土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因的克隆及其序列分析

目的利用RT-PCR和RACE技术克隆土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白基因全长序列并进行序列分析.方法根据日本血吸虫和曼氏血吸虫肌动蛋白基因的保守区设计引物,利用RT-PCR扩增出土耳其斯坦东毕吸虫的肌动蛋白基因的大片段,再结合RACE技术分别得到肌动蛋白的3＇端和5＇端,将三部分序列拼接后获得肌动蛋白基因的全长cDNA序列并进行序列分析.结果成功克隆了土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白的全长cDNA并提交GenBank,登录号为DQ017265,核酸序列比对表明东毕吸虫肌动蛋白基因的核苷酸序列和日本血吸虫、曼氏血吸虫的同源性分别为90%和91%.结论土耳其斯坦东毕吸虫肌动蛋白的全长cDNA的克隆为进一步表达及其生物学性能的分析提供了理论基础.     

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种扫描电镜观察及与其它血吸虫的比较

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种分别收集于四川和黑龙江省,按常规电镜方法处理后,以日立JSM-800扫描电镜观察并摄片.观察显示中华血吸虫体表无结节,其雄性成虫体表结构近似于日本血吸虫等亚洲血吸虫,与文献描述的采集于泰国的中华血吸虫也无明显差异.观察同时表明土耳其斯坦东毕吸虫结节变种与程氏东毕吸虫基本无差别,二者的感觉球种类与土耳其斯坦东毕吸虫一致,但数目较后者为多.同时结合已发表的有关裂体属血吸虫SEM研究结果,对裂体属血吸虫SEM超微结构特点列表进行了比较.按照Rollinson的分组方法,中华血吸虫属于无结节组,而东毕吸虫属于不带棘的有结节组.     

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫节变种扫描电镜观察及与其它血吸虫的比较

中华血吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫节变种分别收集于四川和黑龙江省，按常规电镜方法处理后，以日立JSM－800扫描电镜观察并摄片。观察显示中华血吸虫体表无结节，其雄性成虫体表结构近似于日本血吸虫等亚洲血吸虫。与文献描述的采集于泰国的中华吸虫也无明显差异。观察同时表明土耳其斯坦东毕吸虫节变种与程氏东毕吸虫基本无差别，二者的感觉球种类与土耳斯坦东毕吸虫一致，但数目较后者为多。同时结合已发表的有关裂体属血吸虫SEM研究结果，对裂体属血吸虫SEM超微结构特点列表进行了比较，按照Rollinson分的组方法，中华血吸虫属于无结节组，而东毕吸虫属于不带棘的有结节组。     

绵羊胃肠道内发现东毕吸虫

东毕吸虫(orientobilharzia)因寄生于动物血管内故称血吸虫。1984年4月在酒泉县调查绵、山羊寄生虫的过程中,在3只绵羊的真胃、小肠和大肠内发现东毕吸虫96个(成对),其中以小肠寄生最多。这些绵羊的肠系膜静脉内均寄生有程氏东毕吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫,但以程氏东毕吸虫居多。     

大庆市羊东毕吸虫病流行病学调查

对大庆市羊东毕吸虫病的流行病学进行了调查研究。结果表明，大庆有3种东毕吸虫，即程氏东毕吸虫（O.cheni)、土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica)和土耳斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanican var.thuberculata)；中间宿主螺类有1种，即卵萝卜螺；东毕吸虫病在大庆分布很广，所调查的4区2县均有发生，羊东毕吸虫平均感染率分别为50．33％，平均死亡率为21．12％，大庆羊急性病例发病时间为8月上旬至10月下旬，慢性病例为11月上旬至翌年2月中旬。     

东毕属三种吸虫分类地位的研究

东毕吸虫分类问题一直是大家比较关心的问题，本文根据课题研究情况并结合他人研究资料，对东毕吸虫属的三个种，即土耳其斯坦东毕吸虫、土耳其斯坦东毕吸虫结节变种和程氏东毕吸虫的光镜和电镜观察情况进行了比较和分析，并结合近期有关对虫体DNA序列分析资料，对三种东毕属吸虫分类地位进行了讨论。     

