玫瑰’‘杨格尔’‘奥迪亚无核’和‘奇妙无核’5个葡萄品种的花粉为试验材料,撒播在10%蔗糖+10 mg·L~(-1)硼酸+6 g·L~(-1)琼脂的培养基上进行离体培养,研究不同处理方法(液氮未处理、液氮处理)、不同温度(25、0、-20、-40、-80℃)、不同贮藏时间(1、3、5 d)对5种葡萄花粉生活力的影响。结果表明:‘爱神玫瑰’的单花药花粉量最多,达到(5 446±80)粒;‘京丰无核’的新鲜花粉生活力最高,为(68.19±2.98)%,‘奇妙无核’的新鲜花粉没有萌发。液氮未处理和处理后观察发现,液氮处理后花粉生活力远远低于液氮未处理的,液氮未处理的同一品种不同处理花粉生活力对比发现,最适宜长期贮藏的温度是-80℃,其次是-40℃,25、4、-20℃条件下贮藏花粉生活力降低较快。不同品种花粉贮藏后,‘京丰无核’花粉萌发率最高,为(55.87±1.14)%,较差的是‘杨格尔’,其花粉萌发率比‘京丰无核’花粉萌发率低17.84%,‘奇妙无核’没有萌发,杂交授粉时,适宜的父本为‘京丰无核’‘爱神玫瑰’与‘奥迪亚无核’。     

枇杷花粉干冻法超低温保存研究

采用花粉干冻法对枇杷花粉超低温保存进行了研究。将枇杷盛花期的花粉干燥后直接液氮超低温保存,取出后观察其萌发率。结果表明:花粉的含水量是决定枇杷花粉超低温保存成败的关键因素。脱水至30%左右的含水量能够保证超低温保存花粉的生活力;解冻温度及方式对超低温保存后花粉的生活力没有明显的影响。     

园林花卉种子超低温保存研究

为了探讨超低温保存技术广泛应用于园林花卉种子保存的可能性 ,对 18个科 47种花卉种子进行了超低温保存研究 .除了 2种花卉种子进入液氮后炸裂外 ,其余 45种花卉种子保存后都有一定发芽率 ,有些花卉种子保存后种子发芽率还高于保存前 .结果表明 ,①超低温保存技术可以广泛应用于园林花卉的种子保存 ;②花卉种子在自然含水量状态即可存于液氮中 ;③从液氮中取出后 ,采用 35～ 40℃温水浴化冻有较高的发芽率 ;④超低温保存对一些花卉种子萌发表现出促进作用     

不同低温保存对雪花梨花粉萌发的影响

针对梨树生产与科研中各品种间存在花期不遇和授粉树配置不合理,从而影响梨树授粉的问题,研究了不同低温保存方法对雪花梨花粉萌发率和萌发速度的影响。结果表明：2002～2004年雪花梨花粉萌发率3 a平均为84.1%,与胎黄梨（91.0%）无显著差异,但显著〉鸭梨（66.3%）和金坠梨（44.7%）。雪花梨花粉在室温（20～22℃）条件下保存1个月,萌发率迅速降为5%,保存5个月后萌发率降为0;在冰箱（2～3℃）条件下只能保存5个月,保存1 a后萌发率（11.2%）降低明显;在冰柜（-18℃）条件下保存3 a仍能保持较高的萌发率（56.3%）,冰柜保存是雪花梨花粉较适宜的保存方法。雪花梨花粉在23～25℃发芽培养基中4 h即全部萌发,低温保存1 a后萌发时间较新鲜花粉增加1倍,生产上授粉时应先对贮存花粉进行加湿处理,使花粉充分吸水,以保证花粉迅速发芽,确保授粉效果。     

贵州主栽樱桃品种的花粉量及其低温保存效果

【目的】为比较贵州主栽樱桃品种花粉量及其花粉的保存方法,以期为杂交育种和授粉树的选择提供参考。【方法】以贵州主栽的2个中国樱桃及4个甜樱桃品种为材料,用纤维素酶解法测定其花粉量,花粉离体培养法测定比较了不同发育时期、干燥时间、保存温度及预冻解冻方式对花粉萌发率的影响。【结果】中国樱桃单花花粉量显著低于甜樱桃,且中国樱桃大花蕾期的花粉活力最高,随着保存时间的延长,花粉萌发率逐渐降低。采后1周内未经干燥的花粉,在4℃保存效果最佳,萌发率达50.98%,而-196℃保存花粉萌发率最低(27.11%),其原因可能是花粉含水量较高导致水分结晶而引起花粉结构破坏;长期保存以25℃干燥30 min后,保存在-196℃下效果最佳,保存16周后萌发率仍达11.14%;未经干燥的花粉,在-80℃保存后室温解冻30min效果最佳,萌发率达17.01%。【结论】人工授粉时应采集大花蕾期花粉,如需在采后1周内授粉,可将花粉保存于4℃;长期保存则应经25℃干燥30 min后保存于-196℃,室温解冻30 min,可达最佳效果。     

