绵羊腔卵泡中葡萄糖和生殖激素及其受体基因表达的相关性分析

通过分析绵羊不同直径腔卵泡中葡萄糖与生殖激素(FSH、LH和17β-E_2)含量和相关受体基因表达的相关性,阐明不同腔卵泡发育中葡萄糖和生殖激素对卵泡生殖调控的机制。根据绵羊腔卵泡不同直径划分为小卵泡组(2.0～3.4 mm)、中卵泡组(3.5～5.4 mm)和大卵泡组(5.5 mm)3组,收集其卵泡液及颗粒细胞(GCs)。采用AnnextinV-FITC测定小、中和大卵泡中GCs凋亡情况;利用放射免疫法检测小、中和大卵泡组中葡萄糖浓度及FSH、LH和17β-E_2的含量;运用qRT-PCR技术检测小、中和大卵泡GCs中FSHR、LHR和G6Pase基因的转录水平。结果显示,不同直径绵羊腔卵泡中GCs凋亡无显著差异(P0.05);随着腔卵泡直径的增大,卵泡液中葡萄糖浓度、FSH、LH和17β-E_2的含量均升高;同时,GCs上FSHR、LHR、G6Pase基因的转录水平极显著升高(P0.01)。不同直径腔卵泡中,葡萄糖浓度与FSH含量均呈显著正相关,仅在大卵泡中与LH呈显著正相关(P0.05)。另外,葡萄糖浓度与FSHR、G6Pase基因的表达量呈显著正相关,只在大卵泡中与LHR表达量呈显著正相关(P0.05)。随着绵羊腔卵泡生长,葡萄糖与生殖激素含量和相关受体基因表达量具有显著相关性,共同参与调节卵泡发育。     

羔山羊卵泡诱导发育及活体采卵研究

注射外源FSH诱导羔山羊卵泡发育并活体采卵,比较不同来源FSH、不同采卵间隔时间、不同重复采卵次间的实验效果.结果显示:1)用5 mg新西兰产FSH(Ovagen)处理后每只羊卵巢上平均有(18.3±3.5)个可用卵泡,较中科院产FSH效果(14.9±6.7)好.2)间隔7 d或14 d进行卵泡诱导发育及活体采卵,实验效果无显著性差异.3)羔山羊共4次用5 mg FSH(Ovagen)重复诱导卵泡发育并活体采卵,随次数增加,可用卵泡数和回收可用卵母细胞数呈下降趋势;不同重复次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异(P＞0.05).4)间隔7 d多次重复采卵过程中,平均每次采卵获可用卵8.4枚,COCs回收率和可用率分别为74.2%、78.5%;不同个体间卵母细胞回收率和可用率无显著性差异(P＞0.05).结论:新西兰产FSH(Ovagen)比中科院产FSH诱导羔山羊卵泡发育效果好;手术法活体采卵可获得稳定的卵母细胞回收率和可用率,羔山羊可以进行手术法重复活体采卵且最短采卵间隔时间宜为7 d.     

骨髓间充质干细胞移植在卵巢早衰小鼠卵巢功能重建中应用

探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植在卵巢早衰小鼠卵巢功能重建中的应用价值。通过一次性腹腔注射环磷酰胺和白消安建立小鼠卵巢早衰(POF)模型,并随机分为建模组、BMSCs移植组和空白对照组。移植组于建模14 d经尾静脉注射绿色荧光蛋白(GFP)转基因鼠BMSCs悬液(5×10~7个·mL~(-1)),每4 d重复1次,共5次;建模组和空白对照组注射等量生理盐水。观察建模后及BMSCs移植后小鼠的一般情况、血清FSH和E2水平、卵巢组织学变化以及GFP荧光信号在卵巢内的分布。结果发现,建模组小鼠食欲明显减退,活动减少,与空白对照组相比体重显著减轻(P0.05),FSH水平显著增高(P0.05),E2水平显著降低(P0.05),卵巢体积减小,间质纤维化严重,始基卵泡、生长卵泡和成熟卵泡数均显著减少(P0.05)。BMSCs移植后,移植组小鼠体重增加,食欲增强,活动增多;28 d后FSH浓度显著低于建模组(P0.05),E2浓度、始基卵泡、生长卵泡数及成熟卵泡数均显著高于建模组(P0.05),但各项指标仍与空白对照组间存在显著性差异;荧光显微镜下可见绿色荧光信号散在分布于卵泡周围。此结果提示,BMSCs可在小鼠损伤卵巢组织中定位存活,对卵巢组织结构及内分泌功能有修复作用。     

