猪圆环病毒分子生物学研究进展

猪圆环病毒是单链环状DNA病毒,其基因组中包含多个阅读框,其中2个主要的阅读框分别编码复制起始蛋白Rep和Rep'以及病毒衣壳蛋白:Rep和Rep'结合由PCV1的部分复制起点组成的双链DNA片段,但这2种蛋白的结合位点有细微差别;Rep蛋白不能单独启动病毒的复制,只有和Rep'蛋白一起才能启动PCV病毒的复制;PCV1感染PK15细胞后,用实时PCR检测rep和rep'转录子的数量,发现这2种转录子的比率随着时间的推移而不断发生变化;病毒衣壳蛋白基因是PCV基因间唯一变化很大的基因,其编码衣壳蛋白是PCV主要的免疫原性蛋白,其氨基端41个氨基酸与PCV2在细胞核内的定位有关.     

猪圆环病毒2型分子生物学研究进展

猪圆环病毒2型(PCV2)是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病因。目前流行的PCV2被分为PCV2a和PCV2b两个亚群。北美和其他国家PCVAD的暴发通常与主要基因型从PCV2a转变为PCV2b有关。本文对圆环病毒2型的分子结构及其表达产物的生物学活性的研究进展进行了综述,最后对分子差异和致病性进行了讨论。     

猪圆环病毒研究进展

综述了猪圆环病毒的病原特征及在流行病学、临床症状、致病机理方面的研究进展,介绍了分子生物学诊断技术在该领域的应用。     

猪圆环病毒3型分子生物学检测方法研究进展

猪圆环病毒3型感染猪后能引起猪厌食、皮炎和肾病综合征、母猪繁殖障碍、仔猪先天性震颤、多系统衰竭综合征等多种疾病,是一种新发的猪传染病,未来可能会给养猪业造成巨大的经济损失。文章综述了6种猪圆环病毒3型分子生物学检测方法,主要包括核酸探针、常规PCR法、套式PCR法、多种PCR、荧光PCR方法、环介导等温扩增技术等。     

猪圆环病毒研究进展

近年来断奶仔猪多系统衰竭综合征(post-weaning muhisystemic wasting syndrome,PMWS)在全世界范围内呈不断流行和蔓延的趋势。猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2),目前已被世界各国学者确认为是引起PMWS的主要病原体,许多对PCV-2的研究也主要是针对PMWS的。本文就近年来对猪圆环病毒的病原及致病性、流性病学、诊断及防制等方面的研究进展作一综述。     

猪圆环病毒病原学研究进展

猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)有2种不同的血清型,即猪圆环病毒1型(PCV1)和猪圆环病毒2型(PCV2)。目前研究表明PCV1暂无致病性,但PCV2则被认为是引起猪圆环疾病(PCVDs)的主要病原。很多地区养猪业的经济效益因此而遭受了重大的影响。PCV现已受到全球的关注,引起了许多专家学者的高度重视。本文对PCV的病原学最新研究进展进行了综述。     

猪圆环病毒3型研究进展

2016年,美国堪萨斯州立大学科研人员利用宏基因组测序技术,从患有皮炎肾病综合征(PDNS)和繁殖障碍母猪及其流产胎儿体内首次鉴定出一种新型猪圆环病毒,命名为猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)。流行病学调查发现PCV3感染多见于具有PDNS和繁殖障碍症状猪群,目前已于美国多个州猪群内普遍流行。同时,美国旧金山血液系统研究所科研人员从3头不明病因导致的心脏和多器官炎症仔猪体内也检测出PCV3。随后,我国湖北、广东等多个省市猪群中也检测出PCV3。近来,波兰和韩国相继报道存在PCV3感染猪群。作为一种新发现病原体,PCV3对猪致病性及在猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)中作用以及现有商品化PCV2疫苗对其免疫效力等有待进一步研究。文章综述PCV3最新进展,以期为后续研究提供参考。     

猪圆环病毒病原生物学研究进展

猪圆环病毒是单链环状DNA病毒,有2种不同的血清型:猪圆环病毒1型和猪圆环病毒2型.现有研究表明PCV1暂无致病性,PCV2则被认为是引起猪圆环病毒病的主要病原.许多国家养猪业的经济效益因此受到重大的影响.对PCV病原生物学的研究进展进行了综述.     

猪Ⅱ型圆环病毒的研究进展

断奶仔猪多系统衰竭综合症（Post weaning Muhisystemic Wasting Syn-drome,PMWS）是一种以发烧、渐进性消瘦、呼吸和消化紊乱为特征的传染性疾病,Ⅱ型猪圆环病毒（Porcine circovirus type2,PCV2）是的主要病原,有研究表明PCV2病毒的感染打开了其它细菌和病毒性疾病爆发的门户,     

猪圆环病毒病Ⅱ型的防治

综述了猪圆环病毒病Ⅱ型的病原、流行病学、临床症状、病理变化,并提出了防制措施,以供养猪生产防治该病参考。     

检测猪圆环病毒2型PCR方法的建立

[目的]为快速诊断猪圆环病毒病提供参考。[方法]根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,建立诊断PCV-2地方分离株的PCR方法。[结果]各物质在PCR反应中最佳浓度分别为:dNTP 220 pmol/ml,Taq酶0.1 U/μl,引物20 pmol/μl。从PCV-2阳性病料中提取DNA,在优化条件下进行PCR扩增,获得预期的494 bp特异性条带。用该PCR方法对PCV-2、PRRSV、HCVS、IV、PPV进行检测,PCV-2为阳性,而PRRSV、HCV、SIV、PPV检测均为阴性,未出现交叉反应,说明该PCR方法对PCV-2具有良好的特异性。该PCR方法可检出1.25 ng模板DNA,具备较高的敏感性。[结论]使用该PCR方法检测PCV-2是切实可行的。     

