贵州地方辣椒抗疫病性鉴定

以30份贵州地方辣椒为试验材料,通过苗期灌根接种法接种辣椒疫霉菌混合游动孢子囊悬浮液,鉴定材料抗病性,并对辣椒果形与其抗病性的相关性进行了初步分析。结果表明:30份材料中抗性材料1个,中抗、中感及感病材料各9个,高感材料2个。初步分析结果显示辣椒果形与其抗病性不存在明显相关性。     

贵州部分辣椒品种对疫病的抗性鉴定

采用灌根法对34个辣椒区试品种进行了疫病苗期人工接种鉴定。结果表明:34个辣椒平中,高抗1个,抗性品种11个,中抗品种15个,感病品种7个,分别占鉴定总数的2.94%、32.35%、44.12%和20.59%。黄平线椒、贵椒1号、绥阳小米辣、贵椒3号、独山皱椒3号、H29、1001、137、87-2-3、党武辣椒、绥阳锥椒2号、独山线椒等辣椒品种对辣椒疫病有较好的抗病性。     

梅花杂种鉴定中SSR分子标记引物的筛选

利用SSR分子标记技术对以‘淡丰后’(或‘丰后’)为母本,分别与其他梅花品种及近缘种杂交的F1代及其亲本进行杂种鉴定。用47对从梅花近缘种(包括桃、李、杏、酸樱桃、甜樱桃)中已开发出的SSR引物和3对梅花EST-SSR引物对亲本进行SSR-PCR扩增,其中8对引物(aprigms18、BPPCT001、BPPCT002、BPPCT004、BPPCT034、UDP96005、UDP98409、PES16)对23个父本中的21个有稳定、特异扩增(相对于母本),包括12个梅花品种和9个近缘种,有效扩增率为91.3%。再用以上8对引物对10个杂交组合进行扩增,有6对引物(BPPCT001、BPPCT004、BPPCT034、UDP96005、UDP98409、PES16)能够初步鉴定出其中7个杂交组合中21个杂种F1代的真实性(父本分别为江梅、‘变绿萼’、‘白须朱砂’、‘小红朱砂’、‘辽梅’山杏、毛樱桃、‘寿红’桃),鉴别率为77.8%。证明梅花近缘种基因组SSR引物及梅花EST-SSR引物在梅花杂种鉴定中的适用性,拓宽了SSR分子标记技术在梅花杂交育种中的应用。     

辣椒种质疫病抗性鉴定及防治药剂的筛选

采用了游动孢子灌根法对70份辣椒材料进行了疫病抗性鉴定,结果表明：参试材料的抗病性存在较大差异,其中感病材料32份,中抗材料15份,抗病材料10份,高抗材料13份,VC42-1、VC48-1、线边H、中21×X8F等材料具有极高抗性。采用菌落直径法测定8种药剂对辣椒疫霉的毒力,结果表明,50％烯酰吗啉可湿性粉剂、68％精甲霜·锰锌水分散粒剂和64％噁霜·锰锌可湿性粉剂对菌丝抑制作用相对较强,其EC50值分别为0．1242,5．0630,8．0035μg/mL。对8种药剂的田间防治效果进行比较,结果表明,50％烯酰吗啉可湿性粉剂、68％精甲霜·锰锌水分散粒剂和72％霜脲·锰锌可湿性粉剂的防治效果最好。对比分析室内毒力测定和田间药效试验,筛选出可用于生产上防治辣椒疫病的2种药剂烯酰吗啉和精甲霜·锰锌,防治效果在70％以上。     

女贞ISSR分子标记的引物筛选

利用60个ISSR引物，对来自不同地域的12份女贞种质材料进行PCR扩增，筛选出12个多态性丰富、条带清晰且重复性良好的、适合于所有女贞种质材料进行ISSR分析的有效引物。筛选出的12个有效引物对12份女贞种质材料进行ISSR—PCR扩增，均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱，共扩增出228条DNA谱带，其中210条为多态性带，占总扩增带数的92．1％，平均每个引物扩增出19条谱带。本试验筛选的12条引物可以有效地应用于女贞种质资源材料的ISSR分析。     

