野生樱桃李对南方根结线虫的抗性

为探明野生樱桃李对南方根结线虫的抗性,以实生钵苗为试材,采用人工接种等方法,研究了野生樱桃李对南方根结线虫的抗性。结果表明：接种后30d,根中雌成虫数量占接种量的0.5%,依据抗性评价标准判定其高抗南方根结线虫;野生樱桃李对南方根结线虫的抗性存在显著的株间分离现象,表现为免疫、高抗、中抗和低抗4种类型,分别占群体总量的30.0%、52.5%、13.8%和3.8%;根内线虫数量为接种量的1.7%,雌成虫数量占根内线虫总数的29.4%,表明野生樱桃李对南方根结线虫具有极强的抗侵入作用和很强的抗发育作用,抗侵入是野生樱桃李对南方根结线虫的主要抗性机制。野生樱桃李是优异的抗南方根结线虫种质资源。     

新疆野生樱桃李过敏性反应及其对南方根结线虫的抗性

以新疆野生樱桃李(Prunus sogdiana Vassilcz.)扦插苗为试材,接种南方根结线虫(Meloidogyne incognita)鉴定其抗性,并对抗病机理进行初步分析。结果显示:新疆野生樱桃李抗病植株发生过敏性(HR)反应,在接种后1d根系就出现典型的HR反应,并且在线虫周围细胞中发生HR反应的比例始终高于感病植株。在抗性植株发生HR反应的同时其体内大量产生过氧化氢,尤其在接种后1~2d过氧化氢和超氧阴离子的积累快速增加,这与HR反应特征基本一致。在接种南方根结线虫后,抗病植株中的VAD1和PO2表达均高于感病植株,说明新疆野生樱桃李抗南方根结线虫的机制在于侵染后首先引起过氧化氢和超氧阴离子的上升,进而产生HR反应限制了巨细胞的发育,使线虫得不到足够的营养而发育受阻,导致不能形成根结。同时VAD1和PO2基因表达上调可能启动抗病反应,从而使植株产生抗性。     

南方根结线虫诱发新疆野生樱桃李形成的根结形态和发育

以新疆野生樱桃李(Prunus sogdiana Vassilcz.)扦插苗为试材,通过人工接种南方根结线虫(Meloidogyne incognita)鉴定其抗性,同时对抗病与感病单株在接种后的酶活性变化以及根结的形成发育过程进行了研究.结果表明:新疆野生樱桃李对根结线虫抗性发生分离,大部分单株表现为感病,只有28％单株表现为抗病,并且其抗性与本试验室之前克隆得到的抗根结线虫相关基因psoRPM1的表达存在着相关关系.接种根结线虫后CAT、POD酶在抗病植株中的活性高于感病植株,说明它们可能参与了抗根结线虫的生理过程,而PPO和PAL活性则在接种后7～14日抗病植株高于感病植株,之后在两者之间差异不大.接种根结线虫后线虫由皮层进入中柱,并在10 d时观察到形成了大量多核的巨型细胞,随后巨型细胞经过发育到接种后22 d可观察到根系开始出现明显的根结.接种后30 d观察到巨型细胞出现空洞.     

7个番茄品种对北方根结线虫的抗性

采用室内病土盆栽接种法鉴定了7份番茄品种对北方根结线虫的抗性。结果表明,根据根部根结表型判定,供试品种中等7个品种中只有中疏四号表现中抗;松田粉洋洋表现高感;其余均为抗病品种。根据综合性状隶属函数值判定,康娜卡姆F1和中蔬四号有较好抗性,这与根部根结表型判定的结果存在一定差别,但总体抗病排名保持一致,表明利用多种方式相结合进行评价更为科学。     

