浒苔多糖脱蛋白方法的研究

采用酶法和Sevag法对浒苔多糖进行脱蛋白研究。结果表明,酶法脱蛋白效果明显好于Sevag法。在木瓜蛋白酶用量3%(W/V),pH值6.5,温度50℃,酶解时间2.5h的条件下,浒苔多糖中蛋白质含量由原来13.6%降为5.90%;而Sevag法重复3次后,多糖中蛋白质含量仅降至10.6%。     

纤维素酶法提取浒苔多糖的工艺条件

实验研究了纤维素酶法提取浒苔多糖的工艺条件 ,通过单因素试验和正交实验 ,确定了最适提取工艺条件为 :提取时间为 2 .5h ,温度为 4 0℃ ,pH值为 5 .0 ,加酶量为 8% ,浒苔多糖的提取率为 2 0 .2 2 %。     

未雨绸缪战浒苔

胶南 进入6月份,胶南市采取积极措施应对可能发生的浒苔自然灾害。具体做到以下三个到位：     

柱前衍生-高效液相色谱法测定浒苔多糖的组成

研究了浒苔多糖样品经三氟乙酸完全水解而无损失的最适条件,并且在优化流动相洗脱程序等色谱条件的基础上,建立了1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生-高效液相色谱法分析浒苔多糖的单糖组成及含量的方法。该方法采用配备紫外检测器的高效液相色谱仪,在250 nm波长下进行测定,外标法定量。结果表明,在此条件下,8种单糖能够良好分离,各单糖在1-100μg/ml范围内具有良好的线性关系,相关系数r≥0.999,回收率在76.0%-108%之间,相对标准偏差RSD10%。采用该方法对浒苔多糖样品进行组成及含量分析,发现无论样品原料为何种浒苔,浒苔多糖均以鼠李糖为主,同时还含有葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖、半乳糖以及少量的甘露糖、半乳糖醛酸和岩藻糖。     

浒苔染色体制备及核型初步分析

由于浒苔染色体制备难度较大,至今还没有准确染色体数目及核型分析报道。以引发我国黄海绿潮优势种浒苔(Ulva prolifera)为研究对象,采用酶解-荧光法制备浒苔染色体,并比较分析染色体制备过程中秋水仙素预处理时间、酶解时间和滴片高度等3个关键因素对染色体制片效果的影响,以建立浒苔染色体制备方法。结果表明:用质量浓度为0.2%的秋水仙素处理12 h,染色体浓缩程度适宜,分散均匀,形态清晰;用质量浓度为2%的纤维素酶、果胶酶、离析酶,混合酶解20 h效果最好,能去除细胞壁、细胞膜和多糖物质;30 cm高度下滴片,能使细胞分散均匀,可以获得质量较高的浒苔染色体。核型分析显示,浒苔雌、雄配子体染色体数目为9条,孢子体染色体数目为18条。研究结果可为未来浒苔遗传特征分析以及浒苔功能基因定位研究奠定基础。     

浒苔多糖对扇贝SOD酶和溶菌酶活力的影响

华贵栉孔扇贝体内注射了体积分数0．1％、0．25％的浒苔多糖后,在第24、48、72小时分别测定了扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活力。实验组扇贝血清中SOD酶活力在不同测定时间都显著地高于对照组,而血细胞中SOD酶活力在注射24h后和48h后显著地高于对照组;实验组扇贝血淋巴中溶菌酶在注射24h后和48h后显著高于对照组。说明浒苔多糖具有增强华贵栉孔扇贝免疫活性的作用。     

浒苔资源利用的研究进展及应用前景

浒苔(Enteromorpha prolifera)俗称苔条、青海苔,为绿藻门、石莼科、浒苔属大型海藻类。藻体直立,管状中空或藻体柄部和边缘部分呈中空,管状部分由单层细胞组成。藻体单条或有分枝,圆柱形,有时部分扁压。藻体基部形成固着器。欧、美、亚洲黄海和日本海等海域中均有广泛分布[1]。     

浒苔声反射特征的实验测定

以2008年夏季在中国黄海中南部海域引起绿藻暴发的主要种类浒苔(Enteromorpha prolifera)为研究对象,在消声水池内利用经过校正的、工作频率为70 kHz的Simrad EY500回声探测-积分系统对其声反射特征进行测定,根据浒苔的回声积分等测定值建立了浒苔声反射强度与浒苔密度关系的定量表达式.实验结果显示,浒苔是有效声散射体,其体积反向散射强度(Sv,dB)与浒苔密度(p,g/m3)之间的关系为Sv=17.31g p-95.9,与鱼类目标强度和体长关系具有类似的表述模式.结果证实渔业声学原理和现行渔业声学仪器、方法同样适用浒苔的探测,水声技术可成为下沉浒苔快速监测的有效手段.实验同时显示,浒苔的声散射特征具有其特殊的复杂性,这可能与其可通过光合作用产生气体(氧气)有关.因此,若欲利用声学方法对下沉浒苔资源进行定量评估调查,需对浒苔的生理生化特征进行同步观测研究.     