辣椒疫病抗性位点的分子定位

为鉴定辣椒疫病抗性性状位点(QTL),开发抗病基因相关分子标记,实现辣椒抗疫病分子标记辅助选择育种,本研究以辣椒高抗疫病材料PI201234和高感疫病材料G29为亲本构建的F2群体为试验材料,采用游动孢子灌根法对6~8叶期的F2群体单株进行疫病抗性接种鉴定,同时利用EST-SSR标记对F2群体进行基因型分析。结果显示,构建了包含65个EST-SSR标记、总长度为418.6 c M的辣椒遗传连锁图谱;结合F2群体的疫病抗性鉴定结果,定位了位于N3连锁群EST451与EST191之间的抗病QTL,该QTL可解释表型变异率为14.9%。     

辣椒品种对疫病的抗性鉴定

辣椒疫病是辣椒疫霉菌(Phytophora capsici)引起的一种土传病害,为害较严重。为明确现有辣椒品种对疫病的抗性水平,采用游动孢子灌根法对36份辣椒品种进行疫病抗性鉴定,结果表明不同辣椒品种之间抗性差异较大,其中4个品种表现出高抗,3个品种表现抗病,5个品种表现中抗,24个品种表现感病。     

辣椒抗疫病材料的筛选

利用苗期接种法对国内外217份辣椒材料进行辣椒疫病的抗性鉴定和筛选,结果表明:不同辣椒种质材料之间的抗病性存在很大差异,幼苗发病率为0%～99%,病情指数为1.48～88.52,其中高抗材料有84份,占试材总数38.71%;抗病材料有57份,占总试材数的26.27%;感病材料有34份,其中8份来自国外2,6份来自国内。     

降香黄檀SRAP分子标记的引物筛选

采用改良CTAB法提取降香黄檀基因组DNA,选用4个降香黄檀DNA作模板,对256个SRAP引物组合进行筛选。以条带清晰、多态性丰富为引物筛选原则,最后共筛选出25个组合作为降香黄檀SRAP分子标记的核心引物,为后续SRAP分析提供依据。     

辣椒疫病接种鉴定方法的筛选

通过对三种辣椒疫病接种方法的比较，表明灌根接种法较适宜于辣椒抗疫病鉴定，同时用此方法对３０份辣椒进行了接种鉴定     

辣椒不同自交系对疫病的抗性鉴定

为了对辣椒抗疫病育种提供理论依据,采用人工接种方法对43个辣椒自交系进行了抗病性鉴定。结果表明,43个自交系的抗病性存在较大差异,其中,高抗有20个,抗病有6个,中抗有11个,感病有5个;牛角椒中ZN40、ZN6、ZN3、ZN44、ZN16、ZN13等自交系具有极高的抗病性,灯笼椒中ZD217、ZD215-2、ZN201、ZD202、ZD220等自交系具有极高的抗病性。     

大白菜软腐病抗性的分子标记筛选

本试验以抗、感软腐病的大白菜材料为亲本,以其F2代分离群体为试材,采用AFLP分析技术结合BSA分组法,以E2M3引物组合筛选出一个150 bp的与感病基因连锁的标记;利用获得的分子标记对F2代分离群体进行了分子鉴定。结果表明:分子标记与抗性鉴定结果具有很高的一致性,证实了所筛选出的标记基因应用于抗性鉴定的可行性。     

辣椒种质疫病抗性鉴定及SRAP分析

为科学评价辣椒种质资源,应用苗期人工接种鉴定方法和SRAP技术,对204份辣椒种质进行疫病抗性评价和遗传多样性分析。筛选出高抗和抗性材料各8份、中抗材料16份,感病材料172份;抗病材料占供试种质数的比例为15.69%,且主要来自我国南方地区。SRAP分析结果表明,20条引物组合共扩增出585条带,平均每个引物扩增出29.25条,多态性位点比例82.91%。204份材料两两不同种质间Jaccard相似系数0.413~0.996,平均为0.788。通过UPGMA聚类分析,以相似系数0.700为阀值,将204份种质分为7类,有25份抗病材料分布在第Ⅴ类和第Ⅵ类,占全部抗病材料的78.10%。     

