辣椒离体再生体系研究

以5个辣椒（Capsicum annuum L.）品种（系）为材料,针对不同基因型、苗龄、外植体种类、激素组合等因素对辣椒植株离体再生的影响进行了较为系统的研究,从“农城椒2号”、“农城椒3号”、“0127”、“0159”、“0171”等5个辣椒品种（系）中筛选出“农城椒2号”、“0127”、“0171”3个再生能力较强的基因型。确定了辣椒离体再生最适外植体为子叶,最适苗龄为12~14d。筛选出高效不定芽分化培养基（MS＋3%蔗糖＋0.6%琼脂＋5.0mg/L BA＋0.5~1.0mg/L IAA）,其不定芽诱导率可达98%。诱导出的不定芽转入MS＋3%蔗糖＋0.6%琼脂＋3.0mg/L BA＋1.0mg/L IAA＋2.0mg/L GA3＋10.0mg/L AgNO3 芽伸长培养基,不定芽伸长率最高可达47.1%。不定芽伸长后在MS＋3%蔗糖＋0.6%琼脂＋0.2mg/L IAA＋0.1mg/L NAA生根培养基上诱导不定根。待其长成发达根系后移栽大田成苗,建立了辣椒高效植株再生体系。     

猕猴桃高效离体再生体系的研究

为建立猕猴桃高效离体再生体系,试验以猕猴桃离体茎尖和茎段作外植体,在初代培养诱导试管苗成功的基础上,分别以MS和1/2 MS为基本培养基,附加不同的激素组合,研究不同培养基对猕猴桃叶片和叶柄芽诱导的影响和对猕猴桃生根的影响。试验发现：在MS+1.0 mg•L-1 6-BA+0.1 mg•L-1NAA的培养基中培养,初代苗诱导成功、生长良好;在MS+2.0 mg•L-1 6-BA+0.1 mg•L-1 NAA的培养基中,叶片和叶柄芽诱导率分别为137.50％和512.50％;在1/2 MS+0.9 mg•L-1 IBA和1/2 MS+ 0.6 mg•L-1 IBA的培养基诱导生根效果好,总根长,平均根长以及生根数均高于其他4组处理的结果;以消过毒的珍珠岩和草炭土（3∶7）为炼苗移栽基质,猕猴桃组培苗的成活率达到80%。试验结果为猕猴桃繁殖推广奠定了基础。     

杜梨子叶离体再生体系的建立

为梨树品种改良、遗传转化及功能验证奠定基础,以杜梨(Pyrus betulaefolia)子叶外植体为试验材料,研究了基本培养基、植物生长调节剂、暗培养时间、碳源、外植体等因素对其再生能力的影响,筛选出适合杜梨不定芽分化的培养及生根培养条件,建立杜梨子叶的再生体系。结果表明,子叶诱导不定芽生长最佳培养基为NN69+6-BA5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖35g/L,再生频率为100%;出芽后最佳继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L,平均再生芽数4.84;诱导不定芽生根最佳培养基为1/2MS+IBA1.0mg/L+蔗糖30g/L,生根率为80%。通过上述条件的优化,建立了杜梨子叶高效的再生体系。     

马齿苋离体培养再生体系的建立

以马齿苋幼嫩叶片和茎段为试验材料,对外植体灭菌、愈伤组织诱导、不定芽分化和试管苗生根的最佳条件进行研究,以期建立马齿苋再生技术体系,并为马齿苋的规模化繁殖和遗传改良等研究奠定基础。结果表明,最佳外植体灭菌方法为：用0.1%的升汞溶液浸泡8 min;最佳愈伤组织诱导培养基为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L;最佳不定芽分化培养基为MS+6-BA 5.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L;最佳生根培养基为1/2MS+IBA 2.0 mg/L。     

百脉根离体再生体系的优化

本研究以百脉根叶片、叶柄、茎段、花柄和根组织为外植体,比较了它们在不同激素配比培养基中的愈伤组织、不定芽及不定根的分化情况,优化并建立百脉根组织培养再生体系。研究结果显示:除根外,其它组织均可通过组织培养获得再生植株;外植体类型是影响愈伤组织、不定芽及不定根诱导的主要因素,叶片外植体的诱导效果最好。优化的百脉根组织培养再生体系为:使用叶片外植体,愈伤组织诱导培养基为MS+3.0 mg/L 6BA+0.1 mg/L NAA、芽分化培养基为MS+0.3 mg/L KT、生根培养基为1/2 MS+0.4 mg/L IBA。通过该体系60~75 d可获得百脉根再生植株,约为无性繁殖周期的1/3~1/2。     