浒苔的氨基酸和脂肪酸组成研究

用氨基酸自动分析仪和气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术分析浒苔的氨基酸、脂肪酸组成和含量。结果表明,浒苔中含有18种氨基酸,氨基酸总量（TAA）为8.78%,人体所需的必需氨基酸（EAA）占总氨基酸的35.08%;从浒苔中鉴定出19种脂肪酸,由C12～C24脂肪酸组成,其中不饱和脂肪酸占脂肪酸总量的65.78%,以多不饱和脂肪酸为主,特别是16碳和18碳脂肪酸比较丰富,ω-3PUFA占脂肪酸总量的29.68%,绿藻的特征脂肪酸——亚麻酸（C18∶3n3）相对含量达18.70%。     

浒苔多糖对华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活性的影响

于华贵栉孔扇贝体内注射了0.1%,0.25%,0.5%3个不同浓度的浒苔多糖后,在24,48,72 h分别测定了华贵栉孔扇贝血淋巴中SOD酶和溶菌酶活力。结果表明:0.1%和0.25%实验组扇贝血淋巴中SOD酶活仅在注射24h后显著地高于对照组(P<0.05),而0.5%实验组在注射24 h后极显著高于对照组(P<0.01),而且在注射48h和72 h后仍显著高于对照组(P<0.05);0.1%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶的作用无显著影响,而0.25%和0.5%实验组对扇贝血淋巴中溶菌酶活力在不同测定时间都表现出明显的促进作用,其中0.5%实验组对血细胞中溶菌酶作用效果极显著(P<0.01);说明浒苔多糖具有增强华贵栉孔扇贝免疫活性的作用。     

抗菌性海藻酸钠涂膜在罗非鱼片保鲜中的应用

采用测定涂膜抑菌性能、缓释效果来探讨抗菌性海藻酸钠涂膜的抑菌机理并将其应用在罗非鱼片的涂膜保鲜中。实验结果表明,抗菌膜是一种具有缓释效果的保鲜膜,对大肠杆菌Esche-richia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis、腐败希瓦氏菌Shewanella putrefaciens及鱼片表面其他杂菌均有较好的抑制效果,保鲜剂在40h内可从涂膜中完全释放;与未经涂膜处理的对照组相比,抗菌膜可以明显控制鱼片细菌总数的增长、维持较低的挥发性盐基氮值和改善鱼片的感官质量,综合考虑鲜度指标并本着以感官评分为基础的原则,抗菌涂膜处理可以将罗非鱼片的保鲜期延长约5.5d。     

克雷伯氏菌胞外多糖的制备与组成分析

利用不同血清型的克雷伯氏菌Klebsiella菌株液体发酵,制备胞外多糖,并采用气相色谱和化学分析方法分析胞外多糖的化学组成。结果表明,菌株K26产胞外多糖的能力最高,培养48h和72h的产量分别为3.11mg/ml和3.89mg/ml;各实验菌株的胞外多糖的单糖组成包括甘露糖、葡萄糖和半乳糖。     

褐藻酸钠可食性膜制备工艺研究

以褐藻酸钠、羟丙基甲基纤维素为原材料,通过混合水平正交试验,使用溶胶、混胶、脱气、倒胶、钙化、干燥工艺制备可食性膜,研究了不同褐藻酸钠/羟丙基甲基纤维素配比、溶胶温度、氯化钙质量浓度、钙化时间、褐藻酸钠质量浓度以及羟丙基甲基纤维素质量浓度对膜性能的影响,结果显示优化工艺参数为:10mg/mL褐藻酸钠和50mg/mL羟丙基甲基纤维素按质量配比1∶1混胶,10mg/mL的氯化钙钙化10min;所得膜的厚度为0.14mm,抗拉强度为2.97 MPa,透光率为64.09%,干燥质量损失率为9.97%,人工胃液崩解时间超过24h,人工肠液崩解为2.07h。本工艺较为简单,成膜性较好,为进一步制备植源性空心硬胶囊壳奠定理论和实践基础。     

锈凹螺褐藻胶裂解酶的分离纯化及性质研究

采用硫酸铵沉淀、离心超滤、DEAE-Sephadex A25、Sephadex G-100和Sephacryl S-300 HR 柱层析等方法从海洋食藻性锈凹螺(Chlorostoma rustica)消化腺中分离纯化出一种褐藻胶裂解酶(Alginate lyase),得到电泳纯酶制品,并对此酶的酶学性质进行了研究.结果表明:此褐藻胶裂解酶的分子量为28 kD,反应的最适温度为40 ℃,具有热不稳定性,最适pH为7.0;酶的反应受多种离子的影响,Mn2 、Co2 和Cd2 对此褐藻胶裂解酶活性具有明显的抑制作用,而Mg2 、Zn2 、Na 和K 则具有促进作用;采用透明圈法和底物法验证了此裂解酶对聚甘露糖醛酸和聚古洛糖醛酸的特异性,实验表明,此酶对聚古罗糖醛酸(Polyguluronate,PG)有特异性.     