齐齐哈尔市羊东毕吸虫病流行情况调查及综合防治措施的研究

对齐齐哈尔市羊东毕吸虫的种类、中间宿主螺类及羊东毕吸虫的感染率、感染强度、死亡率进行了调查，结果齐齐哈尔市羊有程氏东毕吸虫、土耳其斯坦东毕吸虫和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种3种；中间宿主有卵萝卜螺和小土窝螺2种；在调查的9县(市、区)中有8县(市、区)有东毕吸虫病发生，羊平均感染率和死亡率分别为76．36％和19．31％，除拜泉没有检出虫体外，依安、齐齐哈尔市建华区、甘南、克东、富裕、讷河、龙江等地感染率均很高，泰来最为严重，感染率达到94．05％。根据调查结果，制定了齐齐哈尔市羊东毕吸虫病综合防治措施。     

广西在耕牛体内再次检出东毕属血吸虫

东毕属血吸虫(Orientobilharzia),我国早在1938年徐锡潘在北京绵羊体内发现土耳其斯坦东毕吸虫(Orientobilharzia turkestanica),熊大仕1943年在成都牛体内发现东毕吸虫(Orientobilharzia),以后四川、云南、湖南、甘肃、内蒙古、宁夏、贵州、青海等省均有报道.广西1979年进行全面耕牛血吸虫病普查工作中,在百色地区靖西、德保两县粪检中发现20多头阳性牛,扑杀5头,分别冲出153～8 661条东毕血吸虫.     

东毕吸虫抗原特异性的研究──土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原SDS-PAGE分析

为了探明东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分,供今后在免疫诊断和防治东毕吸虫的应用,本试验应用ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ首次对绒山羊体内寄生的土耳其斯坦东毕吸虫成虫可溶性抗原的多肽组分进行了分析。结果表明该抗原有１７ 条多肽带,其分子量范围２５～９３ＫＤ．其中主带７ 条,分别为２９、３０、３８、４０、６７、７８、９１ＫＤ。本试验初步阐明了土耳其斯坦东毕吸虫成虫抗原的多肽组分,为进一步对该病免疫诊断用抗原的分离、纯化,提高抗原的敏感性和特异性奠定了基础     

黑龙江省牛羊东毕吸虫病流行情况与地理分布特征的调查研究

对黑龙江省牛、羊东毕吸虫病的流行情况及地理分布特进行了调查研究，初步认定我省有三种东毕吸虫，即程氏东毕吸虫（O.cheni)、土耳其斯坦东毕吸虫（O.turkestanica)和土耳其斯坦东毕吸虫结节变种（O.turkestanica var.tuberculata)。中间宿主螺类有三种，即耳萝卜螺、卵萝卜螺和小土窝螺；东毕吸虫病在黑龙江省分布较广，在调查的34个县（市）中有27个县（市）的牛、羊感染东毕吸虫，平均感染率分别为43．97％和61．98％，齐齐哈尔地区最为严重，牛、羊、的平均感染率分别达到62．73％和76．36％，大庆，绥化，哈尔滨，北安地区感染率也较高，佳木斯，黑河，鸡西地区属零星发生，牡丹江地区未检出。     