检测猪圆环病毒2型的一种PCR方法

参照genbank已发表的猪圆环病毒2型的基因序列，设计l对2型特异的引物，对广东省20个猪场送检的患病断奶仔猪的病料进行PCR扩增，并将PCR产物连接到pMDl8-T载体上，对重组质粒进行PCR、酶切鉴定及测序，最后发现PCR检测均为阳性。     

猪圆环病毒2型衣壳蛋白的表达

[目的]检测猪圆环病毒2型（PCV2）核衣壳蛋白（Cap）的表达,为进一步研制PCV2单克隆抗体检测抗原提供参考依据。[方法]根据已经发表的PCV2的衣壳蛋白基因（Cap）设计1对引物,利用PCR方法从已知PCV2病毒中扩增到1条DNA片段。将PCR产物按预定的阅读框架插入表达载体质粒pET28a（＋）中,获得重组质粒pCAP-PCV2,并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中。[结果]序列测定表明,所克隆的序列大小为579 bp,与DQ104422的Cap基因序列一致;通过对菌体裂解物的SDS-PAGE分析证明,携带重组质粒pET-PCV2-Cap的大肠杆菌可以表达可溶性的衣壳蛋白。[结论]PCV2衣壳蛋白能通过表达载体质粒pET28a（＋）进行可溶性表达。     

猪圆环病毒Cap蛋白羧基端特异性单克隆抗体的制备

利用IPTG诱导表达含有猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白羧基端421-37nt的重组大肠杆菌pGEX-PCV421-37,经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)粗分离,免疫BALB/c小鼠,利用PCV2感染PK15细胞筛选PCV2特异性单克隆抗体.共获得5株,腹水的IFA效价范围为1:1 600～1:8 000;除单抗26H5-A3为IgG1亚型外,32A8-G5、33G10-F4、12B5-G3和14E12-A6全部为IgM型;全部轻链都属κ型.     

猪圆环病毒Ⅱ型ZZ株ORF1基因的扩增测序与序列分析

合成一对猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)ORF1基因特异性引物,对分离到的郑州分离株(ZZ株)猪圆环病毒PCV-2型的ORF1基因进行了扩增,经测序后,将所测序列与已公布的35株PCV-2ORF1序列进行同源性比较,并绘制系统发育进化树。结果显示,所测毒株间的ORF1基因核苷酸同源性为97.3%～100%;进化树分析表明各分离毒株ORF1基因在进化上比较保守。同时对PCV-2OFR1部分功能进行分析,发现该基因蛋白具有良好的抗原性。     

云南省猪圆环病毒2型遗传进化分析

【目的】调查猪圆环病毒2型（PCV2）在云南猪群和牛群中的流行情况,明确云南PCV2毒株的遗传变异、分子进化趋势。【方法】采用PCR方法对云南省11个地区783份猪、牛的血液、粪便等样品进行PCV2病原学检测,对6份PCV2阳性样品进行全基因组扩增、克隆与序列测定,利用DNAStar软件比对分析全基因和ORF2氨基酸序列,使用MEGA软件绘制遗传进化树。【结果】检测样品的PCV2阳性率为48.73%;共测得6株PCV2全基因组序列,其中5株为1 767 bp, 1株为1 768 bp;经遗传发育分析可知,有PCV2a亚型2株、PCV2b亚型2株、PCV2d亚型2株;6株PCV2毒株同源性在94.6%～99.9%之间,与GenBank数据库中20条参考株同源性在91.4%～99.8%之间;6株PCV2亚型的ORF2都有其典型的氨基酸位点,PCV2a毒株在第80(V80L)氨基酸位点突变为与PCV2(b/d)一致,PCV2b毒株在59(R59K)、63(K63R)、190(A190T)等氨基酸位点突变与PCV2d一致。【结论】PCV2在云南猪群中普遍存在,以PCV2a、PCV2b和PCV2...     

猪圆环病毒1型ORF2基因的克隆与序列分析

参照Genbank上公开发表的PCV1全基因序列设计引物,以质粒pSK-PCV为模板扩增出PCV1-ORF2基因,插入pMD18-T载体,对筛选出的阳性质粒进行测序,将测序结果同Genbank上发表的PCV1基因序列相比较,同源性达97％,再与Genbank上发表的PCV2的ORF2基因序列相比较发现PCV1-ORF2和PCV2-ORF2的差异表现在两者在核苷酸序列的2个部位互相存在基因缺失现象。将推导出的PCV1-ORF2的氨基酸序列同PCV2-ORF2进行比较,发现二者在几个功能区相当保守,尤其是N-末端的核定位序列、N-糖基化位点以及酪氨酸磷酸化位点。     

猪圆环病毒Ⅱ型ORF1基因的克隆与原核表达

根据GenBank中猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2) ORF1基因序列,设计合成了一对引物,扩增出PCV2新疆株ORF1基因片段.将扩增出的ORF1基因(945 bp)插入到pMD18-T载体中,筛选获得重组质粒,命名为pMD18-ORF1.将ORFI酶切产物亚克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒,命名为pET-...