FSH对牛腔前卵泡体外发育的影响

为探讨FSH对牛腔前卵泡体外发育的影响,在McCoy’s 5a基础无血清培养液中,分别加入浓度为0、1、10、50及100 ng/mL FSH,观察培养不同时间腔前卵泡的生长和存活情况。结果显示,在培养6 d后添加50及100 ng/mL FSH组腔前卵泡及其卵母细胞直径都较对照组及其他处理组有较大幅度的增长(P<0.01);添加10 ng/mL以上FSH组腔前卵泡在培养后期的体外存活率也有明显提高(P<0.05),表明适宜浓度的FSH对培养后期腔前卵泡体外发育具有显著的促进作用。     

理囊散对卵泡囊肿和排卵延迟奶牛血清生殖激素的影响

研究理囊散对卵泡囊肿和排卵延迟奶牛血清中雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、孕酮(P4)4种生殖激素的影响,初步探讨理囊散治疗奶牛卵泡囊肿和排卵延迟疾病的作用机理.用理囊散治疗奶牛卵泡囊肿和排卵延迟,统计发情率;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测奶牛血清中的E2 、FSH、LH、P44种生殖激素,并与正常奶牛对比.结果显示,理囊散治疗卵泡囊肿发情有效率为83.33％,治疗排卵延迟发情有效率为90.91％.理囊散处理前,卵泡囊肿E2水平显著高于正常组(P＜0.05),P4水平显著低于正常组(P＜0.05),FSH和LH水平无显著差异;排卵延迟组的E2、FSH、LH水平与正常组间无显著差异,P4水平低于正常组,差异极显著(P＜0.01).理囊散处理后,卵泡囊肿组药后4d,E2 、FSH、LH急剧显著上升并达到高峰,相比治疗前差异极显著(P＜0.01),P4出现显著下降趋势,于药后4d达到低谷值;排卵延迟组的E2 、FSH、LH于药后7d明显上升,药后20d的水平与药前差异极显著(P＜0.01);P4明显上升,药后7d达到高峰值且与药前的差异极显著(P＜0.01),而后显著下降到处理前水平.结果表明,理囊散对卵泡囊肿和排卵延迟奶牛的E2 、FSH、LH、P44种生殖激素具有显著调节和诱导发情的作用.     

奶牛发情周期中生殖激素浓度与卵泡发育对比分析

选择从澳大利亚购进的2岁左右发情周期为21 d育成母牛10头,用放射免疫测定法(R IA)测定了发情周期血清中促卵泡素、促黄体素、孕酮、雌二醇17β的浓度,并用B-型超声波诊断仪检测发情周期卵巢卵泡发育变化.结果显示:优势卵泡发育体积和FSH、LH与E2浓度在奶牛发情周期中主要表现出两个波峰,对比分析显示奶牛在发情周期第12天(优势卵泡峰时)不发情与不排卵主要原因可能是体内前列腺素等激素量不足所致.     

中药复方制剂“促孕散”对不孕模型大鼠血清中生殖激素的影响

为研究中药复方制剂“促孕散”对不孕模型大鼠血清中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、雌二醇(E2)和睾酮(T)的影响,以进一步探讨该方剂治疗不孕症的作用机理,取9d龄雌性SD大鼠于颈背部皮下注射丙酸睾丸酮制备肾虚不孕模型大鼠,将其分为模型组、中药治疗组、正常组(共3个组),从80 d龄用药28 d后,采血,分离血清,用ELISA酶联免疫试剂盒检测血清中各种激素水平.结果:模型组血清中FSH、LH、E2水平明显低于正常组和中药组水平(P＜0.01),模型组T水平显著高于其他2组(P＜0.01).表明中药复方“促孕散”能提高垂体内分泌功能,使其增加血清中FSH、LH,通过降低T,使其转化为E2,以促进卵巢发育、成熟及排卵.     

羔羊体外胚胎高效生产技术研究

该研究旨在比较良种肉羊5周龄、13周龄羔羊激素处理后卵巢卵泡发育及体外胚胎发育的影响.通过FSH和孕马血清促性腺激素(PMSG)处理,比较卵巢上2~8 mm卵泡的数量及体外胚胎的发育情况.结果表明:5周龄羔羊卵巢发育的卵泡数和采集到的卵母细胞数(58.6±1.9、47.4±4.2)都高于13周龄羔羊卵泡数和卵母细胞数(14.4±4.1、11.6±1.7),且差异显著(P<0.05).5、13周龄羔羊卵母细胞受精后的卵裂率(60.0%±1.9%、61.6%±5.2%)及囊胚率(27.4%±2.1%、28.2%±3.7%),两者间差异不显著.     

