Relaxation of isolated gastric smooth muscle cells by vasoactive intestinal peptide

Vasoactive intestinal peptide caused a prompt, dose-dependent relaxation of isolated gastric smooth muscle cells of the guinea pig and a significant increase in intracellular adenosine 3',5'-monophosphate coincidentally with optimum relaxation. Relaxation was augmented by a threshold concentration of isobutyl methylxanthine. The direct relaxant effect of vasoactive intestinal peptide and the distribution of nerves containing this peptide to circular smooth muscle support the view that vasoactive intestinal peptide is the neuromuscular transmitter of enteric inhibitory nerves.     

Brain peptides as neurotransmitters

Numerous peptides appear to be neurotransmitter candidates in the brain. Some, such as the opioid peptide enkephalins, neurotensin, and substance P, were first isolaterd from the brain. Peptides, such as cholecystokinin and vasoactive intestinal polypeptide, were known as intestinal hormones and later recognized as brain constituents. Certain hypothalamic-releasing hormones, pituitary peptides, and blood-derived peptides like angiotensin II and bradykinin, may also be central neurotransmitters. The diversity of localization of these peptides throughout the brain implies a multiplicity of potential roles.     

血管活性肠肽在动情周期大鼠子宫中的分布

采用免疫组化SP法,观察血管活性肠肽(VIP)免疫反应阳性物质在SD大鼠动情周期子宫中的分布情况和变化规律。结果表明,在内膜层中,VIP免疫阳性产物定位于子宫内膜上皮细胞、腺上皮细胞、基质细胞和血管内皮细胞中。在肌层中,VIP免疫阳性产物主要位于VIP样阳性神经纤维中。VIP免疫阳性产物相对表达量的t检验表明:子宫内膜VIP在动情后期表达量较发情前期极显著减少(P0.01);与动情前期相比,子宫肌层VIP在动情期的表达量显著减少(P0.05),在动情后期的表达量极显著减少(P0.01)。但是在动情间期VIP的表达量较动情后期又极显著回升(P0.01)。VIP在动情周期大鼠子宫中表达分布存在一定规律性,可能与其免疫调节和腺体分泌等功能有关。     

皖西白鹅腔上囊VIP和NPY阳性神经元分布的研究

应用免疫组织化学SABC染色法,对皖西白鹅腔上囊的血管活性肠肽(VIP)和神经肽Y(NPY)定位进行了研究。结果发现免疫阳性神经元在粘膜、粘膜下层,囊小结的皮质、髓质以及血管有表达,提示禽类的腔上囊内有肽能神经分布,并有可能参与禽的免疫器官的功能调节和控制淋巴细胞的迁移。     

巫山神茶水提物对昆明小鼠小肠蠕动的影响

通过建立动物模型,以及观察活性炭在小肠中的状态和血清中内皮素、乙酰胆碱酯酶和血管活性肠肽水平,就巫山神茶水提物对昆明小鼠小肠蠕动的影响进行了评价.结果表明,血清中内皮素、血清乙酰胆碱酯酶和血管活性肠肽水平,以及活性炭肠道推进率随着巫山神茶水提物浓度的增加而增加,而活性炭小肠推进距离和首粒含活性炭黑便排出时间则随巫山神茶水提物浓度的增加而降低.由此认为,巫山神茶在一定程度上可促进小鼠小肠的蠕动.     

鸡肠道组织中血管活性肠肽的分布特点

为探讨鸡肠道组织中肽能神经支配的途径及其功能,运用免疫组织化学超敏SP法,对不同生长阶段鸡肠道中血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)的分布特点进行了研究。结果显示,肠壁中VIP的表达范围较为广泛,涉及黏膜上皮和固有层、肌层和外膜,尤以固有层和肌层最为典型;随着日龄增加,黏膜上皮间VIP阳性细胞数量逐渐增多;从肠道不同部位的分布来看,十二指肠中VIP的表达强于同时期其他部位,空肠中的表达次之,回肠和盲肠的表达相对较弱。黏膜固有层和肌层一直分布有染色较深的VIP阳性神经纤维,呈串珠状、细线状或膨体状。提示鸡肠道是产生VIP的又一个重要部位,肠道中的VIP可参与鸡免疫器官的功能调节,并作为一种信息分子介导神经内分泌系统和黏膜免疫系统之间的相互作用。     

Innervation of periosteum and bone by sympathetic vasoactive intestinal peptide-containing nerve fibers

Neural control of bone metabolism and growth has been suggested, although the identity of participating neurons and neurotransmitters effecting this control has not been established. Immunohistochemical studies demonstrated a system of vasoactive intestinal peptide (VIP)-immunoreactive nerve fibers that innervate periosteum and bone in several mammalian species. Thoracic sympathetic chain ganglionectomy resulted in an ipsilateral loss of VIP-immunoreactive fibers in the periosteum of ribs, whereas dorsal root ganglionectomy had no effect. Injection of fast blue into rib periosteum labeled a population of VIP-immunoreactive sympathetic postganglionic neurons. Thus, postganglionic sympathetic neurons may provide an important means by which VIP regulates bone mineralization.     