毛樱桃对花生根结线虫的抗性研究

以实生钵苗为试材,采用人工接种、根系次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了毛樱桃对花生根结线虫的抗性。结果表明:花生根结线虫的接种侵入率1.4%,根中雌成虫数量占接种量的0.3%,依据有无根结和雌成虫数量占接种线虫数量的百分比判定其高抗花生根结线虫;毛樱桃实生群体对花生根结线虫的抗性具有显著的株间分离现象,存在免疫、高抗和中抗3种抗性类型,3种抗性类型个体分别占群体总量的5.0%、86.7%和8.3%。毛樱桃对花生根结线虫具有极强的抗侵入与抗发育能力,是优异的抗花生根结线虫桃树砧木种质资源。     

东北山樱桃对三种主要根结线虫的抗性评价

为评价东北山樱桃抗根结线虫种质资源价值,以实生钵苗为试材,采用人工接种等方法,研究了其对南方根结线虫,北方根结线虫和花生根结线虫的抗性。结果表明:接种后30d,南方根结线虫的侵入率为0.40%,根内雌成虫数量占接种总量的0.16%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗南方根结线虫;北方根结线虫的侵入率为1.20%,根内雌成虫数量占接种总量的0.80%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗北方根结线虫;花生根结线虫的侵入率为0.82%,根内雌成虫数量占接种总量的0.60%,依据抗性评价标准判定东北山樱桃高抗花生根结线虫。其对3种根结线虫的抗性均存在显著的株间分离现象,均分离为免疫、高度抗病、中度抗病3种类型,对南方根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的16.0%、80.0%和4.0%;对北方根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的2.0%、68.0%和30.0%;对花生根结线虫免疫、高度抗病、中度抗病型植株分别占群体总数的6.0%、78.0%和16.0%,东北山樱桃是优异的抗南方、北方和花生根结线虫砧木和种质资源。     

毛桃对北方根结线虫的抗性研究

以实生钵苗为试材,采用人工接种、根系次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了毛桃对北方根结线虫的抗性。结果表明:毛桃的根结指数为24.67,接种侵入率2.6%,根中雌成虫数量占接种量的0.16%,依据有无根结和雌成虫数量占接种线虫数量的百分比标准判定其高抗北方根结线虫;毛桃实生群体对北方根结线虫的抗性具有显著的株间分离现象,免疫、高抗和中抗3种基因型个体分别占13.3%、80%和6.7%。毛桃对北方根结线虫具有极强的抗侵入与抗发育能力,是极优异的抗北方根结线虫桃树砧木树种和种质资源。     

‘大叶草樱’对主要根结线虫的抗性评价

为发掘抗线虫甜樱桃砧木,以实生钵苗为试材,采用人工接种的方法,研究‘大叶草樱’对北方根结线虫、花生根结线虫、南方根结线虫和爪哇根结线虫的抗性。结果表明:接种后35d,接种北方根结线虫(60株)、花生根结线虫(59株)、南方根结线虫(58株)和爪哇根结线虫(60株)的‘大叶草樱’实生苗中未形成根结的植株(0级)数分别为1、7、2和8,受害等级为1级的植株数分别为59、52、56和52,病情指数分别为19.7、17.6、19.3和17.3。根据抗性评价标准判定‘大叶草樱’高抗北方根结线虫、花生根结线虫、南方根结线虫和爪哇根结线虫。‘大叶草樱’对4种主要根结线虫的抗性均存在免疫和高抗2种基因型,对北方根结线虫、花生根结线虫、南方根结线虫和爪哇根结线虫免疫型植株分别占群体总量的1.7%、11.9%、3.4%和13.3%。由此可见,‘大叶草樱’可判断为优良的抗根结线虫甜樱桃砧木和种质资源。     

蒙古扁桃对北方根结线虫的抗性鉴定

为了解蒙古扁桃对北方根结线虫的抗性,以实生苗为试材,采用人工接种、根系经次氯酸钠-酸性品红染色等方法研究了其对北方根结线虫的抗性。结果表明：蒙古扁桃的根结指数为20.67,接种侵入率1.6%,根中雌成虫数量占接种量的0.19%,依据有无根结和根中雌成虫数量占接种线虫数量的百分比标准判定为高抗北方根结线虫;蒙古扁桃实生群体对北方根结线虫的抗性表现出显著的分离现象,免疫、高抗和中抗3种基因型分别占23.3%,63.4%和13.3%。蒙古扁桃对北方根结线虫具有极强的抗侵染能力和很强的抗发育能力,是极优异的抗北方根结线虫种质资源。     