羊踯躅离体叶片再生体系的建立

为了建立羊踯躅规模化无性繁殖和高效遗传转化体系,以羊踯躅试管苗叶片为外植体,探讨了基本培养基类型、叶片切割方式、叶位、暗培养时间及不同激素组合等因素对叶片再生不定芽的影响。结果表明：WPM培养基为最适基本培养基。垂直于主脉切割一刀并去除叶柄和叶稍的叶片再生不定芽的频率最高。羊踯躅试管苗中、上部叶片的再生能力较强,其中第5和第6位叶的不定芽诱导效果最佳。初始暗培养有利于叶片再生,暗培养10~15天的效果最佳。诱导羊踯躅试管苗叶片再生不定芽的适宜培养基为WPM+TDZ 1.0 mg/L+IAA 1.0 mg/L,其不定芽分化率和平均分化芽数分别达到82.3%和7.2个。     

大丽花叶片离体再生体系的建立

为了建立大丽花高效遗传转化体系及解决今后通过植物基因工程选育新种质的问题,以大丽花为试材,研究光照条件、叶片生理状态、激素浓度等因素对叶片再生的影响,建立以大丽花离体叶片为外植体的高频再生体系。研究结果表明：以顶部充分展开的25天叶龄的无菌苗叶片为外植体,在含KT 7 mg/L+NAA 0.05 mg/L的MS分化培养基上,暗培养15天后转到光下培养,20天后开始有不定芽直接从叶片上分化产生,出现的高峰期在接种后30~35天,芽分化率最高可达86%,平均叶片再生芽位点数为5.0。待不定芽长至2 cm以上时,将其剪下转到生根培养基1/2MS+ NAA 0.1 mg/L上培养后得到生根的完整植株。     

油柿叶片离体再生体系的建立

以油柿叶片为材料开展了离体培养研究,旨在建立其再生体系,为转基因操作奠定基础。结果表明,油柿叶盘在MS（1/2N）+IBA0.1mg/L+ ZT3.0mg/L培养基上,经前期暗处理3周后移至正常光照下培养的再生效果最好,其不定芽再生率和外植体平均不定芽数最高,分别为80.5%和（4.1±0.8）个。再生苗接种于添加IAA和IBA各0.5mg/L的MS(1/2N)培养基上,4周时生根率可达92%,成功地建立了油柿叶片的离体再生体系。     

薄荷叶片离体再生体系的建立

本试验以薄荷试管苗叶片为外植体,研究了激素、光照、褐变抑制剂对不定芽诱导的影响,进而筛选出合适的生根培养基。研究结果表明:薄荷叶片最佳不定芽诱导的培养基为MS+1.4 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+5.5 g/L琼脂,诱导率达27.78%;暗培养20 d后再转接一次,叶片不定芽诱导率提高至64.29%,褐化率低至11.90%;最佳生根培养基为MS+0.1 mg/L NAA+20 g/L蔗糖+5.5 g/L琼脂,生根率达97.50%;再生苗经生根、炼苗后移栽,植株成活率达100%。本试验建立了薄荷叶片离体再生体系,为薄荷无菌苗生产和遗传转化研究提供了技术支撑。     

加工番茄离体再生体系的建立

以加工番茄‘亚心98-1’和‘里格尔87-5’2个品种的子叶作为外植体,研究不同激素组合对其出愈和诱芽的影响。结果表明,激素的种类和浓度对加工番茄外植体出愈率的影响没有差异,但是诱导形成的愈伤组织形态和不定芽存在差异,ZT与IAA组合对不定芽的诱导效果高于6-BA与IAA组合,不定芽诱导率最高的培养基为MS+ZT 0.5 mg/L+IAA 0.2 mg/L。品种之间存在差异,‘亚心98-1’比‘里格尔87-5’更易产生较高比率的正常芽。再生芽在1/2MS + 0.1 mg/L IAA生根培养基上能正常生根,并发育成完整的小植株。     

黄瓜离体器官再生体系的优化

优化通过器官直接再生方式的黄瓜离体再生体系,为遗传转化奠定基础。以‘长春密刺’黄瓜的子叶节为外植体,探讨在黄瓜再生过程中,适宜的无菌苗获得培养基、适宜的外植体类型、无菌苗的适宜苗态、不定芽诱导培养基和芽伸长培养基中适宜的激素组合与比例。结果表明,最适的无菌苗获得培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂(pH=5.8);不同外植体的再生率为子叶节>下胚轴>子叶;子叶完全出壳但未展平的无菌苗比其他苗态的再生率高,子叶展平后,再生率迅速下降;当6-BA（6-苄基氨基嘌呤）和ABA（脱落酸）浓度一定时,最适的AgNO₃为2 mg/L;当AgNO₃浓度一定时,6-BA和ABA浓度的最佳组合为1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA;不定芽诱导的最适培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L ABA+2 mg/L AgNO₃,出芽率为90%,每外植体出芽数为3.5;芽伸长培养基中加入0.10 mg/L 6-BA,能够促进再生芽的伸长。本研究成功优化了黄瓜的再生体系,得到了健壮的黄瓜成株。     