感染法氏囊病毒雏鸡新城疫2次免疫后体液中Ig含量和HI抗体滴度变化

本文对1日龄人工感染传染性法氏囊病毒(IBDV)雏鸡2次新城疫免疫后血清、泪液、气管液、胆汁和肠液中免疫球蛋白(Ig)的含量和血清,泪液、气管液中血凝抑制抗体(HI)滴度进行了检测。结果表明,感染 IBDV 雏鸡 ND2次免疫后,其血清、泪液、气管液、胆汁和肠液中 IgM,IgG,IgA 含量及血清、泪液、气管液中 HI 抗体滴度均明显高于感染鸡1次 ND 免疫;但仍低于 ND2次免疫对照鸡。说明感染 IBDV 雏鸡 ND2次免疫,其全身如呼吸道、消化道局部的体液免疫应答水平较1次免疫明显升高,呈现免疫增强,但仍低于2次免疫对照组。提示IBDV 感染所致的雏鸡免疫抑制不是不可逆,但不可能完全恢复。     

Vasoactive intestinal polypeptide and muscarinic receptors: supersensitivity induced by long-term atropine treatment

Long-term treatment of rats with atropine induced large increases in the numbers of muscarinic receptors and receptors for vasoactive intestinal polypeptide in the salivary glands. Since receptors for vasoactive intestinal polypeptide coexist with muscarinic receptors on the same neurons in this preparation, the results suggest that a drug that alters the sensitivity of one receptor may also affect the sensitivity of the receptor for a costored transmitter and in this way contribute to the therapeutic or side effects of the drugs.     

黑番鸭VIPR-1基因单核苷酸多态性与就巢性状的关联性分析

VIPR\|1基因是研究家禽就巢性状的重要候选基因,研究选用处在产蛋期、就巢期的黑番鸭为研究对象,通过PCR\|RFLP和测序的方法,对VIPR\|1基因内含子12进行多态性检测,并分析其与就巢性状之间的关系。结果表明：VIPR\|1基因内含子12存在一个AfaⅠ酶切位点,该位点在内含子12的902 bp处发生了C→T的碱基突变,产生了CC,CT和TT三种基因型。通过对产蛋黑番鸭与就巢黑番鸭个体的研究,发现所测产蛋黑番鸭基因型的分布情况为CC（32）,TT（40）和CT（42）,就巢黑番鸭基因型的分布为CC（18）,TT（40）和CT（18）,经卡方独立性检验,产蛋黑番鸭与就巢黑番鸭两者之间基因型的分布差异显著（P＜005）。表明黑番鸭VIPR\|1基因第12内含子C902T突变与黑番鸭的就巢性状显著相关。     

Depolarization and muscarinic excitation induced in a sympathetic ganglion by vasoactive intestinal polypeptide

The effects of vasoactive intestinal polypeptide (VIP) in the superior cervical ganglion of the cat were studied in vitro and in vivo with sucrose gap and multiunit recording, respectively. At a dose of 0.03 to 0.12 nanomole, VIP produced a dose-dependent, prolonged (3 to 15 minutes) depolarization of the ganglion and enhanced the ganglionic depolarization elicited by the muscarinic agonist acetyl-beta-methylcholine. At a dose of 1.8 to 10 nanomoles, the peptide enhanced and prolonged the postganglionic discharge elicited by acetyl-beta-methylcholine, enhanced muscarinic transmission in ganglia treated with an anticholinesterase agent, and enhanced the late muscarinic discharge elicited by acetylcholine. VIP did not affect the early nicotinic discharge elicited by acetylcholine or by electrical stimulation of the preganglionic nerve. It is concluded that VIP has a selective facilitatory action on muscarinic excitatory mechanisms in the superior cervical ganglion of the cat.     

