研究苏云金芽孢杆菌毒素作用的新思路

苏云金芽孢杆菌对多种昆虫具有特异毒杀作用,虽然对其作用机理有了一定的了解,但对昆虫随之出现的抗性研究还很不深入。利用秀丽隐杆线虫这种模式动物并结合基因芯片技术和基因组学研究,为详细了解苏云金芽孢杆菌毒素的作用机理、昆虫对毒素的抗性机理和研究更加高效的生物杀虫制剂提供了新的思路。     

苏云金芽孢杆菌研究和开发的最新动向

第六届国际无脊椎动物病理学和微生物防治学术讨论会、第二届国际苏云金芽孢杆菌会议和第二十七届无脊椎动物病理学会年会于１９９４年８月２８日至９月２日在法国Ｍｏｎｔｐｅｌｉｅｒ召开。有５５个国家的５８０多人出席了会议，共收到学术论文近６００篇，出版了两卷论...     

苏云金杆菌蜡螟变种制剂毒力的离体生物测定

用碱和酶相继降解苏云金杆菌蜡螟变种制剂,然后作用细胞,能使细胞发生病变直至死亡。结果显示制剂浓度和细胞死亡率成良好的线性关系,经过5次平行实验证明,离体生测与活体无显著差异,可以用离体生测代替活体生测。     

苏云金芽孢杆菌毒素受体鞘糖脂的研究进展

鞘糖脂(Glycosphingolipids, GSLs)是一类以神经酰胺为母体,由神经酰胺的1-位羟基被糖基化而成的糖苷化合物,参与细胞膜脂筏的构成,影响脂筏结构致密,保证细胞膜结构的稳定性和强度,同时GSLs还参与细胞膜上信号转导,启动信号传递。GSLs作为苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, Bt)杀虫晶体蛋白受体之一,影响靶标生物对Bt毒素的敏感性。GSLs首先通过特异糖基结构被Bt毒素识别,然后引导毒素插入靶标生物细胞膜,导致靶标生物中肠穿孔,最终死亡。综述了GSLs的分类及其在生物体内的分布与功能、GSLs结构的分析方法、GSLs与Bt毒素的关系以及参与GSLs合成的相关糖基转移酶等相关研究进展。     

粘虫幼虫对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体低度敏感的机理探讨

比较了粘虫和家蚕对苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种菌株ＨＤ┐１的伴孢晶体在幼虫中肠液中的体外活化过程。ＳＤＳ┐ＰＡＧＥ结果表明,伴孢晶体或溶解的１３０ｋＤａ原毒素在粘虫中肠液中活化后形成的毒性肽的浓度比家蚕低,原因是１３０ｋＤａ原毒素在粘虫中肠液中发生了过度降解。蛋白酶活性检测结果表明,粘虫中肠液中含有较高的蛋白酶活性。     

苏云金芽孢杆菌LSZ9408虫体复壮的研究

本研究利用敏感寄主小菜蛾Plutella xylostella L.进行苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis Berliner LSZ9408的虫体复壮。试验结果表明通过小菜蛾虫体培养1次和2次后, LSZ9408的产晶率由0.0%分别提高至25.8%和39,4%,对小菜蛾72h的毒力由42.7%分别提高至83.4%和100.0%;经过发酵培养基的筛选,培养2代产晶率又可提高至49.7%;经70L发酵罐发酵48h时,活芽孢数可达54.5×108cfu/ml。     

转苏云金杆菌毒蛋白基因水稻抗螟性的离体叶片测定法

提出了转苏云金杆菌ｃｒｙｌＡｂ基因水稻抗螟性的快速离体叶片测定法,并用该方法评价了转ｃｒｙ１／Ａｂ基因水稻对二化螟、三化螟和大螟的抗性程度。结果表明,３种螟虫蚁螟取食纯合株系ＰＲ１６及分离株系ＰＲ１８、ＰＲ５７或ＰＲ５８中抗性植株中片后,食叶量与对照和分离株系中的非抗性植株相比极显著下降,接虫后第４ｄ的幼虫死亡率高达１００％。该方法评价转ｃｒｙ１／Ａｂ基因水稻对３种螟虫的抗性结果与活化成株测定法评     

苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用

本文简要综述了苏云金杆菌(Bt)芽孢的杀虫作用。讨论了Bt芽孢和晶体之间的增效作用,芽孢孢衣蛋白和晶体蛋白的同源性,芽孢孢衣蛋白的杀虫活性以及芽孢杀虫的可能机制。     

化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响

研究了7种常用化学杀虫剂对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体的影响及作用,结果表明,常用浓度下,2.5%溴氰菊酯乳油、48%毒死蜱乳油对苏云金杆菌芽孢及伴胞晶体无影响,可与苏云金杆菌制剂事先做成混剂;4.5%高效氯氰菊酯乳油、2.5%高效氯氟氰菊酯乳油、20%灭多威和40%辛硫磷在短时期内对芽孢及伴胞晶体无明显影响,可与苏云金杆菌制剂现混现用;80%敌敌畏乳油(500倍稀释)对苏云金杆菌伴胞晶体有明显损伤作用,不宜与苏云金杆菌制剂混合使用。     