辣椒疫病抗病性分子鉴定技术研究

根据辣椒疫霉菌(Phytophora capsiciLeonian)核糖体(Ribosome)基因及其转录间隔区(Internal transcribed spacer,ITS)序列设计两对引物,确定其中一对用于辣椒疫病抗病性的分子检测。用不同的辣椒品种进行接种,并设置不同的采样时间和部位,提取辣椒基因组和侵染到植株中疫霉菌的DNA,扩增后者的rDNA及其ITS序列。试验表明,在接种后24 h和48 h不能从辣椒叶片中检测到疫霉菌,而接种后24 h可从感病辣椒品种茎中检测到。接种后48 h均能从感病、抗病辣椒品种的茎中检测到疫霉菌,并且感病品种中疫霉菌的DNA的扩增量为100 ng,抗病品种中的为20 ng,前者是后者的5倍;辣椒品种N3中疫霉菌的DNA扩增量为77 ng,介于感病和抗病品种之间,更接近前者,因此该品种是感病的。     

贵州辣椒烟草花叶病毒的分子鉴定

为有效控制贵州辣椒的病毒,采用生物学单斑分离法对酶联免疫吸附(ELISA)检测烟草花叶病毒为阳性的贵州辣椒病毒分离物(TMV-GZ)进行纯化。RT-PCR技术克隆其外壳蛋白(CP)基因并测序,使用DNAMAN7.0和MEGA5.0软件对TMV-GZ的CP基因进行序列同源性分析。结果表明:成功克隆该病毒分离物的CP基因,其序列长度为480bp,编码159个氨基酸残基;该分离物的CP基因与11种已报道的TMV各地分离物同源性均在98%以上,而与其他3种同属不同种的病毒同源性均低于65%。贵州辣椒感染的病毒为TMV。     

芒果CDDP分子标记正交优化设计及引物筛选

以芒果基因组DNA为模板,选择正交设计试验对控制DNA保守序列多态性——聚合酶链式反应(CDDP-PCR)的4个因素(模板DNA浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Mg~(2+)DNA聚合酶用量)进行正交试验,构建了较佳的芒果CDDP-PCR反应体系,含0.50 U Mg2+DNA聚合酶、0.40 mmol·L~(-1)d NTPs、1.00μmol·L~(-1)引物、0.50 ng·μL~(-1)模板DNA,加双蒸水使得总体积达20.00μL.对比四因子对PCR反应的影响,影响最强的因素是含Mg2+的DNA聚合酶,影响最弱的因素是模板DNA.利用供试的20个芒果品种验证了该体系的稳定性和可行性,21条CDDP引物均可扩增出明晰整齐的条带.     

燕麦SCoT分子标记体系的优化及引物筛选

[目的]本研究对影响燕麦目标起始密码子多态性聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的4个因素(模板DNA、引物、Mix混合液用量及退火温度)进行了优化,并通过最优体系进行了多态性引物的筛选.[方法]以4份燕麦品种DNA为模板,采用L9 (33)正交试验确定模板DNA、引物、Mix混合液用量的最优反应体系,在48～ 54℃温...     

西瓜枯萎病抗性分子标记筛选与应用

西瓜是一种重要的园艺作物,经济效益显著,但枯萎病的发生严重限制了西瓜的生产。为了解决这一难题,利用简单、方便、实用性强的分子标记技术辅助选育抗性强的西瓜品种对于西瓜产业的优质发展具有重要意义。以父本sugarlee、母本伊选、F₁代、F₂代及F₃代遗传群体为材料,通过苗期接种鉴定,对父本的抗性遗传规律进行研究,发现父本sugarlee对枯萎病生理小种1的抗性遗传为单基因显性性状遗传;然后利用CAPS、InDel、SCAR、dCAPS和RAPD等多种分子标记技术,筛选了22个与西瓜枯萎病抗性基因相关的分子标记,获得了与西瓜枯萎病紧密连锁的抗性标记3个,分别为indel04、indel05、indel06,位于抗病基因的一侧,连锁距离分别为7.5、10.7、13.7 cM,将这3个分子标记对20份西瓜材料进行分子检测,结果与实验室接种鉴定的结果基本一致。结果表明,分子标记indel04、indel05、indel06可应用于西瓜材料枯萎病抗性的分子辅助选择,这对于西瓜的抗性育种具有重要意义。