胶体磨制作油佐剂灭活疫苗工艺探讨

胶体磨制作油佐剂灭活疫苗工艺探讨张培君龚玉梅北京市农林科学院畜牧兽医研究所北京１０００８１使用油佐剂灭活疫苗，防制某些畜禽传染病，已在国内外兽医界广泛采用。为提高油佐剂灭活疫苗的免疫效果，国内外学者在研制工艺上做了大量的工作。国外学者报告，鸡新城疫与...     

鸭大肠杆菌病区域优势血清型疫苗研究报告（Ⅰ报）——疫苗的制备、安全性及免疫效果试验

用鉴定筛选的大肠杆菌接种适宜培养基,将培养物经甲醛溶液灭活后,分别制备氢氧化铝胶灭活疫苗、油乳剂灭活疫苗,经检验合格,用于安全和效力试验,比较两种佐剂制备的灭活疫苗的免疫效力。结果表明,氢氧化铝胶作为佐剂制备区域优势血清型疫苗来预防本地的鸭大肠杆菌病效果更好。     

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。     

鸭传染性浆膜炎油佐剂灭活疫苗的研究

以１、２型鸭疫里默氏菌分离株为菌种研制了１型鸭传染性浆膜炎单价油佐剂灭活疫苗和１、２型鸭传染性浆膜炎二价油佐剂灭活疫苗。经过无菌及安全检查合格后对７日龄雏鸭经颈部皮下接种０．５ｍＬ／只,免疫后１４、２４ｄ用相同血清型强毒攻击,保护率达９０％￣１００％。单价疫苗免疫后２周内,抗体水平持续上升,从第３周开始缓慢地下降,５周时仍然维持在较高水平。通过攻毒保护试验和抗体消长规律的测定表明,鸭传染性浆膜炎油     

猪流行性腹泻灭活疫苗佐剂筛选

为探究不同佐剂对猪流行性腹泻灭活疫苗免疫效果的影响,选用水包油佐剂A(O/W)、油包水佐剂B(W/O)和双相佐剂C(W/O/W)3种不同佐剂配制疫苗,分别接种3～5日龄仔猪后攻毒,综合评价不同佐剂的免疫效果。结果显示：A、B佐剂组疫苗免疫猪的抗体水平低于C佐剂组;攻毒后进行猪流行性腹泻病毒检测发现,仅C佐剂组试验猪全部呈阴性;剖检所有疫苗免疫组试验猪均未发现脏器病变。结果说明：双相佐剂制备的灭活疫苗免疫效果明显优于水包油和油包水佐剂疫苗,且安全性较高,可优先选择双相佐剂制备猪流行性腹泻灭活疫苗。本研究为猪流行性腹泻疫苗制备、生产提供了技术支撑。     

鸭副黏病毒油乳剂灭活疫苗的制备

将分离的鸭副黏病毒,经0.1%的甲醛灭活后与白油、吐温-80、司盘-80,按一定比例混合后在胶体磨中快速乳化成油包水型,制备了鸭副黏病毒油乳佐剂灭活疫苗。并对制备的疫苗进行了物理性状、无菌检验、安全性、稳定性检验、抗体消长规律、交叉免疫保护及免疫效力检验。结果表明,该疫苗安全可靠,注射后鸭的精神状况良好,饮食、粪便无异常变化,注射部位未见明显变化,疫苗吸收良好。免疫后14d即可产生抗体（平均为41og2）,60d可达到91og2。免疫后25d攻毒保护率可达90%以上。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定及免疫原性

自西安某鸭场病鸭中分离到 1株菌 ,经染色镜检、分离培养、生化试验、动物回归试验 ,鉴定为鸭疫里默氏菌 ;用分离菌株制作成油佐剂灭活疫苗 ,免疫 10日龄雏鸭 ,于免疫后 30 d用同源菌攻击 ,保护率为 83%(5 / 6 ) ,结果表明 ,本菌具有良好的免疫原性。     

蜂胶对PPV灭活疫苗细胞免疫效果的影响

为了研究蜂胶作为佐剂对猪细小病毒（PPV）灭活疫苗细胞免疫效果的影响,试验将20头25-30日龄健康仔猪随机均分为4组,1-3组分别颈部肌肉注射2 m L蜂胶、铝胶和油佐剂猪细小病毒灭活疫苗,第4组为空白对照组注射2 m L生理盐水,2周后以相同剂量进行第2次免疫。分别于首免后第7,14,35天颈静脉采血5 m L,采用MTT法测定外周血淋巴细胞增殖变化,ELISA法检测淋巴细胞上清液IL-2、IFN-γ（Th1型）和IL-6（Th2型）细胞因子含量。结果表明：蜂胶佐剂可以促进淋巴细胞增殖和提高各细胞因子含量,效果优于油佐剂和铝胶佐剂。说明蜂胶提高细胞免疫的效果较好,可以作为猪细小病毒灭活疫苗佐剂使用。     

