木薯SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

【目的】优化木薯SCoT-PCR反应体系并进行SCoT引物筛选,为木薯辅助育种提供技术支持。【方法】以木薯品种新选048为材料,利用正交试验设计对DNA模板量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶量等因素进行优化,确定木薯最佳SCoT-PCR反应体系,并用其进行SCoT引物筛选。【结果】木薯最佳SCoT-PCR反应体系(20.0μL):模板DNA 60 ng,引物浓度0.30μmol/L,TaqDNA聚合酶1.5 U,Mg2+1.50 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L。利用该体系筛选出19条SCoT引物,能稳定扩增出数量多、清晰可辨且多态性丰富的条带。【结论】优化的木薯SCoT-PCR反应体系检测结果稳定,重复性好,且筛选出的19条引物均适用于木薯遗传多样性分析。     

葛根SCoT-PCR反应体系优化及引物筛选

[目的]优化葛根SCoT-PCR反应体系,筛选适用于葛根的SCoT引物,为利用SCoT分子标记进行葛根种质资源鉴定、遗传多样性分析及分子标记辅助育种提供技术支持.[方法]采用正交设计对SCoT-PCR反应体系中的DNA模板量、dNTPs浓度、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶量和引物浓度5个因素进行优化,利用最佳SCoT-PCR反应体系筛选出适用于葛根的SCoT引物,并对该体系进行验证.[结果]最佳葛根SCoT-PCR反应体系20.00μL:DNA模板50.00ng,dNTPs 0.25mmol/L,Mg2+1.50mmol/L,引物0.80μmol/L,TaqDNA聚合酶0.50U.利用该体系从36条SCoT引物中筛选出35条可从葛根中扩增出清晰条带的引物.使用3条引物对18个葛根材料进行PCR扩增,PCR产物表现出良好的重复性、稳定性和丰富的多态性.[结论]建立的最佳葛根SCoT-PCR反应体系和筛选获得的35条SCoT引物可适用于葛根种质资种鉴定、遗传多样性分析、相关分子标记开发等研究.     

制干辣椒SCoT-PCR体系优化及引物筛选

[目的]优化制干辣椒SCoT-PCR反应体系,为新疆制干辣椒种质资源、分子遗传学研究奠定基础.[方法]以制干辣椒为材料,采用L25(55)正交设计方法对影响制干辣椒SCoT-PCR反应体系的Mg2+、模板DNA、引物、DNA聚合酶、dNTPs等因素进行优化筛选.[结果]从25个正交设计组合中筛选获得5个组合的扩增效果较好,扩增条带丰富且清晰度适中、分散性好;经引物SC-12、SC-13、SC-19筛选,获得适用于制干辣椒材料的SCoT-PCR最佳反应体系20.0 μL,包含10×Buffer 2.0 μL、30 ng模板DNA 0.8 μL、2.0 mmol/L Mg2+ 1.8μL、1.0 μmol/L引物1.0 μL、1 U Taq DNA聚合酶0.4μL、0.25 mmol/L dNTPs 0.5 μL、ddH2O 13.5 μL.运用优化体系从80条引物中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的SCoT引物24条.[结论]优化的SCoT-PCR反应体系及筛选的引物可用于新疆制干辣椒种质鉴定、遗传图谱构建、遗传多样性的分析等.     

正交设计优化辣椒SRAP-PCR反应体系及引物筛选

以辣椒基因组DNA为模板,采用L16(45)正交试验设计,对SRAP反应体系中的5种关键因素(Taq DNA聚合酶、Mg2+、dNTPs、引物、模板DNA)进行优化,结果表明,辣椒SRAP-PCR最佳反应体系为:Taq DNA 聚合酶0.75 U、Mg2+ 0.6 mmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L、引物0.8 μmol/L、模板DNA 50 ng,总体积为10 μL.运用该体系对辣椒3份种质材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从198个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的35个引物组合.该体系的建立与多态性引物组合的筛选为SRAP标记技术在辣椒分子遗传学中的应用提供科学依据.     

甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系优化与引物筛选

以甘蔗黑穗病菌(Sporisorium scitamineum)交配型菌株基因组DNA为模板,在单因素优化试验的基础上,采用L16(45)正交试验设计,对影响甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系的Mg2+、dNTPs、引物、r Taq DNA聚合酶和模板用量5个因素进行优化,建立优化的甘蔗黑穗病菌SCoT-PCR反应体系:DNA模板12.50ng、dNTPs 0.17mmol/L、引物0.46μmol/L、Mg2+1.7 mmol/L、r Taq DNA聚合酶0.85U、1×Buffer(Mg2+free),总体积25μL。应用优化体系从30条SCoT引物中筛选扩增条带清晰且多态性丰富的10条引物,并利用这10条引物对10份地理来源和寄主来源不同的甘蔗黑穗病菌交配型菌株基因组DNA进行SCoT标记,结果共扩增出86条带,多态性比率为58.67%,平均每条引物扩增8.60条。UPGMA聚类分析结果表明:在遗传相似系数为0.75的水平上,可将10个菌株分为3类,聚类结果与菌株的地理来源有一定的相关性。     