新疆野生樱桃李抗根结线虫相关基因片段的克隆与表达分析

为选育抗根结线虫的李属砧木,以新疆野生樱桃李(Prunus sogdiana)扦插苗为试验材料,对其接种南方根结线虫(Meloidogyne incognita),从中筛选出12株抗病植株。根据已知的抗根结线虫基因的NBS-LRR保守结构域设计简并引物,并以抗病植株的DNA和cDNA为模板对抗根结线虫同源基因序列进行扩增。获得6个抗根结线虫同源基因片段,依次命名为psoRPM1、psoRPM2、psoRPM3、psoRPM4、psoRPM5和psoRPM6,GenBank登录号为:HM593974、HM593975、HM593970、HM593971、HM593972和HM593973。其中前4个基因片段与桃、甜樱桃、酸樱桃以及樱花中的抗病基因的同源性高达90%以上。基因序列分析表明,这6个基因片段均具有典型的NBS保守结构域。根据其氨基酸序列的特点,推断这6个基因片段均属于non TIR-NBS-LRR型抗病基因。RT-PCR表达分析结果显示,psoRPM1和psoRPM6在接种南方根结线虫12和24 h后表达量显著增加,预示着这2个基因片段可能参与了樱桃李对根结线虫的识别和防御过程。本研究在樱桃李中克隆出...     

野生新疆桃抗酸碱盐性评价

为探明野生新疆桃抗酸碱盐种质资源价值,以360株野生新疆桃实生苗为试材,采用pH 3.5H3PO4溶液、pH 9.5KOH溶液和0.4%NaCl溶液灌根处理的方法,评价其对酸、碱和盐的抗性。结果表明:1)野生新疆桃为极强抗酸型树种,实生个体间抗性差异显著,分离为极强、强、中等3种抗酸型植株,分别占群体总数的86%、9%和5%。2)野生新疆桃为极强抗碱型树种,实生个体间抗性差异显著,分离为极强抗和强抗2种抗碱型植株,极强抗碱型和强抗碱型植株分别占群体总数的98%和2%。3)野生新疆桃为弱抗盐型树种,其实生个体间抗性分离广泛,存在极强、强、中等、弱、极弱全部5种抗盐型植株,分别占群体总数的8%、9%、19%、61%和3%。结果显示,野生新疆桃是优良的抗酸碱型砧木树种和抗酸碱盐型种质资源。     

山桃对根癌病的抗性评价

为探明山桃(Prunus davidiana(Carr.)Franch.)的抗根癌病种质资源价值,采用人工接种的方法评价了实生山桃苗对发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes Conn)和根癌土壤杆菌(A.tumefaciens Conn)的抗性。结果表明:接种后70d,接种发根土壤杆菌的山桃株最大瘤茎为0~20.3mm,病情指数为59,根据抗性评价标准判定为低度抗病类型;接种根癌土壤杆菌的山桃株最大瘤茎为0~5.3mm,病情指数为15,根据抗性评价标准判定为高度抗病类型;实生山桃群体对根癌菌的抗性存在广泛的株间分离现象,其对发根土壤杆菌的抗性分离为免疫、高度抗病、中度抗病、低度抗病、感病和易感病6种类型,分别占群体总数的20.8%、5.0%、12.5%、11.7%、20.0%和30.0%;对根癌土壤杆菌的抗性分离为免疫、高度抗病、中度抗病和低度抗病4种类型,分别占群体总数的35.0%、55.8%、8.4%和0.8%。山桃实生群体存在大量对发根土壤杆菌和根癌土壤杆菌免疫型单株,是优异的抗根癌病桃树砧木种质资源树种。     

