单克隆抗体ELISA双抗体夹心法与ELISA间接法检测小鼠肝炎病毒抗体的比较

用辣根过氧化物酶标记的抗小鼠肝炎病毒(MHV)单克隆抗体(McAb),建立了ELISA 双抗体夹心法,并与 ELISA 间接法检测小鼠血清中的 MHV 抗体进行了比较。发现两种方法在检出率、特异性、稳定性方面并无明显差异,但由于间接法操作更为简便,因此认为,检测血清中 MHV 抗体采用间接法较好。     

单克隆抗体夹心ELISA检测蚕豆萎蔫病毒研究

利用 ２ 株特异性单抗,建立了检测蚕豆萎蔫病毒（ＢＢＷＶ）的灵敏度高、特异性好的单抗夹心ＥＬＩＳＡ 方法⒚经测定,ＭｃＡｂ 最适包被浓度为０４ μｇ／ｍ Ｌ,ＨＲＰＭｃＡｂ 最佳工作浓度为１∶２ ０００,该方法最小检出浓度为０１６ μｇ／ｍ Ｌ,与几种常见的病毒无交叉反应⒚对杭州地区的 １４０ 多个样本进行了检测,发现蚕豆、豌豆中ＢＢＷ Ｖ 的阳性率达 ８０％ ⒚     

单克隆抗体夹心ELISA试验检测鸡新城疫病毒抗原的研究

从10株抗鸡新城疫病毒(NDV)特异性单克隆抗体(MAbs) 中筛选出2株MAbs—M22和F23,分别用作包被抗体和酶标抗体而建立的MAbs—夹心ELISA试验,对提纯NDV的最小检出量为25ng/ml病毒蛋白.NDV鸡阳性血清对本试验的特异性阻断作用和与其他禽类病毒交叉反应的阴性结果,证明本试验对NDV的特异性。从临床疑为鸡新城疫的724只病鸡的口腔棉试样品中共检出阳性502只,其中200个样品与病毒分离试验结果完全一致,两者均查出阳性鸡176只。     

双抗体夹心ELISA检测排泄物PEDV

用蔗糖密度梯度离心法纯化猪流行性腹泻病毒(PEDV)免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术获得2株分泌抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体,建立检测PEDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该双抗体夹心ELISA最佳反应条件为,兔抗PEDV抗体稀释度为1:800包被37℃1 h加4℃12 h,样品反应时间为90 min,酶标抗体工作浓度为1:2 000作用45 min,以OD490nm≥0.37作为阳性判定标准。该ELISA的重复性变异系数小于10%,最低检测限为5×103.67TCID50/m L,并与猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒无交叉反应。用该ELISA方法和RT-PCR方法检测48份临床粪便样品,结果显示,ELISA阳性检出率为39.6%,而RT-PCR方法检测卡的阳性检出率为43.8%。表明双抗体夹心ELISA方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好等优点,可用于PEDV快速检测。     

检测牛IL-4双抗体夹心ELISA方法的建立

为利用牛白细胞介素-4 (BoIL-4)的特异性单克隆抗体(MAb)建立检测BoIL-4的双抗体夹心ELISA方法,以多种ELISA方法对7株抗BoIL-4的单抗进一步筛选,得到反应最佳的2株单抗8B7和4A10,以A9表达的重组BoIL-4为阻断剂的阻断ELISA试验中,表明这2株单抗也可识别所构建的细胞系A9表达的重组BoIL-4。以单抗8B7作为包被抗体,以标记了HRP的单抗4A10作为检测抗体建立的双抗体夹心ELISA方法可检测大肠埃希菌、毕赤酵母和Flp-In-293细胞系3种表达系统表达的重组BoIL-4,最低检测限分别为0.25、8和2 ng·mL^-1,且对A9细胞系上清中表达的BoIL-4检测效果和特异性良好。该研究建立的BoIL-4双抗体夹心ELISA方法为深入研究BoIL-4、开发BoIL-4 ELISA检测试剂盒奠定了基础。     

犬瘟热病毒单抗夹心ELISA检测方法的建立

以2株犬瘟热病毒(CDV)特异性单克隆抗体2H11和1G7为基础建立了检测CDV的单抗夹心ELISA方法.用单抗2H11作为捕获抗体,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗1G7为检测抗体,通过方阵试验确定2H11和1G7-HRP的最佳工作浓度分别为200和475 ng· mL-1.建立的单抗夹心ELISA方法具有良好的...     