藜麦SSR-PCR反应体系的优化及引物筛选

藜麦原产南美洲,因其全营养性被誉为"超级谷物"而广受重视,国内对藜麦的研究也逐步开展。本文通过研究SSR-PCR反应体系的五个主要成分对扩增结果的影响,建立了藜麦SSR-PCR反应的优化体系,即总体积10μL:DNA模板75ng, 10×PCR buffer(Mg~(2+)plus)1.2μmol/L、dNTP 0.8μmol/L、Taq酶0.2μmol/L,引物1.2μmol/L,余下部分由dd H_2O补足。利用优化后的SSR-PCR反应体系对引物进行筛选,从221对引物中成功筛选出条带清晰、特异性好的引物18对。优化后的SSR反应体系和筛选出的引物可为藜麦种质资源的遗传多样性研究、指纹图谱的建立等提供科学依据。     

籽用西瓜地膜覆盖及套种高产高效栽培技术

籽用西瓜,又名"籽瓜"、"打瓜",我县龙山、仇集、河桥等丘陵山区乡镇农民具有种植该作物的传统习惯.近几年,随着种植结构调整,籽瓜面积逐年扩大,生产水平快速提高,在栽培技术上,籽瓜已由露地栽培发展到地膜覆盖栽培,由一年一熟发展到多种形式的间套种,并取得了较高的经济效益.1999年全县籽瓜种植面积5万余亩,一般亩产瓜籽75～100 kg,产值600～800元,成本130元左右,亩纯收入470～670元.其中:籽瓜与棉花间作类型,亩增收皮棉40～50 kg,籽瓜与玉米或毛豆套种类型,可增收玉米400～450 kg或晚熟毛豆500～550 kg.全年亩纯收入可达800元以上.现将其主要高产高效栽培技术介绍如下:     

正交设计优化芒果SRAP-PCR反应体系及引物筛选

以芒果基因组DNA为模板,采用正交试验对模板DNA含量、引物浓度、2×Taq PCR Master Mix含量进行3因素5水平正交试验优化。结果表明,相关序列扩增多态性PCR(sequence related amplified polymorphism,SRAPPCR)最佳反应体系为:30 ng模板DNA、0.3μmol/L引物、10μL 2×Taq PCR Master Mix,总体积为25μL。运用该体系对10份芒果种质材料进行验证,证明该体系稳定可靠,并从100对引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性丰富的36对引物组合。     

早辣椒套种籽用西瓜良招

籽用西瓜，因其植株分枝而结果多，栽培粗放，不用整枝蔓，各地均可栽培。近年来，一些农户在露地早熟辣椒地中套种籽用西瓜，经科学培管，每亩可采鲜辣2000-2200公斤，还增收一季籽用西瓜，取得了良好的经济效益，其栽培良招如下：     

籽瓜养生保健作用研究

籽瓜具有较高的药用保健价值。文章对籽瓜营养成分、养生价值和目前已开发出的相关产品进行了概述,为全民养生保健提供科学资料。     

甘肃省不同产地籽瓜瓤皮成分分析

以甘肃省３个产地所产籽瓜为材料,进行基本成分、氨基酸及矿质元素分析。结果表明：水分含量以瓤最高（９７.３２％～９７.９８％）,内皮次之（９６．６４％～９６.８６％）,外皮最低（９１．４７％～９１．７６％）;灰分含量以瓤最低（０．２２％～０．２７％）,内皮次之（０．２５％～０．３９％）,外皮最高（０.４５％～０.６９％）;含酸量瓤中 ０.３０％～０.４３％,内皮 ０.３７％～０.６９％;还原糖和总糖含量,瓤为 １．５２％～３.０５％,内皮 ０．３４％～１．４２％;瓤和皮中蛋白质、纤维素和脂肪含量均分别低于０.４５％,０．３０％和０.０２５％,抗坏血酸含量为７４.４０～１３２．９０ｍｇ／ｋｇ,内皮中含量普遍较高。１８种氨基酸在籽瓜瓤皮中均有存在,其中必需氨基酸以缬氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸含量较高,非必需氨基酸以谷氨酸、丝氨酸和精氨酸含量较高。在所测的１４种矿质元素中,籽瓜瓤皮中常量元素以Ｋ、Ｃａ、Ｍｇ、Ｐ、Ｓ含量较高,微量元素以Ａｌ、Ｆｅ、Ｚｎ含量较高,矿质元素含量以外皮最高,内皮次之,瓤最低。不同产地所产籽瓜的成分含量均在一定程度上存在差异。     

