转sMTPGH基因小鼠胚胎的体外培养

采用纯化的羊金属硫蛋白 (s MT)启动子指导的猪生长激素 (PGH )基因 (s MTPGH)为显微注射片段 ,将其导入小鼠受精卵原核 ,比较了几种不同培养液对导入外源基因的小鼠胚胎体外发育的影响。结果表明 ,改进的 M16培养液(用 m M16表示 )能有效克服 2 -细胞阻断现象 ,并使转基因胚胎发育到桑椹胚或囊胚阶段。在 m M16培养液的基础上 ,再加入表皮生长因子 (EGF) ,可使 1-细胞胚胎发育到囊胚的比率进一步提高。在 3种培养液 (M16、m M16、m M16 EGF)中 ,转基因胚胎突破 2 -细胞阻断期的比率分别为 12 %、6 8%、90 % ,发育到囊胚期的比率分别是 0 %、2 0 %、4 3%。采用 PCR方法检测 5 7枚经体外培养发育至囊胚的显微注射胚胎 ,4枚扩增出阳性条带 ,外源基因在囊胚期胚胎的滞留率为 7%。     

小鼠超数排卵和小鼠胚胎体外培养的研究

本研究用PMSG与HCG对昆明白小白鼠进行超排。经t检验,PMSG与HCG注射时间间隔48h比50h排卵总数少（差异显著）,但两种方法的获胚胎数差异不显著。同时,用处于5％CO2和空气中的TCM199－HCO3^-,M199－HEPES培育液在简易培养条件下对受精96h的小鼠胚胎进行体外培养48h。经卡方（x^2）检验,得出在5％CO2中的M199－HEPES培养液培养效果最好。     

影响小鼠显微注射胚胎质量的若干因素

显微注射法是目前国际公认的制备转基因动物的首选方法，有重大的应用价值。保证显微注射胚的质量是转基因工作的关键。本文根据我们显微注射的工作，着重探讨影响小鼠显微注射胚的质量的几个关键因素。     

牛体外受精胚胎的体外培养研究进展

家畜体外受精（IVF）技术自上世纪八十年代获得成功以来，发展十分迅速，九十年代已进入试管胚的开发应用阶段。目前，IVF胚胎的质量与体内胚相比仍有很大差距。在进行IVF胚胎体外培养时，常会出现“体外发育阻断”现象，主要表现为细胞数较少、卵裂球形状不规则、存在死亡的细胞和细胞质碎片、发育速率和抗冻性降低以及酶活性和营养物摄取的改变等方面。近年来，为了克服胚胎体外发育所存在的某些缺陷，国内、外对不同动物的胚胎体外培养体系和培养方法进行了系统研究，取得了长足进展。本文就牛IVF胚胎体外培养方面的研究进展综述如下。     

动物胚胎体外培养研究进展

近年来动物胚胎体外培养取得了新进展.致密化前期胚胎利用葡萄糖作为能量底物的能力有限,但致密化后胚胎培养中葡萄糖的添加是必须的.自由氨基酸在早期胚胎的发育中是必需的,非必须氨基酸在致密化前发挥作用,致密化后期胚胎则需要所有氨基酸.血清对早期胚胎的发育有多重影响,BSA等一些生物大分子物质的配合添加可以取代血清的胚胎营养作用,并消除血清的负作用.在无血清培养液中,一些生长因子和细胞因子的加入是必须的.GSH等抗氧化物质添加进培养液可以对抗反应氧的作用,对胚胎发育起到保护作用.     

中药成分小檗碱对小鼠2-细胞胚胎体外培养及移植效果的研究

以添加抗菌素的mCZB液为对照组,筛选比较了中药有效成分小檗碱不同浓度对小鼠2-细胞胚胎体外培养效果的影响,并计数所培养的孵化胚胎细胞数目,观察中药有效成分对胚胎细胞数目增殖的作用;通过将体外培养发育的囊胚进行移植,进一步验证其对小鼠胚胎移植效果和产仔发育的影响。结果表明:小檗碱最佳浓度为0.10μg/mL,120h孵化胚胎发育率和孵化胚胎细胞数目(89.9%,83.7±9.10)极显著高于对照组(50.7%,69.5±7.14)(P<0.01);小檗碱组培养囊胚移植妊娠率(66.7%)和离窝成活率(55.8%)均显著高于对照组(50.0%,45.2%)(P<0.05),其组间产仔率、初产仔鼠平均体重、离窝小鼠平均体重无显著差异(P>0.05)。其结果说明,小檗碱对体外胚胎生长发育和细胞增殖有促进作用,对胚胎附植及初生仔鼠无不良影响。     