‘丽红’元宝枫花粉生活力研究

以自育品种‘丽红’元宝枫花粉为材料,分别采用TTC法、I-KI法和离体培养基萌发法测定花粉生活力;同时研究不同温度、培养时间、蔗糖浓度和储藏时间对‘丽红’元宝枫花粉离体培养生活力的影响。结果表明:TTC和I-KI染色法不适合检测‘丽红’元宝枫的花粉生活力;‘丽红’元宝枫适宜花粉萌发的条件为15℃温度水平+15%蔗糖浓度+培养6h,其花粉萌发率为31.6%;4℃低温保存,最长可保存50d。     

‘保罗兰’睡莲花粉离体萌发及花粉管生长的研究

【目的】研究不同培养基组分、不同培养时间对‘保罗兰’睡莲花粉萌发和花粉管生长的影响,为睡莲杂交育种提供科学的依据。【方法】采用花粉离体萌发法,用显微镜观察花粉离体萌发情况。【结果】20和40 mg/L的硼酸(H_3BO_3)处理均能促进花粉萌发,适宜浓度的蔗糖和低浓度的Ca~(2+)处理能显著提高花粉的萌发率;睡莲花粉在培养的4 h之内,花粉萌发率上升较快,4～6 h萌发率趋于稳定。花粉管生长在前2 h生长较快,2～6 h生长趋于稳定。【结论】10%蔗糖+20 mg/L或40 mg/L H_3BO_3+20 mg/L氯化钙(CaCl_2)是‘保罗兰’睡莲花粉最适萌发培养基组分,最佳镜检时间为4 h。     

10个菊花品种花粉生活力测定和贮藏方法研究

【目的】筛选菊花花粉离体培养生活力测定的最佳培养基配方,探究花粉贮藏的最适温度和耐贮藏时间,并挑选出较耐贮藏的菊花品种,为菊花新品种选育和种质资源保存提供参考。【方法】以10个菊花品种盛花期花粉为试验材料,通过离体萌发测定法筛选菊花花粉萌发最适培养基,以该培养基测定花粉在4℃、-20℃和-80℃3种温度下进行60 d或120 d贮藏周期的生活力变化趋势观测,每隔15 d取样检测1次;对贮藏120 d的花粉进行授粉,统计结实率。【结果】培养基为ME_3+200 g·L~(-1)PEG 4000+6 g·L~(-1)琼脂的处理,10种花粉都能萌发,且萌发率较其他培养基有显著差异;花粉贮藏60 d后,所有花粉生活力均下降,其中‘5’、‘52’、‘64’和‘85’4个品种花粉生活力下降较缓慢;4种花粉贮藏120 d后,在-80℃贮藏的花粉生活力较高,花粉授粉后均能够结实,且品种‘5’花粉授粉结实率最高,平均每个授粉花序结实8粒。【结论】花粉萌发培养基、植物品种基因型、贮藏温度和贮藏时间都会影响菊花花粉生活力。本文研究表明,菊花花粉最适贮藏温度为-80℃,品种‘5’花粉可贮藏120 d保持较高的授粉结实率,在杂交育种中可优先考虑。     

柿品种'禅寺丸'花粉超低温保存研究

对柿品种‘禅寺丸’(Diospyros kaki Thunb．CV．Zenjimaru)花粉进行了干燥脱水法(Dehydration)和玻璃化法(Vitrification)液氮超低温保存研究,结果表明：0℃下硅胶干燥8h或(20士1)℃下玻璃化液PVS2处理40～60rnin后直接投入液氮保存,40℃解冻70s后,相对存活率(TTC检测)和萌发率都在90％以上,且活力与保存时间长短无关。该结果为柿花粉的长期保存提供了技术支持。     

甘蓝自交不亲和系花粉的离体保存

盛花期甘蓝花粉低温和超低温保存前脱水至花粉含水量为9．93％-14．18％时,保存效果最好;不脱水或过度脱水的效果均差。花粉于4℃下保存,活力仅维持1个月左右;而在-20℃,-70℃下保存,保存时间虽可适当延长,但萌发率逐渐降低。-196℃(液氮)下保存6个月后,甘蓝花粉仍有很高的萌发率。预冻处理可提高花粉保存效果。-20℃中预冻的效果最佳,萌发率达38．17％。此外,在室温化冻、水浴化冻和缓慢复苏3种解融方式中,水浴化冻的花粉萌发率最高(36．37％)。     

玉蝉花花粉生活力检测和超低温保存研究

[目的]研究花粉超低温保存方法,对于解决植物杂交育种花期不遇问题以及实现种质资源的保存等都具有重要的现实意义。[方法]以鸢尾属植物观赏价值很高的耐寒种玉蝉花为研究对象,对其花粉悬滴法活力检测离体培养基筛选和超低温保存方法进行研究。[结果]玉蝉花花粉活力检测较适合的液体萌发培养基配方为蔗糖150 g/L+H_3BO_3200 mg/L+CaCl_2150 mg/L+Fe_2(SO_4)350 mg/L+KNO350 mg/L+MgSO_4·7H_2O 100 mg/L;超低温保存要采集活力较高的初花期花粉,较适宜含水量为15.0%~20.0%,超低温保存后选用自来水水冲化冻,花粉萌发率由保存前的56.04%提升到保存后的60.53%;玉蝉花花药也可作为超低温保存材料,保存后采用自来水水冲化冻其花粉萌发率为54.11%。[结论]保存后的花粉活力符合花粉使用活力要求,可用于指导实践。