茄子高效离体再生体系的优化建立

为获得茄子高效再生体系,本试验以7份茄子材料的无菌苗子叶、下胚轴为外植体,研究了不同激素浓度配比以及不同基因型对茄子离体再生的影响。结果表明:子叶的再生效果优于下胚轴;下胚轴形态学上端再生能力显著高于形态学下端,下胚轴形态学上端出芽率为46%,出芽系数为1~3,下胚轴形态学下端出芽率为0;7份茄子子叶的最优愈伤和不定芽分化培养基均为MS+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,出愈率和出芽率均为100%;最优不定芽伸长培养基为MS+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂,伸长率可达93%;7份材料中,徐州长茄和成都墨茄子叶的再生频率较高,分别为0.93和0.73。本研究获得了较高的茄子再生频率,成苗迅速,为利用组织培养技术进行茄子种质创新提供了科学依据。     

姜薯高效离体再生体系的建立

为建立姜薯的高效离体再生体系,以姜薯的侧枝茎节为外植体,对影响植株离体再生的关键因素进行研究。结果表明,外植体最佳灭菌方式为75%乙醇消毒30s,结合0.1%升汞(加数滴吐温-20)浸泡11min;最佳初代芽诱导培养基为MS+0.8mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA,诱导率达80.0%;最佳继代增殖培养基为MS+1.2mg/L 6-BA,增殖系数达2.15;最适生根培养基为1/2MS+0.5mg/L NAA+0.2mg/L IBA+0.3g/L AC,培养30、50d后生根率分别达84.4%和98.9%;试管苗移栽于基质(珍珠岩:椰糠=1:1)后的成活率达80.0%以上;组培苗种植于大田,生长健壮,成功结薯。以侧枝茎节为外植体,经腋芽增殖,建立了姜薯高效离体再生体系,为姜薯的良种快繁、种质资源保存和品种改良打下了基础。     

乌菜高效离体子叶再生体系的建立

通过组织培养建立乌菜离体再生体系,可使优良珍贵育种材料得到保存,并能为其快速繁殖提供有效途径。本研究以4种不同基因型乌菜为材料,从外植体类型、基本培养基类型、植物生长调节剂配比、基因型及无菌苗苗龄等方面,对影响乌菜不定芽诱导的因素进行了研究。研究表明,7-1基因型乌菜5 d苗龄的带柄子叶外植体,在以MS为基本培养基(3%蔗糖+0.8%琼脂)添加4 mg/L 6-BA与0.5 mg/Lα-NAA的诱导培养基上进行诱导,不定芽诱导率可达85.56%。本研究对影响乌菜植株再生的多个因素进行了优化,建立了高效离体再生技术体系,为乌菜育种研究及其他生物技术研究提供基础。     

非洲菊花托离体再生体系的建立

以非洲菊花托为外植体,研究了6-BA、KT与IAA、NAA组配对不同基因型品种花托产生不定芽及继代增殖与生根的影响.结果表明,不定芽的诱导采用6-BA比采用KT效果好,10 mg/L 6-BA与0.5 mg/L IAA组配有利于不定芽形成;0.5mg/L 6-BA与0.02mg/LNAA或1.0 mg/L KT与0.1 mg/L NAA的组配有利于不定芽的增殖;0.2 mg/L NAA或0.5 mg/L IAA的培养基都有利于试管苗生根.非洲菊在快繁过程中,应通过调整激素的种类和配比,控制增殖倍数,降低变异率,提高芽苗质量.     

杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树（Populus.tomentosa Car）叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05~2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA 1.0mg/L与NAA 0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA3 0.1~0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L+GA3 0.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

百蕊草离体培养和植株再生体系分析

为了筛选出适合百蕊草阶段式培养的快繁方案,建立较为完善的百蕊草植株再生体系,为后期人工栽培和工厂化育苗提供技术支持.本研究以百蕊草(Thesium chinense Turcz)的茎、叶为外植体,研究不同浓度和种类的激素配比以及外源添加物组合对百蕊草阶段式培养的影响.结果显示,百蕊草愈伤组织诱导的最佳培养基为 MS+0...     

十里香茶离体培养及再生体系研究

为了保护珍贵的十里香茶树资源,掌握利于十里香茶的最优组培条件,本研究对十里香茶组培过程中外植体类型、消毒时间、培养基添加物及培养条件进行了筛选。结果表明,采用轻微木质化的带腋芽茎段经升汞消毒15 min,接种后暗培养5 d,MS+0.2 mg·L^-1 NAA培养基中添加3 mg·L^-1 PVP+2000 mg·L^-1 Vc或者6 mg·L^-1 PVP+3000 mg·L^-1 AC,可在低污染率的前提下将褐化率降为10%左右,一定程度上解决了茶树组培中褐化率高的难题;采用1/8 MS+1 mg·L^-1 IBA培养基有利于外植体生根且增殖迅速。本研究建立了十里香茶的无菌苗离体培养及再生体系,可通过组培手段对其进行大量繁殖。