草鱼点状产气单胞菌单克隆抗体的制备与双抗原夹心ELISA法的建立

为了建立一种快速、准确能早期检测草鱼肠炎病原菌的方法,以患病草鱼为材料,制备点状产气单胞菌单克隆抗体(McAb),并鉴定其特异性和抗原表位;采用过碘酸钠方法,以辣根过氧化物酶标记单抗,用试管凝集试验测定其活性;建立点状产气单胞菌McAb的双抗原夹心ELISA检测方法,确定包被单抗和酶标单抗的浓度,并测定其灵敏度和特异性。结果:1)获得了2株特异性强和抗原表位不同的单抗,其ELISA效价为1∶16 000。2)辣根过氧化物酶标记的抗体活性为1∶640。3)建立了包被抗体稀释度为1∶800、酶标抗体稀释度为1∶1 600的双抗原夹心ELISA检测方法,该方法与点状产气单胞菌呈强阳性反应,与近似菌无交叉反应,灵敏性为7×103cfu/mL。结论:制备的点状产气单胞菌McAb的效价高、特异性强;建立的双抗原夹心ELISA方法操作简单、灵敏度高、特异性强,可应用于草鱼肠炎病原体的早期快速检测。     

应用ELISA间接法检测抗IBDV单克隆抗体

本文用 ELISA 间接法,研究并建立了抗鸡传染性法氏囊病毒单克隆抗体的检测体系。实验证明,该法具有简便、灵敏、迅速、特异性强、准确性高及重复性好的优点。是研究筛选抗 IBDV单抗杂交瘤细胞的可靠方法。     

禽流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV-H9高免血清中的IgG作为包被抗体,利用抗AIV-NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体,建立了检测禽流感病毒（AIV）抗原的双抗体夹心ELISA方法。经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件：兔抗AIV-H9高免血清IgG包被稀释度为1：8000（浓度为3.531μg/ml）,抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为1：800,酶标二抗的工作浓度为1：4000。与其他禽易感病毒（NDV、IBV、EDS-76V）等均没有交叉反应。结果表明,该方法具有快速、敏感、特异等优点,可应用于AIV的检测和流行病学调查。     

新城疫病毒单克隆抗体研究Ⅲ酶标单克隆抗体ELISA夹心法检测鸡新城疫病毒抗原

应用双抗体ELISA夹心法检测禽类新城疫病毒(NDV)抗原,用单克隆抗体或多克隆抗体包被固相载体,将活化的40孔板作为捕捉待检新城疫病毒抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)与单克隆抗体的结合物作为示踪抗体,比较了单克隆抗体和多克隆抗体的捕捉效率.结果表明,NDV单抗2C₁₂、4H₁₀优于血清IgG,同时确定了双抗体ELISA夹心法对不同日龄健康鸡组织产生背景反应的O.D.值基本参数,以X+2SD为判定阈值.捕捉抗体2C₁₂、4H₁₀的工作浓度为500～400μg/ml;示踪抗体2C₁₂、4H₁₀的工作浓度为1:3000～1:2000,ELISA夹心法的灵敏度可达4μgNDV蛋白/ml;对NDV不同毒株感染鸡各脏器的NDV检出率为:肾100%、肺90%.证明用双抗体ELISA夹心法检测鸡新城疫病毒抗原特异,敏感,是禽类新城疫病毒检测的新途径.     

新城疫病毒单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立

将复性的重组NDV HN蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合制备杂交瘤.通过ELISA筛选,获得了1株稳定分泌抗HN单克隆抗体(MAb)的杂交瘤细胞4E11.ELISA和Western-blot结果表明,该MAb能与NDV特异性反应,而不与H9亚型AIV,IBDV,EDS76,IBV和CIAV交叉...     