表皮生长因子对胎鼠卵巢卵泡体外发育和类固醇激素分泌的影响

表皮生长因子（EGF）是参与卵巢功能调节的一个重要肽类因子，关于EGF对小鼠胚胎期卵巢卵泡发育和类固醇激素发育的 今未见报道。本研究以单个卵巢的放泡数、生长卵泡数和5个最大卵母 平均直径为卵泡发育优劣的衡量指标，利用我们早期研究建立的无血清培养体系研究了EGF对胎鼠卵巢卵泡发育和类固醇激素分泌的作用。结果发现：①EGF处理组胎鼠卵巢总卵泡数、生长卵九和卵巢内5个最大卵母细胞平均直径从培养第7天起即显著高于ITS对照组直至培养结束；②EGF在培养后期显著促进胎鼠卵巢分泌睾酮，但对雌二醇的基础分泌无影响；③EGF处理组胎鼠卵巢在培养过程的后期引起贴壁的卵巢边缘脱离培养板底壁发生卷边现象，丧失卵母细胞皮持－髓质生长模式。结果提示：EGF在胎鼠卵巢原始卵泡生长起始中起重要作用， 同时EGF促进胎鼠卵巢小腔前卵泡／卵母细胞进一步生长、发育和体外存活；EGF促卵泡发作用与雌二醇的作用无关。     

不同浓度的FSH对猪腔前卵泡体外培养的影响

为确定不同浓度的FSH对猪腔前卵泡体外培养的影响,探讨最佳培养体系,比较了M199培养液中3种FSH浓度(0.5、1、2IU/mL)对腔前卵泡体外培养的影响。结果表明:FSH浓度为2IU/mL时腔前卵泡的生长率最高,2 IU/mLFSH与0.5IU/mLFSH相比,在卵泡生长率、成腔率和存活率上都存在着显著差异(P<0.05)。3个处理组腔前卵泡前5d生长率与后5d相比差异极显著(P<0.01)。结论:高浓度的FSH能显著地促进腔前卵泡的生长和腔的形成,且能够提高腔前卵泡的成活率。猪腔前卵泡体外培养呈前高后低的生长模式。     

二仙汤抗化疗性卵巢早衰氧化应激的效应观察

目的 观察二仙汤对卵巢早衰（premature ovarian failure,POF）大鼠的抗氧化应激效应。方法 雌性SD大鼠40只,监测一周动情周期,筛选有正常动情周期的大鼠入组,随机分为4组：正常组、模型组、阳性药组和二仙汤组。除正常组外,其余3组使用顺铂注射液造POF模型,阳性药组和二仙汤组在造模同时进行药物干预,灌胃期间监测动情周期,15 d后麻醉取材,应用放免法检测血清性激素卵泡刺激素（follicle timulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）及雌激素（estrogen,E₂）的水平以及氧化应激相关指标丙二醛（malondialdehyde,MDA）、抗氧化指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的含量,显微镜下观察各组卵巢组织的病理改变。结果 与正常组相比较,模型组大鼠动情周期及动情间期明显延长（P<0.01）,血清FSH、LH、MDA含量显著升高（P<0.01）,E₂、SOD及CAT水平显著降低（P<0.01）,卵巢组织中闭锁卵泡增多,窦卵泡数减少。与模型组相比,阳性药组与二仙汤组动情周期缩短（P<0.05或P<0.01）,血清FSH、LH、MDA含量显著降低（P<0.05或P<0.01）,E₂、SOD及CAT的含量显著上升（P<0.05或P<0.01）,闭锁卵泡数量减少,窦卵泡数增多。结论 二仙汤能通过调节POF大鼠的的抗氧化能力来改善卵巢功能,减少氧化应激带来的损伤从而治疗POF。     

抑制素主动免疫对母牛卵泡发育的影响

本试验以猪精液抑制素粗提物主动免疫母牛,研究了对母牛卵泡发育和内分泌的影响。免疫,母牛的卵泡发育率为１４５．５％,排卵率为１１８．２％,分别比对照组提高４５．５％和１８．２％。通过放射免疫法对免疫牛血液中ＦＳＨ,ＬＨ,Ｅ２水平测定发现,发情时免疫组母牛ＦＳＨ水平高于对照组,免疫组中多卵发育牛ＦＳＨ水平高于单卵牛,免疫组与对照组中ＬＨ水平相差不大,多卵牛发情时Ｅ２水平较高。     