动物胚胎体外培养研究进展

近年来动物胚胎体培养取得了新进展，致密化前期胚胎利用葡萄糖作为能量底物的能力有限，但致密化后胚胎培养中葡萄糖的添加是必须的，由于氨基酸在早期胚胎的发育中是必需的，非必须氨基酸在致密化前发挥作用，致密化后期胚胎则需要所有氨基酸，血清对早期胚胎的发育有多重影响，BSA等一些生物大分子物质的配合添加可以取代血清的胚胎营养作用，并消除血清的负作用，在无血清培养液中，一些生长因子和细胞因子的加入是必须的，GSH等抗氧化物质添加进培养液可以对抗反应氧的作用，对胚胎发育起到保护作用。     

转GFP基因核移植牛胚胎的研究

试验采用脂质体转染法与电穿孔法,以携带绿色荧光蛋白(GFP)-新霉抗性(neo)双标记基因的pMSCV质粒转染胎牛耳成纤维细胞为供体与体外成熟的牛卵母细胞为受体构建克隆胚.研究了体外成熟培养液中添加EGF(表皮生长因子)对转基因胚的影响,不同转染方法构建供体细胞对重构胚发育的影响和在不同体外培养系统中的发育效果.结果显示,体外成熟培养液中添加EGF 30 ng/mL组的卵母细胞成熟率最高.但对后期转基因重构胚的囊胚发育率的影响,以添加EGF 20ng/mL组的最高;以胎牛耳成纤维细胞为供体细胞,不同转染方法转染供体细胞构建重构胚,其囊胚发育率差异不显著(P＞0.05);mSOFaa+颗粒细胞单层细胞共培养体系中的转基因囊胚发育率最好,该体系更适合体细胞核移植法生产转基因牛胚胎.     

影响小鼠转基因原核胚体我发育的若干因素

探讨了显微注射不同浓度的外源DNA以及温度、培养基等对小鼠原核胚体外培养发育能力的影响。显微注射1．5、15、30mg/L衰变加速因子（CD55）、膜反应溶解因子（CD59）基因后，小鼠原核胚发育到囊胚的比率随DNA质量浓度的升高而依次降低为57．7％、36．6％、10．4％，差异检显著（P＜0．01）。注射1．5mg/L外源DNA，原核胚的囊胚率（57．7％）比对照组（54．5％）稍有提高，但差异不显著（P＞0．05）。1．5mg/L为本试验最佳外源DNA注射质量浓度。37℃、CZB建立 或改进的Witten氏培养液，可取得较好的体外培养效果。     

乙醇激活诱导小鼠孤雌胚的发育与核型分析

注射ｈＣＧ１８～１９ ｈ 后收集的小鼠卵母细胞, ８５ ％ 以上可为乙醇所激活, 产生均质单倍体、嵌合单倍体、１ 个原核的杂合二倍体和２ 个原核的杂合二倍体４ 种激活类型, 且它们的比率分别为８１－４ ％ 、１０－５ ％ 、４－６ ％ 和３－５ ％ 。单倍体胚胎体外培养后有少数可发育至囊胚期。单倍体孤雌胚在８ 细胞期开始出现二倍体核型, 从而形成单倍体胚胎、单倍体 二倍体嵌合胚和二倍体胚胎。孤雌胚的核型中还出现较高比率的非整倍体。     

显微注射转基因用猪胚胎获得研究

本文从猪胚胎的体外成熟和体内成熟两方面对显微注射用猪胚胎的获取进行了初步研究。实验结果表明 ;超数排卵母猪的手术冲胚是获取显微注射用猪胚胎的最佳方法 ,该方法获得的胚胎数量多 ,质量好 ,转基因效率高。体外成熟法获得可供显微注射用猪胚胎的效率低 ,基因转移的总效率也很低。     

Production of Middle White Piglets after Transfer of Embryos Produced In Vitro

The present study was conducted to examine the feasibility of in vitro embryo production and transfer technologies for producing Middle White piglets. After collection from three retired Middle White sows, a total of 222 oocytes were matured, fertilized and cultured in vitro, and a total of 50 embryos from the 4-cell to blastocyst stage were produced by the 4th or 5th day. These embryos were transferred individually into three recipients along with 5 in vivo-derived Duroc blastocysts. All of the recipients became pregnant, and they farrowed a total of 9 Middle White and 9 Duroc piglets. These results suggest that in vitro embryo production using ovaries from retired sows is useful for reproduction of pigs of pure breeds including the Middle White for breeding activities and conservation/utilization of genetic resources.     