鸡蛔虫线粒体cox1和nad4基因的遗传变异分析

为探究鸡蛔虫的种内遗传变异和系统发育关系,对分离自四川省西昌市的15个鸡蛔虫分离株的线粒体细胞色素c氧化酶第Ⅰ亚基（cox1）基因部分序列和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚单位Ⅳ（nad4）基因全序列进行PCR扩增、序列测定及分析,并用cox1和nad4基因部分序列构建鸡蛔虫与其他蛔虫的NJ树和贝叶斯树。测序结果显示,所获得的鸡蛔虫cox1和nad4基因全序列长度分别为1 152和1 236 bp,分别有33和40个变异位点,碱基变异率分别为0~2.1%和0~2.3%;分别检测到8和11个单倍型,总的单倍型多样性分别为0.733±0.124和0.933±0.054,核苷酸多样性分别为0.00433±0.00153和0.00541±0.00157,平均遗传距离分别为0.004和0.005。构建的种系发育树均显示15个鸡蛔虫西昌分离株与其他国家/地区的鸡蛔虫分离株聚类形成一个分支,与鸽蛔虫的亲缘关系最近,与其他蛔虫所属的分支相隔较远。研究结果表明鸡蛔虫西昌分离株的遗传变异程度低,且nad4基因比cox1基因更适合作为研究鸡蛔虫分离株遗传变异的分子标记。     

Genetic Variation Analysis of Mitochondrial cox1 and nad4 Genes of Ascaridia galli

To study the genetic variations of Ascaridia galli (A. galli) and the phylogentic relationships with other Ascaridata, fragment of the mitochondrial cytochrome c oxidase subunit 1 (cox1) gene and complete sequence of NADH dehydrogenase subunit 4 (nad4) gene of 15 adult A. galli isolated from Xichang city in Sichuan province were amplified by PCR, then analyzed the sequences. NJ trees and Bayes trees based on pcox1 and pnad4 genes were reconstructed. The partial sequences of cox1 gene and complete sequence of nad4 gene were 1 152 and 1 236 bp, respectively. There were 33 and 40 variable sites in the pcox1 and nad4 gene sequences, the intraspecific sequence variations within A. galli were 0 to 2.1% for pcox1 gene, 0 to 2.3% for nad4 gene. 8 and 11 haplotypes were detected in pcox1 and nad4 genes, the global haplotype diversity were 0.733±0.124 and 0.933±0.054, the nucleotide diversities were 0.00433±0.00153 and 0.00541±0.00157, and the average genetic distances were 0.004 and 0.005, respectively. Phylogenetic trees based on pcox1 and pnad4 genes with Neighbour-Joining and Bayesian analysis method revealed that all A. galli were clustered in one clade, and they were more closely related to A. columbae than any other members of Ascaridata. These findings indicated that 15 isolates of A. galli from Xichang city kept low genetic variation, nad4 gene was more suitable and effective than cox1 gene as molecular marker for detecting genetic variation of A. galli.     

Pseudoterranova decipiens复合种的几个姊妹种在线粒体nad4序列的差异

本实验用PCR扩增了来自世界各地的P．decipiens复合种共6个姊妹种的线粒体NADH脱氢酶亚单位Ⅳ基因（nad4），并进行了克隆、测序和序列分析。结果显示，PdOe与Pd为同一种，nad4基因序列种内的变异为0．7％，种间差异为2．4～13．2％。种间差异远大于种内变异，能提供准确的遗传标记。可用于P．decipiens复合种姊妹种的鉴定。这些结果有助于P．decipiens复合种的生活史、传播途径、流行病学、种群遗传学的研究和其所引起的相关疾病的诊断。     

羊毛尾线虫线粒体nad4基因的序列变异分析

本研究旨在阐明中国羊毛尾线虫(Trichuris ovis)广东分离株线粒体NADH脱氢酶亚单位4(nad4)基因部分序列(pnad4)的遗传变异情况, 并用pnad4序列构建其与其他鞭虫的进化关系。应用PCR扩增羊鞭虫虫株的pnad4,将所获得的序列应用ClustalX 1.81程序进行比对,然后用Mega 5.0程序NJ法绘制种系发育树。本试验扩增所获得的pnad4序列长度一致,均为827 bp,种内变异在0~1.5%之间。种系发育分析结果表明,12个羊鞭虫分离株位于同一分支。由于羊鞭虫nad4序列种内相对保守,种间差异较大(37.8%~45.6%), 故可作为种间鉴定检测研究的遗传标记, 本研究结果为进一步研究羊鞭虫的群体遗传结构奠定了基础。     