MIF在不同直径猪卵泡的表达变化规律

为分析巨噬细胞迁移抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)在不同直径健康猪卵泡上的表达变化规律,将收集到的90个健康母猪卵巢,通过ELISA检测不同直径卵泡液中MIF质量浓度,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测颗粒细胞中MIF基因mRNA和蛋白的表达水平,采用免疫荧光检测MIF在颗粒细胞中的分布情况。结果显示:1)中等直径卵泡(3～4mm)液中MIF的质量浓度(54.17±7.86ng/mL)显著高于大卵泡(6mm,32.29±1.47ng/mL)和小卵泡(1～2mm,38.89±0.98ng/mL)(P0.05);2)中等直径卵泡颗粒细胞中MIF基因mRNA和蛋白质表达量也显著高于大卵泡和小卵泡的表达量(P0.05);3)MIF也在不同直径卵泡颗粒细胞中的细胞核和细胞质表达,但多集中于细胞质中。综上,随着猪卵泡发育过程,MIF在中等直径卵泡中表达量最高。本研究为母猪卵泡发育和排卵提供新的线索。     

水牛腔前卵泡体外培养效果影响因素的研究

 【目的】主要探讨水牛腔前卵泡体外培养的影响因素。【方法】采用梳刮法从沼泽型水牛的卵巢中回收得到腔前卵泡，而后用McCoy's5a培养液在96孔培养板中体外培养5～10 d，在显微镜下观测腔前卵泡的形态与增长情况，并用台盼蓝染色鉴定腔前卵泡的存活情况。【结果】在培养液中添加100 µg•L-1的FSH能显著提高腔前卵泡培养5和10 d后的增长幅度，当同时添加50 mg•L-1的维生素C时增长幅度进一步加强；添加50 mg•L-1的维生素C能提高腔前卵泡培养10 d后的形态正常率，但对卵泡增长及存活没有影响；添加50 µg•L-1的EGF能提高腔前卵泡培养5 d的增长幅度，但对培养10 d后腔前卵泡的作用不显著。随着卵泡的直径增加，体外存活率升高，增长的幅度上升，异常率下降。60～100 µm的腔前卵泡用三维培养法（琼脂糖包埋）体外培养10 d的直径增长幅度显著高于二维培养法（琼脂糖铺底）和普通培养法，且形态异常显著低于二维培养法和普通培养法；100～140 µm卵泡用二维培养法培养的增长幅度最大，培养成活率最高。【结论】FSH能促进水牛卵泡的体外增长，维生素C能维持卵泡的正常形态结构，且两者的协同作用显著；水牛卵泡体外发育能力随其体积的增大而增强；三维培养法适宜于培养60～100 µm的卵泡，而二维培养法有利于100～140 µm卵泡的体外发育。     

PI3K信号通路关键基因在猪卵泡发育中的表达规律

【目的】研究不同时期猪卵巢卵泡发生的形态特征及磷脂酰肌醇3–激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)信号通路关键基因在卵泡发生发育中的作用。【方法】通过HE染色观察12日龄、30日龄、70日龄、20月龄卵泡期及黄体期、48月龄的长大二元母猪卵巢卵泡发育的形态变化,应用实时荧光定量PCR检测PI3K通路关键基因在这些时期的表达规律,并通过Western blot法检测PI3K通路重要的下游效应因子p-rpS6在不同时期猪卵巢的表达情况。【结果】12日龄母猪卵巢皮质边缘有大量的原始卵泡,皮质与髓质交界处可见少量初级卵泡及个别的次级卵泡;30日龄母猪卵巢次级卵泡数量增加;70日龄出现3级卵泡;20月龄卵泡期、黄体期分别有大量成熟卵泡、大体积的黄体;48月龄较难观察到原始卵泡。PI3K通路抑制因子PTEN、TSC1、TSC2与激活因子PDK1、AKT1、mTOR的mRNA均在12日龄表达量最高,70日龄、48月龄表达量次之,30日龄和20月龄表达量最低;下游效应基因rpS6的mRNA 30日龄表达量最高,20和48月龄表达量最低,p-rpS6蛋白在12日龄、20月龄、48月龄母猪卵巢高表达,在30日龄、70日龄中几乎不表达。【结论】PI3K通路关键基因在不同时期母猪卵巢中的表达水平不同,说明该通路参与了猪卵泡的早期发生及卵泡成熟的调控过程。     

Follicle-stimulating hormone is expressed in ovarian follicles of chickens and promotes ovarian granulosa cell proliferation