鸭传染性浆膜炎灭活疫苗比较研究

将重庆地区分离鉴定的2株鸭疫里氏杆菌培养、灭活、加入佐剂制成蜂胶、氢氧化铝和油乳剂灭活疫苗，分别免疫5日龄雏鸭，结果表明疫苗是安全的，经一次免疫后10天的保护率分别是70%、50%、75%，15天后的免疫保护率分别是80%、75%、100%；经2次免疫后7天的保护率分别是100%、100%、89%，10天后的保护率均达到100%。     

鸭疫里默氏菌病油佐剂灭活疫苗的研制

为了有效控制鸭疫里默氏菌病的发生,我们将本地区分离鉴定的鸭疫里默氏菌作为菌种,采用液体增菌培养后灭活,加入佐剂制成油乳剂灭活疫苗,经无菌和安全检验合格后免疫4日龄雏鸭(0.5mL/只)。结果表明该疫苗免疫效果良好,一次免疫后保护率达70%,两次免疫后保护率达95%。     

家禽主要疫病免疫技术(三)

大肠杆菌病目前只有大肠杆菌灭活疫苗。最好应用标准株加现地株的“现地自家多价灭活疫苗”,并且注意随时跟踪现地致病菌株的动态变化以便适时针锋相对,保证疫苗的“动态对型”预防。疫苗种类依佐剂的不同大体分为四类:铝胶佐剂灭活疫苗、蜂胶佐剂灭活疫苗、蜂胶中草药佐剂灭活疫苗、油佐剂灭活疫苗,以后二者效果最好。一般七日龄以上鸡均可应用,皮下或肌肉注射。禽霍乱分为灭活疫苗与弱毒活菌苗两大类,还有联苗和亚单位疫苗。1.灭活疫苗:共有“铝胶、油乳剂、蜂胶”3种佐剂类型,以蜂胶佐剂灭活苗保护率最高(80%以上)、免疫期最长(半年);铝…     

A:L1型鸭源多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A:L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种,通过涂板法测定该菌株生长曲线,并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose, LD₅₀),将该菌培养至终浓度为1×10¹⁰ CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验;通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率,并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A:L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值,活菌数可达1.0×10¹⁰ CFU/mL;LD₅₀为5 CFU;制备的两种疫苗安全性良好;攻毒保护试验结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%,高于白油佐剂灭活疫苗(50.0%)及商品灭活疫苗(50.0%)。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显,免疫保护率可达87.5%,高于白油佐剂灭活疫苗(75.0%)及商品灭活疫苗(62.5%)。病...     

复合多糖对鸭疫里氏杆菌疫苗免疫效果的影响

将复合多糖与免疫效果较好的蜂胶分别作为佐剂,设定不同的浓度制备鸭疫里氏杆菌参考株RA2F2与本地分离株YM1、YM2的三联灭活疫苗,首免后第7天开始采集试验鸭鲜血制备血清,每隔4～5d采用试管凝集反应监测其抗体滴度,比较各试验组的免疫效果。结果表明:高浓度(10g/mL)复合多糖佐剂及多糖蜂胶复合佐剂于首免疫后的第11天抗体效价均达到1∶40;多糖蜂胶复合佐剂最高效价于免疫后的第19天达到1∶160,一直维持较高水平,适合作为制备鸭疫里氏杆菌多联灭活疫苗的佐剂,其最适添加比例是15mg/mL,其中蜂胶与复合多糖的比例是1∶2;本研究同时也表明于3～5日龄首免、10～12日龄加强免疫一次是预防鸭疫里氏杆菌病发生的较好免疫程序。     

不同佐剂制备的猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗免疫效果的比较研究

佐剂的剂型对疫苗稳定性、安全性及免疫效力均有一定的影响。为筛选优质佐剂以提高猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的免疫效果,分别使用水包油包水佐剂(ISA206)、水包油佐剂(ISA28VG)、油包水佐剂(ISA70VG)及水佐剂(Gel02)制备疫苗,并检测各组疫苗理化特性、安全性及免疫效力。结果显示：4种佐剂制备的猪伪狂犬灭活疫苗的理化特性、安全性均达到质量标准;免疫效力比较中,ISA70VG组相比其他免疫组具有较高的抗体水平且持续时间较长,其次为ISA206组;攻毒后,ISA70VG组和ISA206组无任何临床症状及病变。综合安全性及免疫效力,ISA206佐剂及ISA70VG更适合作为制备猪伪狂犬基因缺失标记灭活疫苗(JS2012ΔgE株)的佐剂。     

狂犬病灭活疫苗免疫佐剂的比较试验

本文利用反向遗传操作系统拯救出狂犬病病毒的携带双G基因的HEP-dG株,选用铝佐剂、蜂胶和油乳剂制成3种狂犬病灭活疫苗,进行小鼠免疫试验.试验表明,油乳剂和蜂胶佐剂狂犬病灭活疫苗免疫组效价较高.蜂胶狂犬病灭活疫苗二次免疫产生的抗体水平明显高于首免,油乳剂狂犬病灭活疫苗首免抗体水平与蜂胶狂犬病灭活疫苗二免产生的抗体水平相当.携带双G基因的HEP-dG株具有良好的免疫原性,油乳剂是作为该狂犬病毒株的最适佐剂.     