苏云金杆菌制剂毒素蛋白定量分析

本文研究了苏云金杆菌制剂中毒素蛋白的 SDS- PAGE-洗脱比色定量分析方法。B.t.样本用 Na OH溶液处理 ,然后加 L aemmli缓冲液处理 ,离心 ,取上清液进行电泳。用考马斯亮兰 (CBB) R- 2 50染色后 ,刮下130 KD-毒素蛋白区带 ,用吡啶洗脱蛋白吸附的 CBB R- 2 50 ,于 6 0 5nm测定溶液的吸光度 ,间接对毒素蛋白进行定量。本方法准确度高、精密度好。 RSD在 5%左右。添加回收率介于 94 .6 %～ 99.2 %。本方法与 SDS-PAGE- TL C-扫描法结果相比没有显著差异。 130 KD-毒素蛋白的量与生物测定得到的效价之间也具有较好的相关性。     

菜青虫感染B.t.(HD-1)乳剂后的组织病理观察

用光学显微镜观察了青菜虫感染B.t.乳剂(湖北省农科院研制)后的组织病理变化。在30℃条件下,感染后2小时,中肠上皮细胞膨大,形成空泡;4小时以后,空泡进一步扩大,细胞质开始解体,8小时后,细胞完全崩溃脱落;感染后10小时,基底膜出现破裂,血腔中其他组织亦遭破坏,进而引起幼虫死亡。所得结果,与前人用其它昆虫试验结果基本一致。     

苏云金素与苏云金杆菌芽孢晶体混剂对小菜蛾的增效作用

将苏云金素和苏云金杆菌的孢晶制剂分别作为单一制剂，用混和饲料感染法在室内测定苏云金素分别与苏云金杆菌ＨＤ－１、ＣＴ－４３、８１－６、ＷＰ－２等４个菌株孢晶制剂的混剂对小菜蛾幼虫的协同作用。按Ｓｕｎ－Ｊｏｈｎｓｏｎ毒力指数法计算结果表明，苏云金素对所有供试菌的孢晶制剂都有增效作用，共毒系数从１２７．４３至４１５．６２不等。当混剂以芽孢晶体为主要活性组分，苏云金素占全部活性组分的１６．７％情况下增效作     

酶联免疫吸附测定(ELISA)检测苏云金杆菌伴孢晶体蛋白质研究

用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Bt伴孢晶体毒素蛋白质,最低可检值7.79ng/0.15ml,灵敏、精确,具高度专化性。测定标准品HI—1—S—1980和Bt乳剂产品中伴孢晶体蛋白质含量,分别为108.06mg/g粉剂和4.57—6.17mg/ml乳剂。用标准品与待测样品(Bt乳剂)的晶体蛋白质含量,就可计算出待测样品的相对毒力效价。ELISA与昆虫生测之间有良好的相关性。     

三种苏云金芽孢杆菌晶体蛋白火箭免疫电泳的研究

本文以火箭免疫电泳技术检测HD—1、81—6、187三种苏云金芽孢杆菌的晶体蛋白,结果表明:这种方法可以快速、特异性地检测晶体蛋白的含量。在抗血清浓度为3％的凝胶上抗原抗体所形成的免疫沉淀线峰高与晶体蛋白的浓度呈明显的线性关系。本文还就火箭免疫电泳沉淀线峰高与一些条件的关系进行了讨论。     

稻纵卷叶螟感染苏云金杆菌后的组织病理观察

采用石蜡组织切片法,观察了稻纵卷叶螟5龄幼虫感染苏云金杆菌后中肠的组织病理变化。感染2小时,幼虫中肠无明显变化;6小时,上皮细胞出现少量空泡;10小时,空泡数量增多;22小时,中肠出现溃烂现象。感染致死的虫体,中肠完全溃烂,但肠腔内含物不渗入体腔。     

球形芽孢杆菌(Ts—1)在水体中消长动态以及对蚊幼虫的残效

本实验观察了球形芽孢杆菌(Ts—1)在清水和污水中细菌和芽孢数量消长动态和残效。在水体中,细菌和芽孢均以指数函数衰减。污水对Ts—1生长存活无害,但对致倦库蚊幼虫残效期较清水中为短。水体中死亡虫体对保持球形芽孢杆菌的残效有重要作用。     

枯草杆菌B034拮抗物质及其内源质粒的研究

 枯草杆菌(Bacillus subtilis) B034是从水稻叶面分离的植物病原细菌拮抗菌,对水稻白叶枯病菌,水稻细条病菌有较强的抑制作用。(NH₄)₂SO₄饱和沉淀粗提液经Sephadex G-100柱层析所得的3个洗脱吸收峰中有两峰具较强的抑菌活性。此拮抗物抗热,对胰蛋白酶敏感,对蛋白酶K、E部分敏感。B034菌株内含有一稳定的大小约8kb的内源质粒。质粒消除后,其拮抗活性也随之消失。用穿梭质粒pMK4的XL1-Blue中对其EcoR Ⅰ酶切4片段分别进行了克隆,并转化到无拮抗活性的Bacillus DB104中,片段Ⅱ+Ⅲ显示了部分的拮抗活性。     

不同生长期蔬菜叶片对Bt制剂生物测定结果的影响

在室内用蔬菜叶片浸渍苏云金杆菌药液测定对小菜蛾的ＬＣ５０试验结果指出，供试蔬菜的生长期对测试结果有明显的影响。用营养生长旺盛期的菜叶，所得的ＬＣ５０值比营养生长末期的菜叶高出４倍左右，差异显著。因此，用叶片浸渍法测定药液毒力，提供生长期标准一致的植物是保证试验准确性的必要条件