Immunocytochemical Identification and Localization of Diffuse Neuroendocrine System （DNES） Cells in Gastrointestinal Tract of Channel Catfish （Ictalurus punctatus）

To detect distribution and relative frequency of diffuse neuroendocrine system （DNES） cells in the gastrointestinal tract of channel catfish （lctalurus punctatus）, the intestinal tract of channel catfish was divided into seven portions from proximal to distal： the enlarged area after oesophagus, cardia, fundus, pylorus, and anterior, middle, and posterior intestine. Immunohistochemical method using the strept avidin-biotin-complex （SABC） was employed. All antisera between seven portions of the channel catfish were compared statistically using statistical package for the social science （SPSS）. Five types of DNES ceils were determined： neuropeptide Y-immunoreactive （NPY-IR） cells were demonstrated in both anterior and middle intestine; serotonin （5-HT） immunoreactive cells were detected throughout the whole gastrointestinal tract; vasoactive intestinal peptide （VIP） positive cells were at the highest frequency in pylorus; glucagon-immunoreactive （GLU-IR） cells were moderate in number in the fundus and anterior, middle intestine, and no immunoreactivity was determined in the other portions; somatostatin （SOM） positive cells were more abundant in the anterior and middle intestine. The regional distribution and relative frequency of immunoreactive cells in the channel catfish, Ictalurus punctatus, are essentially similar to those of other fish. However, some characteristics are observed in this species, which further proved that the diversity of the physiological function of DNES cells was based on their morphology.     

禽类血管活性肠肽与乙肝病毒核心抗原融合基因的构建

在制备以禽类血管活性肠肽（VIP）为基础的基因工程疫苗工作中，选择乙肝病毒核心抗原（HBcAg)作为载体来提高鹅VIP的免疫原性，首先将克隆于鹅VIP cDNA和HBc基因第1至435bp的序列片段先后插入到质粒pRSET A的BamH I/EcoR I和Nhe I/BamH I克隆位点之间，构建成VIP序列位于HBc序列之后的VIP融合基因的重组质粒pHBc-VIP,其次将HBc第1至225bp序列的扩增片段和HBc第244bp之间包括VIP的充列经扩增，EcoR I酶切，连接，再扩增的片段先后插入到质粒pBSKS /－的BamH\Pst和Pst\HindⅢ克隆位点，构建成VIP持入到HBc基因中间（HB cAg的第75和82位氨基酸之间）融合基因的重组质粒pVIP-HBc.     

Deficient vasoactive intestinal peptide innervation in the sweat glands of cystic fibrosis patients

The innervation of acini and ducts of eccrine sweat glands by immunoreactive, vasoactive intestinal peptide-containing nerve fibers was sharply reduced in seven patients with cystic fibrosis compared to eight normal subjects. The decrease in innervation by this neuropeptide, which has been shown to promote blood flow and the movement of water and chloride across epithelial surfaces in other systems, may be a basic mechanism for the decreased water content and relative impermeability of the epithelium to chloride and other ions that characterize cystic fibrosis.     

益生菌与新城疫疫苗协同对雏鸡局部体液免疫球蛋白相对含量的影响

雏鸡分别于新城疫(ND)疫苗免疫后第0、7、14、21天,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定泪液、气管液、胆汁和肠液IgA、IgG、IgM相对含量的动态变化,观察益生菌能否增强ND疫苗的局部黏膜体液免疫效果.结果表明,益生菌协同ND疫苗组雏鸡呼吸道和消化道局部体液IgA、IgG、IgM相对含量分别在免疫后14 d明显高于对照组和ND疫苗单独免疫组雏鸡(P<0.05).可见,益生菌能够提高ND疫苗的局部黏膜体液免疫应答.     