抗腺病毒五邻体单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA方法的建立

为获得稳定性好、特异性强、效价高的抗腺病毒五邻体单克隆抗体,用腺病毒五邻体基因工程表达抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,以腺病毒五邻体为筛选抗原对融合后的杂交瘤细胞间接ELISA进行筛选.结果表明:试验获得5株杂交瘤细胞,标记为3C4、4C4、4D7、4F2和4H3,4D7免疫球蛋白亚类为IgG2a,其余4株为IgG1;对5株细胞连续3个月体外传代试验和小鼠腹水连续传代试验,5株细胞都能持续稳定分泌单克隆抗体,对细胞上清和腹水采用间接ELISA进行效价测定,细胞上清效价稳定维持在2 000左右,腹水效价稳定维持在200 000以上,且与引起腹泻的鼠伤寒沙门氏菌和轮状病毒无交叉反应;对其中可以配对的2株单抗4D7、4F2建立双抗夹心ELISA,可以应用于临床检测腺病毒.     

单克隆抗体应用于ELISA快速检测空肠弯杆菌的研究

将单克隆抗体引入ELISA中,建立了快速检测空肠弯杆菌的间接法和BA法.两种方法分别能检出每毫升含1.6×10~5和3.2×10~4个空肠弯杆菌培养物,动态检测能检出每毫升含有10和5个空肠弯杆菌的24小时增菌培养物,不与鳗弧菌等20种对照菌呈交叉反应;对372份动物肛拭粪便标本检测结果,与常规分离鉴定法的总的阳性符合率分别为96.9％和98.7％,敏感性分别为97.0％和98.8％,特异性皆为100％.并27小时内报告结果     

ELISA双抗体夹心法检测河蟹“颤抖病”病毒

用纯化的河蟹“颤抖病”（暂定名）病毒分别免疫家兔和山羊,制备高效价的抗血清。羊抗血清经硫酸铵盐析纯化。经方阵滴定,选择P／N＝2．95时作1：100稀释的血清为工作浓度,建立ELISA双抗体夹心法检测样本144份,包括来自长江水域的野生河蟹、人工感染发病的河蟹、1999年和2000年从江苏采集的自然发病的病蟹及市场购买河蟹。结果显示,病蟹和市场购买河蟹的阳性率为66．7％－100％,人工感染的病蟹和人工感染石蟹致病组阳性率均为100％,来自长江水域的健康河蟹及未接种病毒的对照石蟹阳性率均为0,表明建立的方法可以用于检测河蟹“颤抖病”的病原。     

猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

采用特异性好的鼠源抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)单克隆抗体为捕获抗体,兔源多克隆抗体为检测抗体,建立PEDV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳反应条件为:抗PEDV单克隆抗体E1包被质量浓度4.40μg·mL~(-1),37℃包被2h,采用5%BSA封闭液封闭1h,兔抗PEDV抗体工作质量浓度为5.91μg·mL~(-1),酶标二抗稀释度为1∶2000,以OD450nm≥0.381作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪轮状病毒和猪传染性胃肠炎病毒无交叉反应。敏感度可达30μg·mL~(-1)(5×103.12);重复性变异系数小于10%。采用该方法和RT-PCR方法同时检测临床样品42份,阳性样品符合率为92.30%,表明建立的PEDV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高和方便快捷等优点,可用于PEDV快速检测。     

ELISA法检测猪瘟抗体消长规律的试验研究

本试验采用间接ELISA方法,对猪瘟（CSF）常规免疫的仔猪CSF抗体水平进行检测。试验分A、B两组,A组首免注射4头份猪瘟兔化弱毒疫苗,B组首免注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗;二免两组均注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗。试验结果表明,注射疫苗后10d,开始产生抗体,20~30d抗体达到峰值,二免后抗体峰值维持40d以上。首免4头份的仔猪比首免2头份的仔猪CSF抗体峰值出现的早,维持的时间长。     

ELISA双抗夹心法检测IBDV抗原

采用IBD细胞毒油佐剂灭活苗多次免疫易感鸡，制取高免血清效价1：64，提纯IgG抗体并用HRP标记同一IgG抗体，建立一种检测IBDV的敏感性方法──ELISA双抗夹心法。实验用盐析法和离子交换层析法纯化IgG。酶标抗体E／IgGmol比1：43。方阵实验确定最佳反应条件；包被抗体50ug／ml，E－Ab2稀释度为1：120，Ag灵敏度为1：3200；取代反应，抗原阻断反应，无关病毒对照试验均为阴性，并与AGP法对照实验．灵敏度高200倍。以上结果表明：本实验敏感性高，特异性强，简单快速判定客观，对临床诊断IBD流行病有很好的使用价值和推广价值。