小鼠胚胎卵巢体外培养中卵细胞的生长及其数量的调节

利用胚胎卵巢体外长期培养技术研究了小鼠卵巢中卵细胞的生长发育状况。材料取自B6D2雌小鼠F1代胚胎，服龄为11．5日和13．5日。用Orcein染色法鉴别雌雄。分离出的卵巢培养12～14d。5d后换一次培养液，以后每2d换1次。培养8d后，13．5日龄胚胎卵巢中卵细胞已形成与体内相似的有规则的分布。在卵巢皮质部有大量的卵母细胞和少量体细胞，而在髓质部只有少量的卵母细胞和大量的体细胞。大量的未生长的小卵母细胞（直径＜25μm）紧密地分布在皮质的外侧，而生长印母细胞则主要分布在皮质的内侧和髓质。11．5日龄胚胎卵巢经过10～12d培养，没有形成上述分布规律，所有观察到的卵细胞都是生长中的卵母细胞。卵细胞数量也显著低于13．5日龄胚胎的卵巢（34．4±6．53比566．7±49．5）。用IGF－I和FSH处理11．5日龄胚胎卵巢可显著增加其卵细胞的数量（分别为88对55，P＜0．01和140对20，P＜0．005）。较老龄的胚胎卵巢组织对于11．5日龄胚胎卵巢卵细胞数量均有促进作用，其中以16．5日龄胚胎卵巢的作用较强（165对65，P＜0.005）。实验结果表明小鼠胚胎发育到达11．5～13．5日龄时期对于卵巢来说是获得形成卵巢内卵细胞分布规律能力的重要时期。11．0日龄胚胎卵巢缺乏某些因子的作用，因而不能在体外正常发育。     

远海梭子蟹成熟卵巢和早期胚胎的脂类成分比较研究

测定和比较了远海梭子蟹(Portunus pelagicus)成熟卵巢和早期胚胎的水分、总脂、脂类组成和脂肪酸含量, 结果表明:早期胚胎的水分含量显著大于成熟卵巢, 但后者总脂/组织湿重含量显著小于前者, 两者的总脂/组织干重并无显著差异;甘油三酰和磷脂含量在早期胚胎与成熟卵巢之间并不存在显著差异, 但是早期胚胎中的游离脂肪酸和胆固醇含量均显著高于成熟卵巢, 这可能是胚胎发育过程中脂类物质被水解成游离脂肪酸、胆固醇和甘油等物质;就脂肪酸组成而言, 两者中均检测出27种已知脂肪酸, 仅15∶0、14∶1n7、20∶1n7和18∶3n3 4种脂肪酸的含量存在显著差异(P<0.05), 16∶0、18：0、16∶1n7、18∶1n9、20∶5n3和22∶6n3为成熟卵巢和早期胚胎中的主要的脂肪酸种类, 其中n3PUFA/n6PUFA和20∶5n3/22∶6n3分别为3.5和0.7。     

远海梭子蟹成熟卵巢和早期胚胎的脂类成分比较研究

测定和比较了远海梭子蟹(Portunus pelagicus)成熟卵巢和早期胚胎的水分、总脂、脂类组成和脂肪酸含量,结果表明:早期胚胎的水分含量显著大于成熟卵巢,但后者总脂/组织湿重含量显著小于前者,两者的总脂/组织干重并无显著差异;甘油三酰和磷脂含量在早期胚胎与成熟卵巢之间并不存在显著差异,但是早期胚胎中的游离脂肪酸和胆固醇含量均显著高于成熟卵巢,这可能是胚胎发育过程中脂类物质被水解成游离脂肪酸、胆固醇和甘油等物质;就脂肪酸组成而言,两者中均检测出27种已知脂肪酸,仅15∶0、14∶1n7、20∶1n7和18∶3n3 4种脂肪酸的含量存在显著差异(P<0.05),16∶0、18:0、16∶1n7、18∶1n9、20∶5n3和22∶6n3为成熟卵巢和早期胚胎中的主要的脂肪酸种类,其中n3-PUFA/n6-PUFA和20∶5n3/22∶6n3分别为3.5和0.7。     