中华蜜蜂Apidaecin的重组表达及其抗菌活性

【目的】研究中华蜜蜂（Apis cerana cerana）抗菌肽Apidaecin在枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）中的重组表达,并验证纯化后的重组抗菌肽Apidaecin在体内和体外是否具有抗菌活性,为开发新型、安全具有抗菌和免疫调节功能的抗菌肽制剂提供理论依据。【方法】以意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica）Apidaecin为模板,克隆出中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,成功构建his-pHT43/Apidaecin表达载体,并参照MoBiTec所提供的制备方法成功制得枯草芽孢杆菌感受态细胞,现配现用,以保证其活性并得以在枯草芽孢杆菌表达系统中重组表达。使用His标签蛋白纯化试剂盒（可溶性蛋白）进行表达蛋白的分离纯化,使用Easy II Protein Quantitative Kit（BCA）试剂盒测定浓度。纯化得到的重组抗菌肽Apidaecin作用于大肠杆菌K88,在体外进行抑菌圈试验和最小浓度抑菌法测定;在体内,以小鼠为试验动物模型,试验组小鼠腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin,阴性对照组注射相同体积的生理盐水,阳性对照组注射相同体积的头孢霉素,然后人为感染大肠杆菌K88,感染24 h后对小鼠进行解剖,取得肠道样品和血液样品,并从肠道屏障和免疫功能两个方面探讨重组抗菌肽Apidaecin对感染大肠杆菌K88小鼠的保护作用。使用ELISA试剂盒对染菌小鼠血清免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）与肠道sIgA水平进行测定,采用qRT-PCR法对小鼠肠道紧密连接蛋白基因（claudin-1、ZO-2）以及小鼠肠道细胞因子（促炎因子TNF-α、IFN-γ、IL6和抑炎因子IL10）的转录水平进行测定。【结果】克隆得到的中华蜜蜂Apidaecin含有183 bp的碱基,编码60个氨基酸,包含Apidaecin的信号肽序列、一个基础的RR二肽以及抗菌肽Apidaecin的氨基酸序列（内含高度保守的8个氨基酸序列）,编码的蛋白质命名为AccApidaecin,其分子量为15.6 kD,等电点为5.33。在IPTG终浓度为3 mmol·L ^-1,诱导温度为30℃,诱导表达12 h后,可从1 L表达上清中纯化得到约20 mg抗菌肽。药敏试验显示,重组抗菌肽Apidaecin在体外与阴性对照相比有明显抑菌圈出现,且测得的最小抑菌浓度为10 mg·L ^-1;在小鼠体内,腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin的染菌试验组与注射生理盐水的染菌试验组相比免疫球蛋白含量差异显著(P<0.05),说明腹腔注射重组抗菌肽Apidaecin能够有效缓解由大肠杆菌K88引起的小鼠免疫球蛋白含量的增加;同时,小鼠肠道相关蛋白的基因表达量也差异显著(P<0.05),说明重组抗菌肽Apidaecin能够有效保护被大肠杆菌K88侵染的小鼠肠道。【结论】在枯草芽孢杆菌中能够成功重组表达中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin,并且纯化后的中华蜜蜂抗菌肽Apidaecin在体外对大肠杆菌K88有良好的抗菌效果;经腹腔注射进入小鼠体内,能够提高小鼠的免疫机能,有效抵抗大肠杆菌K88对小鼠的侵染。     

感染传染性法氏囊病毒雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答抑制和机理

本研究在雏鸡1日龄时感染法氏囊病毒,14日龄时点眼、滴鼻接种新城疫疫苗,检测了感染鸡ND免疫后其外周血液、泪液、气管液、肠液、胆汁中IgG,IgM,IgA含量,血液T细胞免疫功能和脾脏B细胞抗体生成功能、血清、泪液和气管液HI滴度的变化,测定了血液T,B细胞与淋巴细胞数量以及法氏囊、胸腺、脾脏、盲肠扁桃体、哈德尔腺、十二指肠粘膜、丕氏斑,支气管粘膜的浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性T细胞(ANAE~+T)数量的动态变化。结果如下: 1)1日龄感染IBDV雏鸡ND免疫后,其法氏囊、脾脏、盲肠扁桃体、十二指肠粘膜固有层、丕氏斑、哈德尔腺、支气管粘膜固有层的浆细胞数量和脾脏B细胞抗体生成功能均显著降低;外周血液B细胞数量、HI滴度、血清、泪液、气管液、肠液和胆汁IgG,IgA,IgM含量较对照免疫鸡显著减少,这表明感染鸡对ND疫苗的全身和消化道、呼吸道相关局部的体液免疫应答功能显著抑制。 2)感染鸡ND免疫后,其胸腺、脾脏、法氏囊、消化道和呼吸道相关局部免疫组织的ANAE~+T细胞数量、外周血液T细胞免疫功能和T细胞数量均显著低于正常免疫鸡,这说明感染鸡对ND疫苗的全身和局部细胞免疫应答机能显著减弱。 3)ND强毒攻击后,感染鸡的ND免疫保护率明显低于健康免疫鸡,其免疫保护效应降低,与其对ND强毒的全身和消化道、呼吸道局部体液免疫和细胞免疫反应水平显著下降密切相关。     

