蛋白酶对曲霉原生质体稳定性再生及融合的影响

４种蛋白酶对黑曲霉，米曲霉原生质体稳定性，再生有主融合的研究结果表明，蛋白酶用于原生质体灭活前或后保温均显著降低原生体数量，同时提高原生质体再生率及灭活性原生质体融合指数。蛋白酶安全，无毒可以替代常规促融合剂聚乙二醇。     

洛伐他汀产生菌土曲霉原生质体的制备与再生

报道了产生降血脂药物洛伐他汀（lovastatin)的土曲霉（Aspergillus terreus)的原生质体的制备与再生条件及原生质体形成过程,结果表明用溶壁酶5mg.mL^-1,Zymolyase 20T 2.5mg.mL^-1和蜗牛酶2．5mg.mL^-1配制的混合酶液,可制备出土曲霉生质体;其最佳酶解温度为34℃,作用5h,原生质体再生率达17％以上。     

禾谷镰孢原生质体的形成与再生

研究报道了制备禾谷镰孢原生质体的方法琢影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％），蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰后趋于稳定，而以纤维素酶（３％）、溶菌酶３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶１．５％＋１．５     

米曲霉原生质体生成条件的研究

[目的]探讨米曲霉原生质体制备的高效方法.[方法]统计米曲霉菌丝体检测不同生长时间(72、84、96、108、120 h)的菌丝、不同渗透压(分别使用0.8 mol/L蔗糖、氯化钠和葡萄糖溶液作为渗透压稳定剂)和不同组合酶系(溶菌酶、纤维素酶和蜗牛酶、混合酶系的配比按照L9(34)正交设计)下的原生质体产量.[结果]经检测,培养108 h菌丝体、0.8 mol/L NaCl渗透压稳定剂原生质体产量较高.同时溶菌酶(2 mg/ml)+纤维素酶(6 mg/ml)+蜗牛酶(6 mg/ml)组合酶系原生质体产量较高,达9×105个/ml.[结论]原生质体的产量受菌体自身状况和外界条件影响.该研究为大量制备高活力的原生质体及进行细胞融合试验奠定了基础.     

禾谷镰孢原生质体的形成与再生

研究报道了制备禾谷镰孢（ＦｕｓａｒｉｕｍｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍＳｃｈｗ．）原生质体的方法及影响原生质体再生的条件。ＰＤＳ培养液中培养的菌丝和５％绿豆汁中产生的分生孢子，在２８℃下通过蜗牛酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％＋１．５％）酶解，２ｈ开始有原生质体释放，５ｈ左右达释放高峰，后趋于稳定。而以纤维素酶（３％）、溶菌酶（３％）、蜗牛酶＋纤维素酶（１．５％＋１．５％）、蜗牛酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）、纤维素酶＋溶菌酶（１．５％＋１．５％）处理，原生质体形成效果较差。原生质体在ＰＤＡＳ高渗培养基上再生频率较高（２０％～３０％），在ＭＭＳ上再生频率较低，而在ＮＭＳ上原生质体则不能再生。在ＰＤＡＳ中加入ＫＣｌＯ３和ＭＮＮＧ对原生质体再生有一定影响     

黑木耳原生质体制备及再生的研究

文章用浓度为0.6mol·L-1的MgSO4·7H2O渗透压稳定剂配制浓度为1.5%的溶壁酶,在pH6.0,30℃条件下酶解3h,黑木耳原生质体产量达到最高值为9.2×106个·mL-1。最适合原生质体再生的培养基配方为:马铃薯20%,葡萄糖2%,MgSO4·7H2O0.15%,蛋白胨0.1%,KH2PO40.1%,琼脂2%,甘露醇0.6mol·L-1,在此培养基中的再生率为33.09%。     

NTG和UV复合诱变米曲霉原生质体选育米蛋白分解菌的研究

以米曲霉（Ａ．ｏ－２）原生质体为对象，采用ＮＴＧ和ＵＶ作为诱变剂进行单因子和多因子复合诱变处理，在以米渣为主要原料的固体培养基上培养，选育出中性蛋白酶活力较高、生长快、易于培养的变异株Ｎ－４。在原料配比为米渣：麦麸＝２：１、培养时间为４８ｈ、培养温度为３０℃的培养条件下，变异株Ｎ－４的中性蛋白酶活力最高，比出发菌株Ａ．ｏ－２提高３２．６％。     

高压静电场对金针菇原生质体再生的影响

以白金1号为试材,研究了高压静电场对金针菇原生质体再生的影响。结果表明,经1 000 kV/m高压静电场处理金针菇原生质体(3.904×107个/ml)20 min,可提高原生质体的再生率。     