卵细胞的发生和调控

卵细胞在卵巢中进行减数分裂的过程叫作卵的发生,这个过程包括增殖期、生长期以及成熟期3个阶段.卵泡的发生包括卵泡的募集、选择和优势化,对于卵泡在发育的过程中出现这3个阶段的机理研究尚不是很清楚.卵泡发生的调节机制非常复杂,在此重点研究卵巢局部因子对卵母细胞发育的影响以及卵泡各结构间的相互影响,卵母细胞发育的过程中也出现了超微结构的改变.     

条件性诱导转基因斑马鱼卵细胞的凋亡和消融

【目的】构建针对斑马鱼Danio rerio卵细胞的可诱导消融品系,并了解其卵巢组织在条件诱导下的去除规律和特性,为相关领域的应用提供材料基础。【方法】利用Tol2转座系统建立卵细胞特异表达硝基还原酶(Nitroreductase,NTR)的转基因斑马鱼品系;通过定期采样,连续观察、解剖、组织切片等方法研究甲硝唑(Metronidazole,Mtz)对成熟雌鱼外观及卵巢结构的影响;冰冻切片结合TUNEL检测,了解条件性诱导对卵巢细胞凋亡的影响。【结果】获得囊胚细胞具特异荧光标记的转基因鱼,并形成稳定遗传品系。经Mtz诱导,该品系成熟雌鱼卵巢结构逐步退化、萎缩,卵母细胞渐渐消融,提示NTR在卵细胞特异表达;检测发现Mtz可导致卵细胞的凋亡,推测卵巢的组织变化为细胞凋亡所致;撤销Mtz胁迫卵巢可再生并恢复生育功能,说明卵巢的消融过程是可逆的。【结论】获得的转基因斑马鱼可通过条件诱导实现卵巢消融与再生。     

油松卵细胞内蛋白泡动态变化及与卵细胞发育相关特异蛋白质的研究

该文采用石蜡切片法对油松卵细胞发育过程中蛋白泡的动态变化进行了研究,并利用蛋白质双向电泳技术和ImageMasterTM2D Platinum软件初步分析了与卵细胞发育相关的特异蛋白．结果表明:5月初颈卵器开始形成,其内充满液泡,随着液泡的消失,蛋白泡从卵细胞的下部和边缘出现,在精核即将进入卵细胞时蛋白泡数量达到高峰,受精时蛋白泡开始减少,逐渐出现空泡现象.精卵结合之后,蛋白泡几乎全部成为空泡.伴随着蛋白泡的变化,胚内的糖类物质和蛋白质也呈现出有规律的时空变化.蛋白质双向电泳图谱表明:从颈卵器形成到卵细胞受精之后,4个新蛋白点出现,10个蛋白点消失,10个蛋白点表达量减弱．      

虾蟹类幼体脂类组成研究进展

虾蟹类幼体脂类组成与虾蟹类幼体的蜕皮、生长发育和存活紧密相关。就虾蟹种类及发育阶段、环境温度、饵料营养组成、投喂水平和亲本营养状况对虾蟹类幼体脂类组成研究进展进行了综述,同时,对今后虾蟹类幼体脂类组成方面开展深入研究提出了一些建议。     

山羊卵巢卵母细胞的体外成熟

将234枚卵丘细胞层完整致密的卵母细胞分别培养于含有10％FCS的TCM_(199)+hCG(20μg/mL)、TCM_(199)+hCG+17β—E_2(1μg/mL)和Ham＇s F_(12)+hCG+17β—E_2三种培养基中,培养24—26h,其成熟率分别为55.6％(15/27)、79.4％(104/131)和76.3％(58/76)。结果表明:TCM_(199)和Ham＇s F_(12)都是山羊卵母细胞体外成熟的合适培养基;雌激素的存在对其成熟是有益的(P<0.05)。     