奶牛小肠上皮细胞的原代培养和鉴定

为研究小肽转运蛋白对小肽转运和吸收机制提供细胞模型,在体外建立原代奶牛小肠上皮细胞分离的方法,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶混合消化液对奶牛小肠组织进行消化,通过2%山梨醇进行密度梯度离心以去除单核细胞、淋巴细胞和肌细胞;用刮除法、相差消化法和96孔板单克隆方法来纯化奶牛小肠上皮细胞,从细胞形态学、细胞角蛋白18免疫荧光染色和小肠上皮细胞特异性标志蛋白来鉴定奶牛肠上皮细胞。结果表明:1)采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶联合消化奶牛小肠组织,通过2%山梨醇密度梯度离心可以获得大量的细胞团且48h发生贴壁,但是细胞贴壁不牢。2)48h之后细胞团进一步向外辐射生长出细胞,细胞形态呈现典型的上皮细胞和铺路石形态。5~7d细胞处于对数生长期,细胞大量增值,一部分成纤维细胞与小肠上皮细胞夹杂生长。3)通过96孔板能够单克隆奶牛小肠上皮细胞,细胞呈现均一的铺路石形态。4)奶牛小肠上皮细胞角蛋白18鉴定为阳性,荧光显微镜下能够发出绿色荧光。5)通过RT-PCR能够检测到奶牛小肠上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白、碱性磷酸酶和肠肽酶的表达,成功建立了奶牛小肠上皮细胞的分离和培养方法。     

雏鸡对新城疫疫苗的免疫应答及其免疫保护机理

本实验共用240只1日龄健康雏鸡,分别于14,14和28日龄点眼滴鼻接种 Lasota 疫苗,在免疫后不同时期,采取实验鸡血液、泪液、肠液、气管液和胆汁、脾脏、法氏囊、胸腺、盲肠扁桃体、丕氏斑、十二指肠及哈德尔腺、支气管,检测了相应的 IgG,IgA,IgM 和 HI 滴度。T,B 细胞数量和功能,淋巴细胞数量以及浆细胞和酸性α-萘酚酯酶阳性 T 细胞(ANAE~+T)数量的动态变化。实验结果,雏鸡免疫后,脾脏、法氏囊和胸腺中 ANAR~+T 细胞与浆细胞显著增加,消化道和呼吸道相关局部免疫组织中的浆细胞、ANAE~+T 细胞数量也明显上升;与此相应,血液 T 细胞和脾脏 B 细胞免疫功能显著增强;血液 T,B 细胞、淋巴细胞数量显著升高;血清、泪液、气管液、胆汁和肠液中的 IgG,IgA,IgM 含量和 HI 滴度均程度不同地增加。免疫鸡脾脏、盲肠扁桃体和丕氏斑的淋巴小结数量增多,直径增大。这些表明免疫鸡不仅全身和局部的体液免疫反应,而且其细胞免疫应答也显著增强。雏鸡新城疫二免后,其免疫器官和局部免疫组织的浆细胞和 ANAE~+T 细胞进一步增多,血液 T 细胞和脾脏 B 细胞免疫功能也增强;血液 T 细胞。B 细胞与淋巴细胞数及 IgG,IgA,IgM含量和 HI 滴度程度不等地增加;泪液、气管液、肠液和胆汁的前述指标均升高,说明雏鸡 ND二免产生了显著的体液免疫和细胞免疫增强作用。新城疫强毒攻击后,对照鸡免疫器官组织和相应体液中的免疫指标均明显降低。呈现全身和局部免疫机能衰竭,全部死亡。与此相反,二免鸡免疫应答水平进一步提高,明显优于一免鸡,获得可靠的免疫保护,这与其显著增强的全身和局部细胞免疫和体液免疫反应密切相关。     

醒脾升陷汤加味治疗腹泻型肠易激综合征的临床研究

目的 观察醒脾升陷汤加味治疗腹泻型肠易激综合征（irritable bowel syndrome with predominant diarrhea,IBS-D）的临床疗效,并探讨其作用机制。方法 将IBS-D患者随机分为对照组和治疗组,每组65例,对照组口服匹维溴铵片治疗,治疗组口服醒脾升陷汤加味治疗,两组均治疗4周。观察两组治疗前后临床症状积分、IBS症状严重程度评分量表（IBS bowel symptom severity scale,IBS-BSS）、IBS生活质量量表（IBS quality of life scale,IBS-QOL）及血清5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、血管活性肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）和P物质（substance P,SP）水平。结果 治疗组总有效率为92.31%,明显高于对照组总有效率81.54%（P<0.05）;治疗组可以降低临床症状积分、IBS-BSS积分,升高IBS-QOL积分（P<0.05）,且治疗组改善上述指标均优于对照组（P<0.05）;治疗组可以降低血清5-HT、VIP、SP水平（P<0.05）,且明显优于对照组（P<0.05）。结论 醒脾升陷汤加味治疗IBS-D临床疗效肯定,可改善患者的临床症状、缓解病情程度、提高生活质量,其机制可能与调节脑肠肽水平相关。