基于PCR的植物病毒检测技术研究进展

植物病毒是引起植物重大病害的病原之一.植物病毒病危害大、防治难度高,一旦感染病毒终生携带,而早期的检测成为病毒预防及治理的先决条件.基于基因扩增技术的病毒检测方法,由于检测迅速、敏感性高、成本低等优点而被广泛应用于各种病毒的检测.本文对常用的基于PCR的病毒检测方法进行了综述,并对其优缺点进行了比较,以期为选择合适的植...     

马铃薯检疫性病毒的分子生物学检测技术进展

综述了包括RT-PCR、NASH、dsRNA分析、PCR微量板杂交、NASBA、DIAPOPS、LCR等在内的分子生物学技术在马铃薯病毒检疫中的应用.为快速、准确地定性或定量检测马铃薯检疫性病毒,检测时应根据不同的实验条件、检测目的和检疫要求采用相应的方法.     

A蛋白斑点免疫金染色和双抗体夹心酶联检测齿兰环斑病毒的比较

A蛋白斑点免疫金染色检测齿兰环斑病毒提纯病毒的灵敏度为1.56 ng/μl,检测病汁液的稀释倍数为640倍.同时采用碱性磷酸酯酶标记抗体IgG.IgG包被酶联板的浓度为1 μg/ml,酶标抗体以1 /1000稀释使用.DAS-ELISA技术检测ORSV提纯病毒的灵敏度为0.048 ng/μl,检测病汁液的稀释倍数为20480倍.     

用A蛋白免疫电镜快速检测几种蔬菜作物的两种杆状病毒

 应用A蛋白免疫电镜技术对几种蔬菜作物的长叶车前草花叶病毒(RMV)、烟草花叶病毒(TMV)的检测比常规的电镜负染技术至少要灵敏近10,000倍,比普通的免疫电镜技术要灵敏10~100倍,抗血清浓度稀释至400,000倍,病毒粗提液稀释到1,000,000倍或病毒提纯液浓度为2.5×10^-7 mg/ml时均能观察到病毒粒子。同时由于抗体分子能特异性地结合到病毒粒子表面,能够很容易地区分不同的病毒种类。
应用此项技术作者检测了杭州地区几种常见的蔬菜病毒病,对大白菜(Brassica campestris L.),蕃茄(Lycopersicum esculentum Mill),榨菜(Brassica juncea var.tsatsai Mao),雪里(Brassicajuncea var.multiceps Tsen et Lee)等作物发病期的叶或果的浸提液用A蛋白免疫电镜进行快速检测,结果在大白菜,番茄等病株上检测到较多的病毒粒子,且大多能被RMV抗血清修饰,同时在番茄病株检测到的少量病毒粒子亦能被TMV抗血清修饰,而榨菜及雪里等病株上检测到的病毒粒子很少能被RMV及TMV抗血清所修饰,另外,病毒粒子的含量以番茄病果中为最高,要比其它几种蔬菜作物叶子中高约10~30倍。     

侵染昆明玫瑰的李坏死环斑病毒的鉴定及其分子检测

采集昆明地区种植的花叶症状明显的玫瑰样品,运用现代分子生物学技术与常规技术相结合的方法,初步鉴定引起玫瑰花叶病的主要病毒病原为李坏死环斑病毒.该病毒引起玫瑰植株的系统花叶、畸形和皱缩等症状;电镜下病毒粒体为球形,直径为22～23nm;ELISA检测发现该病毒在植株芽、花粉和顶部叶片的浓度最高;同时,根据外壳蛋白的保守区利用Primer 5.0设计该病毒的特异引物,对该病毒进行分子检测,得到450bp的预期DNA片断,并在此基础上,进行了巢式RT-PCR的分子检测,表明巢式RT-PCR的检测能力最强.并通过序列的同源性分析得知该病毒的外壳蛋白与已知PNRSV的同源性为98.0%,进一步证明了该病毒为李坏死环斑病毒.     

斑点免疫金和免疫金/银染色法检测烟草环斑病毒

在硝酸纤维素膜上进行的斑点免疫胶体金检测烟草环斑病毒技术已经建立.免疫金染色检测提纯病毒的灵敏度为25ng,检测病汁液可稀释10倍.使用免疫金/银染色则灵敏度更进一步提高.     

盆栽文心兰上的凤仙花坏死斑病毒的检测与分子鉴定

应用酶联免疫吸附检测法(ELISA)和RT-PCR技术从表现有同心圆褪绿斑的进境盆栽文心兰上检测出凤仙花坏死斑病毒.ELISA检测发现该病毒在文心兰上分布不均匀,病毒主要集中在表现症状的病斑处.同时,根据该病毒S RNA上的核衣壳蛋白(N)基因序列保守区设计了一对特异性引物,利用RT-PCR方法检测得到500bp的预期DNA片段.经HindⅢI和EcolI酶切验证后克隆了该序列片段,序列分析结果表明该病毒的N基因序列和已经发表的凤仙花坏死斑病毒(登陆号为AB109100、AB207803、DQ425096)核苷酸序列同源性为99%,进一步确认进境盆栽文心兰上携带凤仙花坏死病毒.这是INSV首次在中国的报道,也是第一次在文心兰上发现该病毒.     

国家种质广州甘薯圃病毒种类鉴定及分析

为明确引起国家种质广州甘薯资源圃中病毒病的病毒种类及优势种,为甘薯种质安全保存提供支持,2017年从甘薯资源圃中未脱毒更新的盆栽苗和大田苗中采集155份具有不同病毒病症状的甘薯资源样品,利用PCR和RT-PCR检测技术对这些样品进行了17种病毒的分子检测.155份样品均有病毒检出,包括甘薯羽状斑驳病毒Sweet pot...     

侵染唐菖蒲和百合3种病毒的多重RT-PCR检测方法

本文针对侵染百合和唐菖蒲的南芥菜花叶病毒、百合无症病毒和菜豆黄花叶病毒,建立了同时检测3种病毒的多重RT-PCR检测方法.该方法根据上述3种病毒保守的衣壳蛋白基因序列,设计特异性引物,优化了反应条件.通过对9种不同寄主和6种病毒的检测,验证该检测方法具有很高的特异性、稳定性,其灵敏度为植物总RNA稀释101～102倍.特别是,该方法缩短了检测周期,适合于植物病毒快速检测工作的需要.     

应用免疫电镜技术检测马铃薯病毒

用免疫电镜技术检测田间有病毒症状的马铃薯叶片证实带有马铃薯 Y 病毒,马铃薯 X 病毒,马铃薯 S 病毒和苜蓿花叶病毒。用免疫电镜技术检测田间健株和人工茎尖培养的脱毒苗证明健株和脱毒苗都有部分是带毒的,只是其含毒量很低。用免疫电镜技术检测马铃薯薯块证实,用此方法可检测已萌发的单个小芽以及未萌发的休眠芽。同时证明有病毒病症状的病株,其地下薯块多数是带毒的;另同一薯块,病毒在各个芽眼之间的分布也是不均一的。