湖南省山羊脑多头蚴的线粒体nad1和nad4基因的序列测定及种系发育分析

本研究旨在阐明脑多头蚴湖南分离株线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸( NADH)脱氢酶亚单位1基因(nad1)部分序列(pnad1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位4基因(nad4)部分序列(pnad4)的遗传变异情况,并用pnad1和pnad4序列重构脑多头蚴与其它带科绦虫的种群遗传关系.利用聚合酶链反应(PCR)扩增脑多头蚴的pnad1和pnad4,应用ClustalX 1.81程序对序列进行比对,再用Phylip3.67程序MP法和Mage4.0程序NJ法绘制种系发育树,并用Puzzle5.2程序构建最大似然树,同时利用DNAstar5.0中的Megalign程序进行同源性分析.结果显示所获得的pnad1和pnad4序列长度分别均为666和887 bp,湖南分离株与已知多头带绦虫位于同一分枝.由于脑多头蚴pnad1和pnad4序列种内相对保守,种间差异较大,故均可作为种间遗传变异研究的标记,从而为脑多头蚴的分子流行病学和其相关疾病的诊断奠定基础.     

线粒体nad5基因在隐藏管状线虫及四翼无刺线虫的序列变异研究

本试验首次研究了小鼠隐藏管状线虫及四翼无刺线虫在线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）脱氢酶亚单位5基因（nad5）部分序列（pnad5）的种间及种内变异。通过对甘肃兰州地区实验小鼠体内分离的蛲虫样品（LY1-20、LS1-22） nad5基因pnad5进行PCR扩增、克隆及测序分析,研究其遗传变异情况。结果表明,获得隐藏管状线虫pnad5有效序列753 bp,通过序列比对发现来自LY和LS 2家实验动物中心的22个隐藏管状线虫样品之间只存在3个碱基的差异,序列相似性99.60%。获得四翼无刺线虫pnad5有效序列865 bp,2大动物中心20个四翼无刺线虫样品之间没有碱基的差异,序列相似性100%。用软件ClustalX 1.83截取2种鼠蛲虫nad5基因长度共同的序列,通过比对发现2种鼠蛲虫种间差异为53.64%,种间差异显著。研究结果表明,线粒体nad5基因在鼠蛲虫种内相对保守,但种间有着较高的突变率,可作为鼠蛲虫种间鉴定、诊断的遗传标记。     

Pseudoterranova decipiens复合种的几个姊妹种种间线粒体nad1基因序列差异的研究

对来自世界各地的P．declplens复合种共6个姊妹种的线粒体（mtDNA）NADH脱氢酶亚单位Ⅰ基因（nad1）序列进行PCR扩增、克隆、测序和序列分析。结果显示，nad1基因序列种间差异为3．6％～15．0％，遗传差异性分析结果与ITS1、ITS2和cox1的基因序列遗传差异性分析结果基本上一致，nad1能提供准确的遗传标记，可用于P．decipiens复合种姊妹种的鉴定。这些结果有助于阐明P．declpiens复合种种间的遗传变异，为进一步的分子遗传学和分子诊断学研究奠定基础。     

猬裂头蚴线粒体nad4基因的克隆及序列分析

以从湖南长沙和湘西黑斑蛙大腿肌肉中采集的2条猬裂头蚴作为研究对象,用引物ND4F及ND4R扩增猬裂头蚴的pnad4片段,应用ClustalX1.81程序对序列进行比对,同时利用DNA Star5.0中的Megalign程序进行同源性分析。结果显示,来自湖南长沙和湘西的2条猬裂头蚴的pnad4序列均为640 bp。研究结果为猬裂头蚴进一步的分类、鉴定和遗传变异研究奠定了基础。