油橄榄ISSR-PCR反应体系优化与引物筛选

[目的]对油橄榄ISSR-PCR反应体系进行优化,并筛选出多态性ISSR引物。[方法]以油橄榄嫩叶片提取的基因组DNA为模板,通过单因子试验针对反应体系主要因子Mg2+、dNTPs、引物浓度及模板用量进行油橄榄ISSR-PCR反应体系优化。[结果]优化的油橄榄ISSR-PCR反应体系为:总体系20μl中含1×Taq Buffer,3.5 mmol/L Mg2+,0.4 mmol/L dNTPs,1.0μmol/L引物,1.0 U Taq DNA聚合酶,20 ng DNA模板。反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,52～55℃退火30 s,72℃延伸2 min,40个循环;72℃延伸10 min,4℃保存。同时利用上述反应体系和反应程序筛选出了扩增稳定、多态性高、扩增条带清晰的ISSR引物11条。[结论]为进一步油橄榄种质资源的多样性研究和品种鉴定奠定了基础。     

打瓜白粉病药剂防治技术研究

[目的]针对打瓜白粉病在新疆严重危害的现状,研究6种杀菌剂对打瓜白粉病的田间防治效果.[方法]采用田间小区试验,比较6种药剂的防效差异.[结果]两次施药后第14 d,10;苯醚菌酯悬浮剂5000倍液防效最高,防效达73.80;.10;苯醚菌酯悬浮剂10 000倍液、50;醚菌酯水分散粒剂3 000倍液、400 g/L氟硅唑乳油7 500倍液和25;乙嘧酚悬浮剂1 500倍液的防效也较好,药后14 d分别达69.69;、69.56;、68.48;和67.32;.[结论]4种药剂防效较好,推荐在生产中交替使用.提出了打瓜白粉病防治原则,明确了该病的初侵染来源和防治始期.防治打瓜白粉病的关键是抓住发病始期,选用高效杀菌剂及时喷药.     

牡丹ISSR-PCR反应体系正交优化设计

以“凤丹(”Paeonia ostii)基因组DNA为模板,采用正交试验设计方法,研究牡丹ISSR反应体系的影响因素,建立了适合牡丹的ISSR反应体系及程序。10 lμ反应体系为:1×反应缓冲液,2.5 mmo1/LMg2+,0.4 mmo1/LdNTPs,1.0 UTaq聚合酶,0.75μmol/L引物,10～20 ng模板DNA。反应程序为:94℃预变性3 min;94℃变性45 s,45～60(℃不同引物退火温度各异)复性45 s,72℃延伸90 s,35个循环;72℃延伸7 min;4℃保存。通过梯度退火试验,确定不同引物的退火温度。     

降低西瓜试管苗玻璃化因素的优化

以西瓜为材料,采用L27(313)多因素正交设计,研究不同的基因型材料、培养温度、光照强度、培养基中BA、琼脂、蔗糖、IAA和Phl.浓度对试管苗玻璃化的影响.结果表明:培养温度的影响达极显著水平(P＜0.01),玻璃化频率15℃>35℃>25℃,15℃与25℃、35℃间差异显著(p＜0.05);材料的基因型、光照强度、培养基中BA、琼脂和蔗糖浓度的影响达显著水平,玻璃化频率2n>3n>4n,4n与2n、3n间差异显著;1000 Lx>2000 Lx>3 000 Lx,1 000 Lx与2 000、3 000 Lx间差异显著;BA 4 mg∕L>2 mg∕L>1 mg∕L,1 mg∕L与2 mg∕L、4 mg∕L间差异显著;琼脂5 g∕L>8 g∕L>11 g∕L,5 g∕L与8 g∕L、11 g∕L间差异显著;蔗糖10 g∕L>30 g∕L>50 g∕L,10 g∕L与30 g∕L、50 g∕L间差异显著.在继代培养中,降低试管苗玻璃化的综合措施是:培养温度25～35℃,光照强度2000～3000 Lx,培养基中BA≤1 mg∕L,IAA≥1 mg∕L,Phl.≥2 g∕L,琼脂8～11 g∕L,蔗糖30～50 g∕L.     

用正交设计法优化辣椒ISSR-PCR反应体系

采用正交设计L16(45)对辣椒ISSR-PCR反应体系的5个因素(Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs、引物浓度)在4水平上进行优化试验。结果表明,最佳反应体系为:在25μl总反应体系中,含1×PCR缓冲液、2.0 mmol Mg2+、1.5 unitTaqDNA聚合酶、0.25 mmoldNTP、0.48μmol引物、120 ng模扳DNA。扩增程序为:95℃预变性5 min;94℃变性45 s,51℃退火1 min,72℃延伸2min,进行38个循环;最后72℃延伸10 min。新优化的辣椒ISSR-PCR反应体系和程序有很好的重复性和稳定性。此研究为今后利用ISSR技术对辣椒进行种质资源分类、遗传图谱构建和基因定位提供了一个较理想的应用方案。     

利用正交设计优化白桦的SSR-PCR反应体系

利用正交设计L16(45)对白桦SSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2 ,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,筛选出各反应因素的最佳水平,建立了白桦SSR-PCR反应的最佳体系(20μL):DNA100ng,Mg2 浓度为3mmol·L-1,Taq酶0.5U,dNTP浓度为0.5mmol·L-1,引物浓度为0.4μmol·L-1。对白桦SSR-PCR最佳反应体系进行了梯度退火温度,得到的最佳退火温度为59.9℃。