陕甘山桃对根癌病的抗性评价

为评价陕甘山桃(Prunus davidiana var.potaninii Rehd)对根癌病的抗性,以实生钵苗为试材,采用人工接种的方法研究了其对根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens Conn)和发根土壤杆菌(A.rhizogenes Conn)的抗性。结果表明:接种后60d,接种根癌土壤杆菌的陕甘山桃的株最大瘤径范围为0～10.1mm,平均瘤径2.7mm,接种发根土壤杆菌的株最大瘤径范围为0～11.6mm,平均瘤径3.0mm,根据抗性评价标准判定陕甘山桃群体高抗根癌土壤杆菌和高抗发根土壤杆菌。但陕甘山桃对根癌土壤杆菌和发根土壤杆菌的抗性存在广泛的的株间分离现象,均分离为免疫、高抗、中抗、低抗、感病和易感病6种类型,对根癌土壤杆菌免疫、高抗、中抗、低抗、感病和易感病型植株分别占群体总数的28%、33%、19%、13%、6%和1%,对发根土壤杆菌免疫、高抗、中抗、低抗、感病和易感病型植株分别占群体总数的16%、46%、15%、13%、8%和2%。陕甘山桃是优异的抗根癌病种质资源。     

新疆桃花柱S-RNase和花粉SFB基因的克隆与分析

为探索新疆桃自交亲和的原因及其与普通桃的分类关系,以4个新疆桃(Prunus ferganensis Kost.et Riab)品种为试材,分别在花柱S-RNase和花粉SFB基因保守区设计引物,在DNA中鉴定其S基因型,并通过全长引物分别克隆4个品种中的S-RNase和SFB全长基因。测序后经分析确定S基因型分别是:‘和田黄肉’S2S2m,‘喀什1号’S1S2,‘喀什4号’S2S2,‘黄李光’S1S2。DNAMAN软件比对结果表明:S2m-RNase的第602个碱基鸟嘌呤G变成了腺嘌呤A,导致半胱氨酸变成了酪氨酸;SFB1m在第978个碱基后插入155bp的片段,导致蛋白质翻译提前终止;SFB2m基因由于在第492个碱基处有5bp的片段插入,使翻译在525bp处终止。RT-PCR组织特异性分析发现新疆桃4个品种的S-RNase均具有花柱组织特异性表达,SFB均具有花粉组织特异性表达;酵母双杂交试验显示突变的SFB1m和SFB2m能分别与S1-RNase、S2-RNase和S2m-RNase相互作用。以上结果表明新疆桃的S基因与桃其他栽培品种一致,自交亲和性可能与S基因的突变相关,且S基因的突变类型与目前鉴定出的普通桃(Prunus persica L.)突变类型一致,该研究进一步说明新疆桃与普通桃的进化关系较近。     

甜樱桃黄酮醇合酶基因的克隆及其表达分析

为了解黄酮醇合酶在甜樱桃类黄酮生物合成途径中的作用,根据其他物种已知的FLS cDNA保守序列设计简并引物,采用RT-PCR和RACE的技术,从甜樱桃(Prunus avium.L)嫩叶中扩增获得FLS cDNA全长,命名为PaFLS(GenBank登录号:JQ289290).该基因cDNA全长为1 077 bp,开放阅读框为1 014 bp,编码337个氨基酸,分子质量为38 ku,等电点pI为5.58.生物信息学分析表明PaFLS属于依赖2-酮戊二酸的双加氧酶家族(2OG-FeII_Oxy),该基因所编码的氨基酸序列与苹果、梨和草莓的同源性分别为99％、97％和77％.将该基因重组到表达载体pGEX4T-1中进行原核表达,电泳检测到一条约为65 ku的融合蛋白(含27 ku的GST标签).组织时空表达分析表明,PaFLS在甜樱桃的花中表达量最高,这可能和黄酮醇参与花粉萌发及利于授粉有关.