柴胡解毒注射液的制备及体外抗PRRSV作用试验

为筛选抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的中药，制备柴胡解毒注射液，并以其为试验药物，同时以利巴韦林注射液作为对照药物。观察在细胞上对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的作用效果。结果表明，自最大安全浓度做倍比稀释后．对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒均具有一定的抑制、杀灭和阻断作用。其中，柴胡解毒注射液抑制和杀灭作用均较为突出．利巴韦林注射液杀灭和抑制作用均较为显著。     

抗猪繁殖与呼吸障碍综合征中药单体成分的体外筛选

为体外筛选具有抗猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）的中药单体，本研究选择4味有效的中药单体成分，以Marc-145细胞为靶细胞，从阻断吸附、抑制复制和直接杀灭3个层面进行抗PRRSV研究，以CPE、病毒滴度评价药物抗PRRSV的效果。结果显示，绿原酸和连翘苷可明显抑制PRRSV在细胞内的复制|适当浓度的奎宁酸、绿原酸和连翘苷对PRRSV有较好的直接杀灭效果。综合阻断吸附、抑制复制和直接杀灭效果，绿原酸和连翘苷是理想的抗PRRSV中药单体药物。本研究为猪繁殖与呼吸障碍综合征防控提供了试验依据。 [关键词]猪繁殖与呼吸综合征|中药单体|抗病毒|病毒复制     

板蓝根多糖在3D4/21/CD163细胞上对PRRSV感染过程的影响

以永生化的传代猪肺泡巨噬细胞(3D4/21/CD163)作为靶细胞,研究板蓝根多糖(IRPS)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的体外抗病毒效果.研究IRPS的最佳给药方式及其抑制病毒增殖的环节,分别以预防作用、直接杀灭作用和治疗作用来测定IRPS抑制PRRSV增殖的最佳作用方式和药物浓度;从IRPS对PRRSV的...     

野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性试验

为了研究中药野大黄(中药提取物)含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性,探讨其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用机理。取"野大黄"药液,生药含量为2 g/mL,对照药物利巴韦林终浓度为0.025 g/mL,分别灌胃给药,饲喂SD大鼠,制备各组含药血清。采用MTT法和细胞形态观察法相结合,测定含药血清对Marc-145细胞的最大无毒稀释度。将含药血清倍比稀释至1∶4、1∶8、1∶16三种浓度,采用三种加药方式,以细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)观察与MTT染色检测OD492值,计算含药血清病毒抑制率为评价指标,观察野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性。结果显示,野大黄含药血清体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性最显著的是含药血清与病毒混合后加入方式,在1∶4稀释度时,野大黄含药血清组与利巴韦林对照含药血清组OD492均值差异显著(P0.05),两者对猪繁殖与呼吸综合征病毒抑制率分别为83.51%、73.07%,相差约10%。野大黄含药血清组三种稀释度镜检观察Marc-145细胞均无CPE出现,细胞单层完好,而利巴韦林对照含药血清在1∶16稀释度时病毒抑制率为63.55%,且出现CPE,细胞单层遭到破坏、部分细胞变圆、脱落。结果表明,野大黄含药血清体外具有显著的抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒活性,以同时给药时具有直接杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,有望作为抗猪繁殖与呼吸综合征病毒药物进行开发。     

三种药物对PRRSV的体外抑制试验

选取干扰素、黄芪多糖、利巴韦林作为抗病毒药物,利用MTT法与细胞病变(CPE)抑制试验,通过PRRSV感染Marc-145细胞、病毒在细胞中复制、药物直接和病毒作用三个环节,对药物的作用效果进行评价。结果显示,3种药物体外对PRRSV的都具有抑制作用,干扰素、黄芪多糖体外对PRRSV具有明显的阻断作用,利巴韦林体外对PRRSV具有杀灭作用。因此,这3种药物在细胞水平上均有抑制病毒的作用,为防控PRRS提供了理论依据。     

板蓝根、黄芪等中药活性提取物对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究

本试验利用Marc-145细胞体外培养系统，通过观察细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根、黄芪等中药活性提取物成分体外抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）对细胞的感染作用，并通过改变加药方式（先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物、病毒和药物感作后同时加入），初步探讨中药活性提取物的抗病毒机制。结果表明。在安全浓度范围内，板蓝根水提物体外对PRRSV具有显著的直接杀灭作用；连翘、黄芪水提物和黄芪多糖体外对PRRSV均具有明显的阻断和抑制作用，为筛选抗PRRSV中药制剂提供了理论依据。     

