牛α干扰素在新城疫病毒La Sota疫苗株中的高效稳定表达及抗病毒活性检测

研究在已有的新城疫病毒La Sota株反向遗传系统的基础上,利用新城疫病毒La Sota株作为表达载体,构建表达牛α干扰素(bovine interferon α)完整开放阅读框的全基因组质粒pFL-BoIFN α,转染BHK-21细胞获得表达牛α干扰素重组新城疫病毒.采用RT-PCR方法检测,证实收获的鸡胚尿囊液内的重组病毒含有相应外源基因.将重组病毒尿囊液经紫外线照射灭活新城疫病毒,利用表达绿色荧光蛋白的重组水泡性口炎病毒(VSV-EGFP)在牛肾细胞(MDBK)上测定rL-BoIFN α抗病毒活性,证实表达牛干扰素的重组新城疫病毒尿囊液能有效抑制VSV-EGFP在牛肾细胞上的复制,rL-BoIFNα接种SPF鸡胚所收尿囊液抗病毒活性高达2× 107 IU/mL.结果表明: 牛α干扰素在重组新城疫病毒rL-BoIFNα接种的SPF鸡胚尿囊液中获得良好表达,并具有高效而稳定的抗病毒活性.     

鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒试验

为证明鱼腥草抗新城疫病毒的作用效果,通过接种鸡胚方法,对病毒接种前、接种同时、接种后加药三种方式处理的鸡胚尿囊液血凝效价进行测定。结果显示,在三种不同的加药方式中,不同浓度的鱼腥草提取液都能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价;鱼腥草提取液和新城疫病毒同时注入鸡胚时,鱼腥草原液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液于新城疫病毒接种后注入鸡胚时,2倍稀释液抗病毒效果最好;鱼腥草提取液先于新城疫病毒注入鸡胚时,4倍和8倍稀释液抗病毒效果最好。结果表明,鱼腥草提取液能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖;鱼腥草提取液在鸡胚内抗新城疫病毒活性与其加药方式及浓度有关。     

表达绿色荧光和红色荧光蛋白重组新城疫病毒的构建

试验旨在探究以新城疫病毒为载体进行多联疫苗的构建。通过将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因和红色荧光蛋白(Ds Red)基因用T2A肽串联后克隆入嵌合新城疫病毒AI4-2FHN的P和M基因之间,获得重组质粒p AI4-2FHN-GRFP。该质粒与p CI-NP、p CI-P和p CI-L 3个辅助质粒共转染至稳定表达T7 RNA聚合酶的BSR细胞后,获得可同时表达绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白的重组新城疫病毒。拯救病毒在SPF鸡胚中繁殖传代,通过RT-PCR验证,并检测重组病毒的生物学活性和外源蛋白的表达效率。结果显示:重组病毒在鸡胚内传3代后,鸡胚尿囊液HA效价稳定在8 log_2,感染细胞24 h、36 h、48 h后在荧光显微镜下观察到EGFP与Ds Red的荧光亮度逐渐增强,且相同时间内红色荧光蛋白与绿色荧光蛋白表达量相似。重组病毒的构建为新城疫病毒作载体用于多联多价疫苗的研发提供了参考。     

金银花不同器官提取液抗鸡新城疫病毒效果研究

为了研究金银花不同器官(花、叶、茎)提取物的抗鸡新城疫病毒效果,试验制备了金银花不同器官提取液,在给SPF鸡胚接种鸡新城疫病毒前、接种后、接种同时接种金银花不同器官提取液,收取鸡胚尿囊液测定其血凝效价。结果表明:在3种不同的加药方式中,金银花不同器官提取液均能有效降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,且作用效果与提取液浓度呈正相关。金银花不同器官提取液的抑制效果为:花茎叶。说明金银花不同器官的提取液均能够抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖,其抑制效果与金银花的不同器官提取液加药方式和浓度有关。     

鸽新城疫病毒中等毒力株感染的实验室诊断

将临床初诊为新城疫的送检病鸽组织匀浆 ,接种SPF鸡胚。用致死鸡胚的尿囊液做血液凝集试验 ,并用鸡新城疫阳性血清进行血凝抑制试验。结果含毒尿囊液的血凝反应可以被新城疫阳性血清抑制 ,鸡胚半数感染剂量 (EID50 )为 1 0 - 3/ 0 1mL ,鸡胚平均死亡时间 (MDT)为 72 8h ,证明所分离的病毒为具中等毒力的鸽新城疫病毒     

重组鸡α-干扰素对新城疫病毒复制的影响

毕赤酵母表达鸡α-干扰素经纯化后,以50000U、5000U和500U分别与200ELD50新城疫病毒疫苗株LaSota和中等毒力Q株等量混合,接种9～10日龄SPF鸡胚,记录鸡胚死亡情况并测定尿囊液HA效价,结果表明,高浓度重组干扰素可使病毒致死鸡胚时间延长,并使Q株在尿囊液中的HA效价下降2～3个滴度。     

新鱼腥草素钠对新城疫病毒复制与抗体消长规律的影响

为了研究新鱼腥草素钠对新城疫病毒的作用效果及其对新城疫病毒抗体消长规律,试验采用不同浓度的新鱼腥草素钠与新城疫病毒活疫苗接种鸡胚的方法,以鸡胚尿囊液血凝效价判断新鱼腥草素钠体外对新城疫病毒复制效果,同时用新城疫病毒活疫苗(La Sota株)和新鱼腥草素钠免疫黄羽肉鸡,于免疫前及免疫后第14,21,35,42,49天分别采血检测血清中新城疫血凝抑制(HI)抗体。结果表明:不同浓度的新鱼腥草素钠能够降低新城疫病毒感染鸡胚尿囊液的血凝效价,抑制新城疫病毒在鸡胚尿囊液中的增殖,其中以200 mg/L浓度抗病毒效果最好。说明一定剂量的新鱼腥草素钠与新城疫疫苗联合使用可降低HI抗体消长规律,从HI抗体水平来看亦能保护整个肉鸡生长周期,但与其给药浓度有关。     

表达双基因的重组新城疫病毒载体的构建

为了构建表达双外源基因的重组新城疫病毒载体,试验采用分子生物学方法对重组新城疫病毒进行了研究。通过反向遗传学操作构建并拯救表达双基因的重组新城疫病毒[r Clone30-EGFP(NP/P)-RFP (P/M)];用重组新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞并绘制生长曲线;通过免疫荧光试验检测重组新城疫病毒感染HepG2细胞后荧光蛋白的表达情况。结果表明:试验成功构建并拯救了表达双基因的重组新城疫病毒;重组新城疫病毒的生长动力学与亲本病毒相似,差异不显著(P0. 05);重组新城疫病毒能够在HepG2细胞中稳定表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和红色荧光蛋白(RFP)。说明重组新城疫病毒感染HepG2细胞后可稳定表达双外源基因。     

中药大黄体外抗新城疫病毒活性试验

为了筛选出有效的防治新城疫的中草药,采用鸡胚接种试验,对大黄煎煮液的体外抗新城疫病毒活性进行了测定,结果表明,中药大黄在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。     

中药虎杖体外抗新城疫病毒活性试验

为了筛选出有效的防治新城疫的中草药,采用鸡胚接种试验,对虎杖煎煮液的体外抗新城疫病毒活性进行了测定,结果表明:中药虎杖在体外对新城疫病毒具有较好的抑制作用。