酿酒酵母原生质体形成和再生的研究

用正交实验分析了影响酿酒酵母原生质体形成和再生的原因,发现主要是稳定剂种类和酶浓度,在本实验系统中以１７％稳定剂,１％蜗牛酶３０℃作用６０ｍｉｎ为最佳实验条件。     

鸡腿菇原生质体制备与再生研究

以鸡腿菇双核菌丝为材料,利用溶壁酶制备原生质体,采用单因素试验确定最佳条件。结果表明,原生质体产量最高的条件是取菌龄为5 d的液体静置培养的菌丝体,以0.6 mol/L蔗糖为渗稳剂,在酶解温度30℃、酶浓度20 g/L、菌丝量20 g/L的条件下酶解3 h,制备的原生质体量为2.5×107个/m L。将制备的原生质体稀释并涂布于再生培养基,再生率为10.9%,研究为鸡腿菇原生质体融合及优良品种选育提供研究基础。     

平菇原生质体制备及再生培养研究

平菇菌丝原生质体的释放以菌龄４～６ｄ的幼嫩菌丝,用２％Ｌｙｗａｌｚｙｍｅ采用０．６ＭＫＣｌ为渗稳剂在ｐＨ值为５．５、温度为３５℃、酶解２～２．５ｈ生长较好,可达１０７个／ｍＬ,孢子释放原生质体在１．５％溶壁酶和１．５％纤维素酶混合作用,同样外界条件下原生质体转化率可达１００％。原生质体再生以２号培养基在０．６Ｍ甘露醇的作用下,用载片悬浮滴式再生法,再生率可达１２．３％。     

香菇原生质体的分离与再生行为

通过电镜观察与酶解分析确定香菇（Ｌｅｎｔｉｎｕｓｅｄｏｄｅｓ）菌丝细胞壁组成后，进行了双核菌丝原生质体的分离和培养．结果为：①在酶解中，菌丝原生质体一般只从菌丝顶端等新生部位释放出来，合适的渗透剂、菌龄和酶解温度是提高原生质体得率的重要保证；②原生质体再生菌丝是一个间歇性的依赖于原生质体团涌动流向的过程．再生菌丝的形成经历了原生质体形成突起－哑铃状－分枝状等不同形态类型的再生阶段；③培养再生的菌丝体在形态上没有观察到锁状联合，栽培后未能结实，初步判断为单核菌株     

2株黑曲霉原生质体的形成和再生过程观察

在相差显微镜下详细观察了２株黑曲霉在最适条件下形成原生质体及其再生的过程。结果表明，黑曲霉的原生质体均能从菌丝体的顶端及其它部位释放出来。释放的原生质体呈球形，大小不一。在多数原生质体现人均能地看见含有１个巨大的液泡。原生质体再生同时存在２个形式；一是先从原生质原生１个突出物，随后逐渐增大并延伸成１条旋绕的无隔菌丝，继续发展成为有隔的下沉菌丝；第二谋划 由酵母状细胞生效边发育成正常菌丝。     

原生质体诱变提高米曲霉产纤维素酶活力的研究

利用紫外线对米曲霉原生质体进行诱变，获得1株高产纤维素酶的3号突变株，其纤维素酶活较出发株提高了2.49倍，同时研究表明，无机盐MgSO4和（NH4）2SO4对3号菌株产纤维素酶有促进作用     

甘蓝型油菜子叶原生质体培养再生植株

从早熟甘蓝型油菜品种６０１的子叶中游离出原生质体，采用液体浅层培养，获得持续分裂的细胞。培养基中的２，４－Ｄ浓度对刺激细胞分裂至关重要。形成的小愈伤组织必须继代培养（ＭＳ培养基补加２，４－Ｄ０．２ｍｇ／Ｌ，ｋｔ２ＭＧ／Ｌ）后，再转至ＭＳ分化培养基（补加ＮＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ３ｍｇ／Ｌ）上，才能分化出芽。分化的芽在ＭＳ生根培养基（补加ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ）上，可以形成完整植株。     

烟草叶肉原生质体再生植株的研究

烟草原生质体是以烟草叶片薄壁细胞为材料，在无菌条件下，用2％纤维素酶（Onozuka-R10)0.5%离析酶（Macerozyme R-10),0.2%葡聚糖硫酸钾，5mN氯化钙，1mM磷酸二氢钾，0．7M甘露醇，PH5．8；或0．75％纤维素酶（EA3 876），0．3％离析酶，0．3％葡聚糖硫酸钾，0．7M甘露醇，PH5．6的沸合酶液，降解细胞壁分离出来的，并在NT（提高了氯化钙，VB1含量和降低硫酸镁含量以及增添了烟酸和维生素B6）液体培养基中培养，2天后发生细胞壁再生，3－4天后出现再生细胞的第一次分裂，5－7天第二次分裂，14天后可见15－20个细胞组成的小细胞团，此时要改变碳源和降低渗透浓度，30－40天后形成40－50个细胞组成的细胞团，大的细胞团约达1毫米，转移至固体分化培养基，随后进一步分化出小苗，将具有4－5片叶片，3－4厘米高的小苗 转移到生根培养基，发育成完整的小植株。