促肾上腺皮质激素释放激素对离体斑马鱼卵细胞类固醇激素合成的影响

在硬骨鱼类中,促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)在内分泌、自主神经活动、免疫、渗透压和摄食活动中起着至关重要的作用,但有关CRH是否对斑马鱼卵细胞类固醇激素合成的研究较少。以体外培养斑马鱼卵细胞为实验材料,通过荧光定量PCR技术和放射性免疫方法,检测CRHα和CRHβ处理后卵细胞中CRH受体(CRHR1和CRHR2)及类固醇激素合成相关基因的表达变化,并检测培养液中雌二醇和孕酮的含量。结果显示,100 nmol/L CRHα和CRHβ处理后,卵细胞中CRHR1基因表达量显著上调,CRHR2基因表达无显著变化。CRHβ显著增加卵细胞中cyp19a1a基因表达,CRHα和CRHβ对其他类固醇激素合成相关基因的表达无显著影响。添加CRHα和CRHβ后,培养液中雌二醇的含量显著降低,孕酮的含量无明显影响。提示CRH可能通过斑马鱼卵细胞中CRHR1调节雌激素合成相关基因的表达抑制雌激素的合成。     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养,比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响,并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。【结果】卵巢保存温度为20～25℃时,山羊卵母细胞体外成熟率显著高于卵巢保存温度26～30℃(P=0.021)。蒙古牛卵巢保存于20～25℃时,其卵母细胞成熟率极显著高于卵巢保存在26～30℃(P=0.001)。保存温度为20～25℃时,绵羊、牦牛和奶牛的卵母细胞体外成熟率都较高于卵巢保存温度为26～30℃时的成熟率。另外,牦牛卵母细胞在四孔板中成熟培养的成熟率与在35 mm培养皿中成熟率并没有显著差异(P=0.65)。【结论】绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛的卵巢保存于20～25℃为宜,该卵巢保存温度可提高卵母细胞体外成熟率。牦牛卵母细胞在四孔板中培养的成熟率高于在35 mm培养皿中成熟率。     

牛卵母细胞体外成熟技术研究进展

牛卵母细胞体外成熟是一项重要的繁殖生物技术,但是由于卵母细胞没有经历体内促黄体激素（LH）峰启动前的生长过程及生物事件干扰了胞质成熟,导致体外发育能力低于体内成熟的卵母细胞。卵母细胞成熟过程复杂,涉及细胞核、细胞质及分子成熟。牛卵母细胞体外成熟受多种因素影响,其中包括卵母细胞来源、颗粒细胞与卵母细胞间相互作用及体外培养环境等。迄今为止,为了提高牛卵母细胞的体外发育能力,许多学者模拟卵母细胞体内环境发展了一些新的体外成熟技术,诸如体外延迟自发恢复减数分裂成熟、外源卵母细胞分泌因子促进卵母细胞体外成熟及模拟生理条件下卵母细胞成熟等方法。本文综述了牛卵母细胞成熟过程、影响卵母细胞体外成熟因素及近年来提高牛卵母细胞体外成熟的新方法。     

柞蚕卵巢移植于雄体后的发育及其卵黄原蛋白的吸收积累

卵黄原蛋白（Ｖｎ）是昆虫卵中主要的蛋白质。正常的柞蚕卵里,卵黄原蛋白（Ｖｎ）中卵全蛋白的７０％以上,把柞蚕的卵巢移植于雄体,不仅能发育,而且能形成卵,在此把该卵称之为柞蚕雄卵。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和免疫印迹分析的结果表明,卵黄原蛋白在柞蚕雄卵里也有一定的积累。并确认该卵黄原蛋白来自于雄体柞蚕液里的卵黄原蛋白前驱体。由于雄体柞蚕液含有的卵黄原蛋白前驱体的量少（卵全蛋白的２．２％,刘朝良等未发表）,每个移     