In Vitro Development of Bovine Embryos after Fertilization using Semen from Different Donors

Contents: The aim of this study was to determine whether the semen donor and/or heparin concentration influences the rate of fertilization of bovine follicular oocytes and their subsequent embryonic development in vitro. Frozen-thawed semen from five highly fertile bulls was treated with one of four concentrations of heparin (0.5,1.0, 2.0 and 5.0 μg/ml) on a 5 x4 factorial basis in an IVM-NF programme. Zygotes/oocytes were cultured in frozen-thawed bovine oviduct cell-conditioned medium for 6 days. The use of semen from different bulls resulted in significantly (P < 0.001) different rates offertilization, as judged by cleavage rates of the oocytes at 72 h post insemination, and subsequent embryonic development through the'8-cell-block'(P < 0.05) in vitro. Development up to the morula/blastocyst stage, however, did not differ significantly (P = 0.06) among groups of oocytes fertilized with spermatozoa from different bulls. Heparin levels ranging from 0.5 to 5.0 μg/ml did not differ in their effect on in vitro fertilization as judged by the rate of normally cleaved oocytes (P = 0.14). The overall parthenogenetic division rate at 72 h post insemination was 12.4% and was not influenced by the heparin concentration. There was a linear relationship (P < 0.001) between fertility estimates based on AI and the estimates basedon the first cleavage following in vitro fertilization.     

几种冷冻条件对牛体外受精卵发育率的影响

试验比较了乙二醇 (EG)、丙二醇 (PG)、二甲基亚砜 (DMSO)、甘油 (G)和不同的投液氮温度 (- 33℃或 - 4 0℃ )对牛体外受精卵冷冻后发育率的影响。结果 :投液氮温度无论是 - 33℃或 - 4 0℃ ,均以 1.5 mol/ L EG的冷冻效果为最好 ,与 1.5 mol/ L PG相比 ,受精卵的发育率差异显著 (39.7% vs19.2 % ;4 7.8% vs2 4 .7% ,P <0 .0 5 ) ;同 1.5mol/ L DMSO和 1.5 mol/ L G相比 ,受精卵的发育率差异极显著 (39.7% vs 16 .1% or 13.3% ;4 7.8% vs 19.2 % or17.3% ,P <0 .0 1)。 - 4 0℃投液氮 ,受精卵冷冻后的发育率略高于 - 33℃ ,但差异不显著 (P >0 .0 5 )。以 2 5 % EG 2 5 % PG作为细胞外玻璃化溶液对牛体外受精卵进行冷冻 ,冷冻后受精卵的发育率达 5 8.9% ,高于用 1.5 mol/ L EG冷冻在 - 4 0℃投液氮这一处理 (47.8% ) ,但无统计学上差异 (P >0 .0 5 )。然而 ,试验组冷冻后受精卵的发育率均极显著低于对照组 (80 .6 8% ,P <0 .0 1)。结果表明 ,投液氮温度以 - 4 0℃为较好 ,防冻剂以 EG的冷冻效果为最佳。玻璃化冷冻法完全可以应用于冷冻牛体外受精卵     

动物早期胚胎体外培养的研究进展

胚胎的体外培养是动物胚胎工程技术的基础环节之一,也是胚胎移植重要的前期基础。由于在体外培养过程中,早期胚胎对环境的变化较为敏感,导致早期胚胎发育到囊胚的成功率不高,因此,如何提高囊胚率是核心问题。就动物早期胚胎体外培养的培养环境、胚胎培养液添加物以及胚胎体外培养体系等方面的研究进展进行综述,同时对胚胎体外培养技术目前存在的一些问题进行了总结,并对其前景做了展望。