苦参碱对PRRSV的体外抑制作用及其机制

本试验以Marc-145细胞为模型,采用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法测定细胞活力,观察苦参碱(matrine)体外抗猪繁殖呼吸与综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)活性,并从抑制病毒复制、阻断吸附和直接杀灭3个方面探讨苦参碱体外抑制PRRSV的作用机制.结果显示,苦参碱CC50＞1 500 mg/L,最大安全浓度为750 mg/L,EC50为(443.5±33.4)mg/L,SI≥3.38,在安全浓度范围内对PRRSV感染Marc-145细胞的抑制率达到93.6％;在直接杀灭和复制抑制试验中最高抑制率分别达到105.10％和91.53％;在病毒吸附抑制试验中抑制率＜20％,表明苦参碱不能阻断PRRSV对Marc-145细胞的吸附.结果表明,苦参碱在体外可有效抑制PRRSV对Marc-145细胞的感染,其抗病毒机制可能是干扰病毒的复制或/和直接杀灭病毒,提示苦参碱可作为研发预防及治疗猪蓝耳病的药物或先导化合物.     

甘草酸二钾体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的活性

利用细胞病变(CPE)抑制试验和MTT法,通过抗病毒试验来评价甘草酸二钾对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞的保护效果,并通过复制抑制、吸附抑制和直接杀灭3个试验探讨了甘草酸二钾体外抑制PRRSV的作用方式.结果表明,在安全浓度范围内,甘草酸二钾能够显著抑制CPE的产生(抑制率≥100％).在直接杀灭和复制抑制试验中均表现出较高的抑制率,但在吸附试验中却没有阻断病毒对细胞的吸附,初步推测甘草酸二钾可干扰PRRSV的复制或可直接将其灭活,或两种作用同时存在.说明在体外试验中甘草酸二钾具有良好抗PRRSV活性,可以作为潜在的抗病毒试剂供进一步研究使用.     

人参皂苷Rb1对PRRSV的体外抑制作用及对病毒N蛋白表达的影响

为了在感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Marc-145细胞模型上,探讨人参皂苷Rb1(Ginsenoside Rb1, GSR1)抑制PRRSV能力及其作用机制。采用MTT法测定GSR1在Marc-145细胞上的最大安全浓度(Maximum no-cytotoxic concentration, MNTC)和半数毒性浓度(50%Cytotoxic concentration, CC_(50))。建立PRRSV感染Marc-145细胞模型,设计阻断PRRSV复制和直接杀灭PRRSV试验,确定GSR1体外抗PRRSV的作用方式;利用FQ-PCR检测GSR1对病毒N基因的影响,间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western Blot技术测定GSR1对PRRSVN蛋白表达的影响。结果表明,GSR1在直接杀灭PRRSV试验中最高抑制率为54.65%,在阻断PRRSV复制试验中前12 h起抗病毒作用,且最高抑制率达60.01%,推测GSR1主要通过直接使病毒灭活或干扰病毒的早中期复制来发挥其抗病毒作用。此外,在设定12～72 h试验时间内,阳性药物利巴韦林组,4 mg/mL、2 mg/mL GSR1组PRRSV N基因拷贝数显著低于病毒组(P0.05)。在对N蛋白含量影响试验中4 mg/mL GSR1和阳性药物可以减少N蛋白载量。表明GSR1可以通过抑制病毒N蛋白的表达来抑制病毒的复制,并可作为抗PRRSV的候选药物或先导物。     

中药抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用机制研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)引起的烈性、高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状。疫苗免疫是防控PRRS的主要手段,但由于PRRSV毒株高度变异性导致疫苗对该病的效果仍不理想。中药(traditional Chinese medicine, TCM)活性成分众多,生理活性多样,包括抗菌、抗病毒和抗氧化等作用,是抗病毒药物的研究热点。研究证明,中药能以单体或复方的方式对PRRSV产生抑制增殖、阻断吸附和杀灭病毒的作用,以及对机体免疫反应产生影响。关于中药抗PRRSV的机制包括直接抗病毒机制和间接抗病毒机制。直接抗病毒机制即中药有效成分对病毒复制周期的直接影响,主要表现为抑制病毒的吸附、内化、复制、大分子组装和释放中的一环,从而达到抑制病毒的作用。间接抗病毒机制即中药有效成分通过调节细胞因子合成、炎症信号通路、细胞凋亡、氧化代谢和免疫系统...