水生动物铅毒性作用的研究进展

综述了铅在水生动物体内的吸收、分布和蓄积以及铅对水生动物多器官、多系统的毒性作用。     

植物富硒规律的研究进展

综述富硒植物的种类、富硒能力、植物体内硒的吸收、代谢、积累过程及施硒方法等．为今后富硒作物高效栽培管理及富硒产品开发利用提供参考。     

哺乳动物卵母细胞去核方法的研究进展

随着"多莉"羊的诞生,体细胞克隆技术近年来发展迅速,并获得了一大批克隆动物.但克隆动物的效率仍然偏低,这与克隆技术各个环节的完善程度有关,卵母细胞的去核就是其中的重要环节之一.本文对近年来常见的几种卵母细胞去核方法作了详尽的论述,以期为该领域的科研工作者提供参考.     

细胞松弛素B对猪卵母细胞去核的影响

适宜的细胞松弛素B(CB)浓度可提高卵母细胞的成功去核率。将有明显第一极体排出的卵母细胞放入含有3.5×10-3、5×10-3、6.5×10-3、7.5×10-3mg.ml-1CB的NCSU37成熟培养液中孵育30min,采用盲吸法去核,将去核后的卵母细胞置入含5×10-3g.ml-1的Hoechst33342培养液中染色15min,用荧光显微镜检验去核率。结果表明:CB处理组去核率显著高于对照组(P<0.05)。不同浓度梯度处理组中,CB浓度过低(3.5×10-3mg.ml-1)或过高(7.5×10-3mg.ml-1)都使去核成功率(54.44%,51.46%)下降,溃破率(28.21%,34.11%)增高,与5×10-3、6.5×10-3mg.ml-1组的去核成功率(75.83%,73.83%)、溃破率(9.86%,11.62%)差异显著(P<0.05),且5×10-3mg.ml-1组的去核成功率高于6.5×10-3mg.ml-1组,差异不显著(P>0.05)。证明5×10-3mg.ml-1浓度的CB有利于第一极体和核质的吸出,同时可降低细胞膜撕裂,胞质破溃流出,获得较高的去核效率。     

Effect of GPAG Supplement on Porcine Oocyte Maturation and Its Following Embryonic Development by Parthenogenetic Activated

The aim of this study was to compare the effect of GPAG and commonly used FCS on porcine oocyte maturation and subsequent embryonic development after the fertilization. COCs were aspirated from follicles and cultured for 16, 24, 32, 40 and 48 h in TCM-199 medium either with GPAG or FCS. After 24 h with GPAG, 89.4% of oocytes reached M Ⅰ stage while in the medium supplemented with FCS, only 27.7% of oocytes reached the same stage （P〈0.05）. Prolonged incubation for up to 32 h clearly demonstrated that some of oocytes cultured in GPAG medium were at M Ⅱ stage （35.7%）, few of oocytes from FCS medium were at M Ⅱ stage （7.5%） （P〈0.05）. Both groups of oocytes reached the same stage of maturation within 48 h. After 48 h of culture, the oocytes with extruded polar bodies were inseminated. Fertilized oocytes were cultured in PZM3 medium supplemented with 3 mg.mL of BSA. After 7 days, the development and the quality of embryos were evaluated. The results showed that the maturation of oocytes in the presence of GPAG significantly increased their subsequent developmental ability when compared with FCS supplementation （29.2% ： 18.9% of blastocysts, P〈0.05）. However, differential staining revealed that once blastocysts were formed in either group, they had the same total cell number （39 ： 38） and the ICM/total cell ratio （0.26 ： 0.28）     

水生动物10种非特异性免疫分子的研究进展

水生动物的非特异性免疫系统在其自身抗病作用中较特异性免疫系统发挥更大作用.从水生动物免疫系统的防御功能分别综述了主要组织相容性复合体、补体、干扰素、凝集素、白细胞介素、抗菌肽、溶菌酶、转铁蛋白、鱼精蛋白以及金属硫蛋白等10种水生动物非特异性免疫分子的研究进展.