基于酶技术生产低黏度及超低黏度褐藻胶的工艺

为解决当前低黏度及超低黏度褐藻胶生产工艺中存在的不足,本实验以海带为原料,利用褐藻胶裂解酶降解制备低黏度及超低黏度褐藻胶,研究了分子量、p H、温度对黏度的影响,确定了碱消化的最佳条件,探究了酶解工艺中加酶量、酶解时间及原料的初始黏度对褐藻胶产品的影响。结果显示,通过控制加酶量(100~500 U/g),酶解30 min即可得到低黏度及超低黏度褐藻胶,其中加酶量为100~330 U/g时可得到低黏度褐藻胶,加酶量增加至330~500 U/g时,可得到超低黏度褐藻胶,且酶解法得到的褐藻胶样品分子量均一度高,工艺节水率高达10%~50%;同时研究发现酶解样品黏度与原料初始黏度相关性不大,只在较短时间内表现出相关性,该工艺具有较高的原料适用性。     

九孔鲍褐藻酸酶降解褐藻胶的反应条件与酶解产物的分析

以九孔鲍(Haliotis diversicoloeaquatilis)为原料制备一定纯度的褐藻酸酶,并对影响其降解褐藻胶的条件和产物的性质进行分析。该酶的最适温度和pH分别为45℃和7.0;与磷酸盐缓冲液相比,其在Tris-HCl缓冲液中与底物的亲和力相对较高。动力学曲线表明酶解反应主要发生在1 h之内,在2 h之内达到平衡,酶的剂量和底物的浓度对该平衡起到一定的影响作用。反应2 h之后,添加同数量的酶或者底物发现,产物的反馈抑制只是反应达到平衡的一个影响因素,而酶的变性失活也起到了重要的作用。金属离子对酶的活性具有明显的影响,Co2 、Mg2 对酶的活性具有较强的促进作用,而Cu2 、Ag 和Zn2 则具有较强的抑制作用。产物特性黏度的变化主要是在1 h内,2 h后基本不再改变。1HNMR图谱分析发现随着聚甘露糖片段,特别是M-M二聚体的降解,MG二聚体、GGM和MGM三聚体的量相应增多,表明该酶属于甘露糖裂解酶(EC 4.2.2.3)。     

Dietary supplementation with low molecular weight sodium alginate improves growth,haematology, immune reactions and resistance against Aeromonas hydrophila in Clarias gariepinus

A few studies have illustrated the effects of sodium salt derived from alginic acid on different fish species. However, little is known about the effect of sodium alginate on catfish (Clarias gariepinus). Therefore, this study was performed to assess the use of low molecular weight sodium alginate ( LMWSA) in C. gariepinus. A total of 180 apparently healthy C. gariepinus with a mean body weight of 45 g were randomly divided into three equal groups (D1, D2 and D3). D1 the control group received a control diet, while D2 and D3 received 1% and 3% LMWSA, respectively, for 8 weeks. A challenge test against Aeromonas hydrophila was performed on 15 randomly selected catfish for 15 days. At the end of the experiment, catfish in D3 that received a diet of 3% LMWSA showed significant increases in the final body weight, weight gain and thermal‐unit growth coefficient compared with those in D2 and D1. There was a significant decrease in the erythrogram in D1 after the 4‐day pathogen challenge. A leucogram revealed leucocytosis, heterophilia and lymphocytosis in catfish in D2 and D3 compared with those in D1. After the 4‐day challenge, the following changes took place: lysozyme, nitric oxide, phagocytic activity and the respiratory burst were significantly elevated in catfish that received LMWSA and were more pronounced in D3 than in D1. The mortalities of catfish have been stopped after pathogen challenge from 8‐day in D1 and D2 where at 6‐day in D3. Thus, administration of 1% and 3% LMWSA enhances the growth, immune response and resistance of C. gariepinus against A. hydrophila.     

多糖和益生菌对暗纹东方鲀免疫功能的调节

为了研究多糖、益生菌等免疫增强剂对暗纹东方的免疫调节作用,本试验随机将暗纹东方[(167.8±24.4)g]分为6组。其中阳性对照组为免疫功能低下组,投喂基础饲料、注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺;阴性对照组为免疫功能正常组,投喂基础饲料、注射生理盐水;其余试验组分别用含有0.2%壳聚糖、0.1%益生菌、甘露聚糖与益生菌混合物、壳聚糖与益生菌混合物的饲料连续投喂30d,同时注射8mg.kg-1体重的环磷酰胺。测定各组暗纹东方的外周血白细胞数量及吞噬活性、肝胰脏溶菌酶活性、头肾与脾脏淋巴细胞转化、头肾与脾脏IFN-α含量、头肾与脾脏IgM含量进行免疫功能的比较。结果表明,多糖和益生菌对免疫功能低下的暗纹东方具有免疫调节作用。所检测的各项免疫指标均有不同程度的恢复,或处于免疫功能正常与环磷酰胺所致免疫抑制水平之间,或恢复至正常水平或超过正常水平。不同免疫增强剂对同一种免疫器官、免疫细胞或免疫分子的调节作用或同一种免疫增强剂对不同的免疫器官或免疫细胞或免疫分子的调节作用均存在差异。从整体效果看,在所研究的4种免疫增强剂中,甘露聚糖与益生菌混合物的免疫调节作用最弱。