鱼卵线粒体DNA的分离纯化的简便方法

湖北素称鱼米之乡．仅武汉地区鱼类就有800余种．发展渔业生产是国民经济的重要方面之一，我们认为研究鱼的线粒体DNA(mtDNA)可以为发展渔业生产提供重要的有价值的理论依据。而且研究鱼卵mtDNA优点较多，一是材料丰富，二是mtDNA含量较高。     

草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定及其对肝细胞miR-122/33和免疫相关基因表达的影响

外泌体是具有磷脂双分子膜结构的纳米级囊泡,能够参与机体多种生理过程。实验探讨了草鱼肝细胞外泌体的分离鉴定方法,并初步研究外泌体对草鱼肝细胞中miRNAs及免疫相关基因表达的影响。实验以草鱼肝细胞L8824为材料,通过超速离心获得外泌体,利用电子显微镜观察外泌体形态,采用纳米颗粒示踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术检测外泌体粒径和数量,同时利用Western blot分析其标志蛋白CD63的表达,最后用正常肝细胞和油酸诱导的脂肪肝细胞源外泌体孵育草鱼肝细胞,通过Real-time qPCR技术检测两种不同来源的外泌体对草鱼肝细胞中miR-122/33及免疫相关基因(TNF-α,NF-κB,IL-1β,IL-6和IL-10)转录水平的影响。结果显示,草鱼肝细胞外泌体为30～150 nm的不均匀囊泡,呈圆形或椭圆形,有完整的膜结构;外泌体标志蛋白CD63呈阳性表达;NTA技术检测显示外泌体囊泡占所有囊泡的50%以上;脂肪肝细胞源外泌体显著提高了肝细胞中miR-122及炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA转录水平。研究表明,通过超速...     

一种快速分离λ噬菌体DNA的方法

大肠杆菌噬菌体λ(Lambda phage)是一种具有基因组约为50kb双链DNA的噬菌体。自1974年Murray，Thoma使用λDNA作为一种克隆载体以来，λDNA的制备方法有过不少报道。最近Silhavy等介绍了一种较好的方法，我们加以改进，先用差速沉降离心法浓缩噬菌体，然后用氯化铯(CsCl)不连续梯度沉降(Rate-Zonal Sedimentation)和氯化铯不连续梯度漂浮(Rate-Zona1 Floatation)两步离心法纯化噬菌体。     

草鱼肠道中香港海鸥型菌的选择性分离与鉴定

从广东省某市池塘采集商品规格(体重2．0～2．5k)的草鱼(Ctenoharyngodon idellus)，利用加有头孢哌酮的麦康凯琼脂培养基，对其肠道中细菌进行选择性分离与鉴定。结果显示，12尾草鱼的肠道中，5尾可分离到具有以下特征的细菌：两端生鞭毛，菌体弯曲似海鸥状，革兰氏染色阴性，过氧化氢酶、氧化酶、尿酶和精氨酸双水解酶阳性，还原硝酸盐。不发酵、氧化或同化葡萄糖、甘露醇等15种常见的糖醇类，细菌形态、生化特性与报道的香港海鸥型菌相似，阳性率为41．7％。但在肌肉中未分离到此菌。进行分离细菌的16S rRNA基因序列分析，与GenBank中登录的4株香港海鸥型菌序列的同源性为99．7％～99．9％。由菌的培养特征、形态特点、理化特性、16S rRNA基因序列分析等多元鉴定的结果表明，从草鱼肠道中选择分离的细菌为香港海鸥型菌。药敏实验结果表明，所分离菌株对奥格门丁和亚胺培南的敏感性与报道的香港海鸥型菌有一定区别。     

基因组微卫星DNA位点的分离方法及其在水产动物中的应用

微卫星 DNA 是分布于基因组的1～6个碱基组成的串联重复序列,或简单序列重复。微卫星 DNA 具有多态性高、数量丰富、共显性遗传和分析简单等特点,应用越来越广泛,已成为最受青睐的分子标记之一。微卫星分子标记的获得首次必须从实验生物中分离。分离微卫星 DNA 位点的方法有多种。文章对几种微卫星 DNA 位点分离技术进行介绍和分析比较,为选择合适的分离方法提供参考。     

一株从草鱼中分离的嗜水气单胞菌的病原学及基因组特征

为确定南昌地区某渔场草鱼出血性败血症的病原体及病原特征,从患病草鱼的肝脏病灶中分离出一株致病菌A1310。对分离菌进行了形态特征、理化特性等表型生物学检验、人工感染实验及对抗菌药物的敏感性实验,并对其进行了全基因组测序、基于多序列位点分型(multilocus sequence typing,MLST)的系统进化分析及毒力基因分析。结果显示,生理生化鉴定证明该菌为嗜水气单胞菌,当浓度达1.0×10⁶ CFU/mL时,对草鱼有致病性;对供试20种抗菌药物中的青霉素等7种耐药,对卡那霉素等5种敏感;A1310株基因组框架序列共包含96个与毒力和防御相关基因,其中多药耐药性外排泵基因占大多数,约为22%;与美国斑点叉尾鮰分离株(S15-242、S15-458、S15-591、S15-700)聚类为同一进化分支;比较基因组分析发现,A1310具有一个删减版的Ⅵ型分泌系统(type Ⅵ secretion system,T6SS),基因数量为标准Ⅵ型分泌系统的80%,缺少vgrG和vca0109基因的部分片段。综上所述,来源于草鱼的嗜水气单胞菌菌株A1310,与美国斑点叉尾鮰分离株具有亲缘关系,含有多个已报道的嗜水气单胞菌的毒力基因。本研究不仅丰富了嗜水气单胞菌的生物学性状内容,也为嗜水气单胞菌的有效检验、防治和深入研究提供一定的参考,对草鱼的疾病防控具有一定意义。     

一种从环境中分离和富集硝化细菌的方法

经反复分离筛选,从对虾养殖环境中分离得到5株亚硝化菌和3株硝化菌,均为革兰氏阴性细菌。设计了一套简易培养系统培养分离得到的硝化细菌,根据培养结果筛选出其中最具生长与硝化能力的优势亚硝化菌和硝化菌,同时检验应用该模式进行硝化细菌培养的效果。培养结果表明筛选的几株硝化细菌均有很强的生长和硝化能力,其中Y105和X101分别是亚硝化菌和硝化菌中最具优势的菌株。采用所设计的简易培养模式,在遮光、30℃、连续无菌充气的培养条件下,同时不补加营养物质和调整pH值,即可在短时间内获得较高密度(10~6～10~8 mL~(-1))的硝化细菌菌液,其中亚硝化菌富集培养时间为13～19 d,硝化菌为6～12 d。     

从固定液保存的刺参样品中提取基因组DNA的改进方法

<正>刺参(Apostichopus japonicus)分类学上隶属于棘皮动物门、游走亚门、海参纲、楯手目、刺参科,是重要的经济海参物种[1]。刺参含有丰富的蛋白质、酸性黏多糖、维生素、氨基酸、海参皂苷以及多种微量元素和生理活性物质,具有很高的营养、保健和药用价值。其中以产于我国辽宁、山东沿海的刺参营养、药用价值最高。随着人们生活水平的提高,刺参市场需求量显著增加。20世纪80年代以来,随着海洋经济快速发展,我国刺参