Follicle-stimulating hormone(FSH), an important hypothalamic-pituitary-gonadal axis(HPG) hormone, is secreted by the pituitary gland. This study confirms that FSH is expressed in chicken follicles at different stages, and positive FSHβ mRNA signals were stronger(P0.05) in granulosa cells than in oocytes. The 369 bp coding sequence of FSHβ in ovaries is 100% identical to that in the pituitary gland. The experiment in vitro revealed that the ovary possessed FSH secretory capacity. Further, FSHβ mRNA was significantly upregulated(P0.05) in follicles and significantly higher(P0.05) than that in the pituitary gland by approximately 2–23 times with the development. The number of granulosa cells decreased significantly(P0.05) in the cells with siRNA treatment, confirming that the ovarian FSH could promote granulosa cell proliferation. This view was supported by cell cycle analysis and CCND2 and CCNE2 expression. Further research indicated that no difference(P0.05) was observed between the number of granulosa cells treated with FSHβ siRNA and in exogenous FSH. However, the number of granulosa cells without FSHβ siRNA transfection was significantly higher(P0.05) for exogenous FSH. This finding suggests that the proliferative effect of exogenous FSH on ovarian granulosa cells depend on endogenous FSH. This study demonstrated that the FSH gene was expressed in chicken follicles and promoted ovarian granulosa cell proliferation, which enriched the theory on HPG axis.     

疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证模型大鼠血清性激素水平的影响

目的 研究疏肝健脾解毒方对乳腺癌癌前病变肝郁证模型大鼠血清性激素水平的影响。方法 采用二甲基苯蒽灌胃及夹尾法制备乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型,随机分为模型组、疏肝健脾解毒方组、三苯氧胺组、小金丸组,同时设空白对照组,分别干预4周后采用放射免疫法检测血清雌二醇、孕酮、泌乳素、黄体生成素和卵泡刺激素含量。结果 模型组血清雌二醇、孕酮、泌乳素、黄体生成素和卵泡刺激素水平均较空白对照组高,差异均有显著统计学意义（P<0.01）;各用药组血清性激素水平低于模型组,差异均有显著统计学意义（P<0.01）;疏肝健脾解毒方组雌二醇及黄体生成素水平低于对照药三苯氧胺组及小金丸组,差异均有统计学意义（P<0.05）;疏肝健脾解毒方组血清孕酮、卵泡刺激素、泌乳素水平高于三苯氧胺组,低于小金丸组,孕酮水平间差异有统计学意义（P<0.01）,卵泡刺激素、泌乳素水平水平间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 疏肝健脾解毒方可有效降低乳腺癌癌前病变肝郁证大鼠模型血清性激素水平。     

卵泡液对不同大小牛腔前卵泡体外培养过程中E2分泌的影响

Φ60~150μm牛腔前卵泡在有、无促性腺激素存在下,分别添加0、10%、15%、20%牛卵泡液(BFF)的McCoy′s 5 a无血清系统体外培养15 d,测定其雌二醇(E2)分泌量。结果显示:各添加卵泡液组在培养3、6、9、12 d的E2分泌量均显著高于对照组(0组)(P<0.01)。当培养液中有促性腺激素(FSH、LH)存在下,各添加卵泡液组的E2分泌量更高,其中添加10%牛卵泡液组中Φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时E2分泌量达最高,为48.96±11.54 pg/mL。表明培养液中添加一定比例牛卵泡液(BFF)可显著刺激体外培养腔前卵泡E2的分泌,促性腺激素存在下更加强了卵泡液对E2分泌的刺激作用。     

八段锦对多囊卵巢综合征患者体征、性激素及卵巢超声的影响

目的 探究八段锦对多囊卵巢综合征（PCOS）患者的体征、性激素及卵巢超声的影响。方法 将60例PCOS患者随机分为观察组与对照组各30例,两组均以低热卡饮食为基础,均不接受药物治疗,观察组有组织地进行八段锦运动6个月,对照组除日常活动外,不刻意进行体育运动。比较运动前后两组患者的体征、性激素水平以及B超下卵巢形态的变化。结果 观察组痤疮评分、体质指数（BMI）及腰臀比（WHR）较运动前及对照组均下降（P<0.05）,黄体生成素（LH）及其与卵泡刺激素（FSH）的比值（LH/FSH）、睾酮（T）水平较运动前及对照组降低（P<0.05）,B超双侧卵巢平均卵泡个数（MFN）较运动前及对照组减少（P<0.05）,但多毛评分、卵泡刺激素（FSH）、催乳素（PRL）、孕酮（P）、雌二醇（E2）水平及B超双侧卵巢平均体积（MOV）较对照组及运动前差异无统计学意义（P>0.05）。结论 八段锦可以改善PCOS患者痤疮症状,降低BMI及WHR,降低LH/FSH、T水平以及改善卵巢形态,是一种有效的辅助治疗手段。