不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平对比试验

不同剂型的佐剂对疫苗的免疫效果有较大的影响,本试验旨在对比不同剂型佐剂的新城疫-禽流感(简称"新-流")二联灭活疫苗的免疫效果,从而为生产上选择最佳剂型佐剂应用于新城疫-禽流流感二联灭活疫苗提供依据。分别将油包水型、水包油型、水包油包水型佐剂与新城疫及禽流感灭活抗原乳化成不同剂型的新城疫-禽流感(H9亚型,HP株)二联灭活疫苗,将这三种不同剂型的新城疫-禽流感(H9亚型,HP株)二联灭活疫苗分别免疫一组7日龄SPF鸡。每羽颈部皮下注射0.2 m L,同时设一组未免7日龄SPF鸡作为对照组,各免疫组与对照组SPF鸡于免疫组免后6、10、15、21、28、35 d进行采血,检测新城疫与禽流感抗体水平。结果表明:免疫油包水型疫苗组SPF鸡免疫后新城疫与禽流感抗体上升最快,在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最高,其次是免疫水包油包水型的,而免疫水包油型疫苗组的SPF鸡新城疫与禽流感抗体上升最慢,而且在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最低。此外,从各免疫组可以看出,在免后6 d时新城疫抗体已开始产生,在1log2以下,而禽流感抗体仍未产生。可见免疫新-流二联苗后,新城疫抗体比禽流感抗体更早产生,油包水型新-流二联苗的免后抗体高于水包油包水及水包油型,而且能持续刺激机体产生高水平抗体,更具优势。     

乳酸杆菌肽聚糖对鸡新城疫油苗和禽流感油苗的免疫增强作用的研究

该试验提取2株乳酸杆菌L．casei zhang和MC2-1的肽聚糖作为佐剂,按不同剂量添加到新城疫油乳剂灭活疫苗及禽流感（H5）亚型油乳剂灭活疫苗中。用此2种加佐剂的油乳剂灭活疫苗对鸡进行免疫,每组20只,分别于15日龄和28日龄进行新城疫组和禽流感组首免,再分别于首免后2周加强免疫,在二免后的第7天与第14天检测血清抗体HI水平。结果表明,与对照组相比试验各组抗体水平均达到显著或极显著水平,可提高抗体水平2^0.33-2^2.50。随着细菌肽聚糖量的增加,各试验组在提高抗体水平上也增加。2株乳酸杆菌肽聚糖对鸡接种新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感（H5）亚型油乳剂灭活疫苗具有免疫增强作用。     

鸭病毒性肝炎油佐剂疫苗的研制

本试验用司本－８０、硬脂酸铝和自油作为油相,吐温－８０和本地分离的驯化野毒鸡胚尿囊液为水相。造成的油包术型油佐剂疫苗,４℃放置６个月稳定。４倍量接种雏鸭,无异常,本疫苗免疫雏鸭后７天,攻毒保护率为１００％,免疫期１个月以上。     

鸭传染性浆膜炎油佐剂灭活疫苗的研究

以血清Ⅰ型鸭疫里默氏菌(RA)分离株为菌种研制RA油佐剂灭活疫苗,对3日龄樱桃谷鸭颈背皮下注射0.25mL/只即可产生良好的免疫应答,免疫后10、13和16天对同源RA的攻击表现出35%、85%和100%免疫保护。疫苗一次免疫后30天ELISA抗体滴度达到高峰,至93日龄时仍能检出抗体。10日龄进行第二次免疫可产生更高的抗体滴度,到65天时仍能保持较高抗体水平。ELISA抗体滴度≥500时雏鸭即获得免疫保护。疫苗免疫雏鸭后能够显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)地增强T细胞的免疫力,时间持续两周。RA油佐剂灭活疫苗免疫雏鸭后免疫保护的形成是体液免疫与细胞免疫协同作用的结果,其中体液免疫占主导作用。     

鸡对新城疫油活混合苗的免疫应答

本报道了新城疫油活混合疫苗的制备及对7日龄和90日龄鸡的免疫试验。油活混合疫苗免疫7日龄（母源抗体3.46log2)鸡后产生的抗体水平与传统的油佐剂灭活苗间差异极显（P＜0．01）；免疫90日龄（抗体水平为7log2）鸡后，与传统的油佐剂灭活苗间差异不显（P＞0．05），但二都在抗体产生速度及维持时间上优于传统油佐活疫苗。结果表明：新城疫油活混合疫苗优于传统油乳剂灭活疫苗。