Utilization of potato genetic resources in variety development

Potato varieties of Europe, widely grown prior to the late blight epidemic of the 1840s, were apparently derived mainly from ChileanSolanum tuberosum Group (Gp) Tuberosum and with contributions from Gp Andigena. A small number of these old varieties had field resistance and consequently survived the late blight. These survivors, along with a limited number of 19^th and early 20^th century introductions, provided the very narrow genetic base for our modern potato variety development. Beginning in the first half of the 20th century, resistance to diseases and pests from exotic species and primitive relatives was backcrossed into the existing parental stocks, with little improvement in broadening of the genebase. By the 1980s, 77% of European and somewhat fewer North American varieties had genes, derived by backcrossing, fromS. demissum (late blight resistance) and Andigena (resistance to cyst nematode). Broadening of the Tuberosum genebase was undertaken in 1959 by creating long-day adapted Neo-Tuberosum (N-T) from large populations of Andigena. This took six or more cycles of recurrent mass selection. Simmonds, in England, was the first to begin this work, followed shortly after by Plaisted, in the U.S., and Tarn, in Canada. Varieties with N-T in their pedigrees include the New York releases “Rosa”, which is 50% N-T, and “Eva”, 25% N-T. The Tuberosum genebase has also been broadened with diploid Gp Phureja resulting in the releases of “Yukon Gold,”with yellow flesh and high internal quality, and “NorValley,”a chipper with resistance to cold sweetening. Over 5000 accessions of about 150 wild species are available to breeders from the U.S. Department of Agriculture, National Research Support Project 6 (NRSP-6) genebank. Many of these accessions have been evaluated for resistance to diseases and pests as well as other important traits. Six genebanks in other countries also have many accessions for breeders. These seven collections are a great source of valuable traits for breeding, but remain under-utilized, mainly because of the time and additional resources required in eliminating the “wildness”characters associated with the desired traits. “Pre-breeding”is needed to help breeders utilize the many needed genes and alleles in the wild species. There now are two projects with pre-breeding as an objective in the U.S., one at Madison, WI, and the other at Prosser, WA. Resistance to cold sweetening (low sugar build up in cold storage) has been backcrossed from several wild species into the Tuberosum background, as has resistance to late blight, the Columbia rootknot nematode, and the potato leafroll virus (PLRV). Resistance to potato virus Y (PVY) and PLRV obtained from N-T has been incorporated into Tuberosum parental stocks. Durable resistance to late blight in Polish breeding stocks, withS. demissum andS. stoloniferum background, and in improved Bolivian and Peruvian Andigena has also been utilized by North American programs.     

Diploid potato germplasm derived from wild and land race genetic resources

Diploid cultivated species, haploids derived from tetraploid cultivars, and their wildSolanum relatives were used to generate various diploid potato genetic stocks. These stocks have significant value in potato breeding because: 1) genetic diversity in the potato population can be kept variable with the diploid germplasm which confers genetic variation from wild and cultivated species; 2) crossability of this diploid germplasm is facilitated by the function of 2n gametes; and 3) high levels of pest resistances originating from the process of introgression of the wild and cultivated genetic resources can be used to improve the tetraploid cultivated potato genepool.     

Tissue culture storage of potato germplasm. 1. Minimal growth storage

Summary The interval between transfers of organ cultures derived from fifteen potato cultivars has been extended from four weeks to twelve months or longer. Reduction of temperature from 22 °C to 6–12 °C particularly with temperature cycling (6 °C during an 8-hour nigh and 12 °C during a 16-hour day) was successful. Increasing medium volume and sucrose concentration from 3 to 8% also increased survival after long storage periods. There was variation between species which was partly related to the ability to form tubers in culture. Highest survival occurred of cultures of the frost-tolerant speciesS. curtilobum andS. juzepcjukii. However, 60% or more of cultures from all the species were capable of new growth on transfer after twelve months storage under the temperature cycling regime.

---

Zusammenfassung Das Intervall zwischen den Uebertragungen von Organkulturen, die von fünfzehn Kartoffelsorten stammen, wurde von vier Wochen auf zw?lf Monate oder l?nger ausgedehnt. Die fünfzehn Züchtungen schlossen Muster von vier Ploidygraden ein und deckten den Schwankungsbereich innerhalb kultivierter Kartoffeln. Nodienkulturen wurden routinem?ssig alle vier Wochen übertragen und auf N?hrboden nach Murashige & Skoog (1962) ohne Hormone bei 22 °C bei einer Photoperiode von 16 Stunden herangezogen. Die nach der Lagerung überlebenden Pflanzen wurden auf frischen N?hrboden übertragen und dienten der Produktion der neuen Anzucht. 61% der Kulturen überlebten zw?lf Monate bei 6 °C, verglichen mit 14 % bei 22 °C, 17 % bei 2 °C und 39 % bei 10 °C. Doch überlebten von den sieben verwendeten Arten nur die Kulturen von vier Arten achtzehn Monate. Ein Temperaturzyklus (6 °C Nacht, 12 °C Tag) erh?hte die Ueberlebenschance auf 82 % und auf mehr als 60 % bei den k?lteempfindlichen ArtenS. goniocalyx, S. tuberosum undS. chaucha. Eine Erh?hung des N?hrbodenvolumens pro Kultur von 3,5 ml auf 60 ml erm?glichte das Ueberleben bis zu 88 % bei 10 °C. Dagegen war das Abdichten der Kulturen, um eine Verdunstung zu verhüten, verheered. Nur 8 % der Kulturen waren nach zw?lf Monaten noch am Leben. Die Anwendung von induzierenden Bedingungen, um Knollen in vitro (9 Std. Tag 10 °C) zu erzeugen, verbesserte generell das Ueberleben bei 10 °C von 42 % bis 56 %. Alle Arten bildeten Knollen, ausgenommenS. goniocalyx undS. chaucha. Diese Bedingungen erlaubten eine starke Verbesserung im Ueberleben der Tuberosum-Züchtungen, n?mlich von 24 % auf 56 %. Die Entfernung der organischen N?hrstoffkomponenten inklusive Saccharose und die Verwendung von N?hrb?den mit tieferen Salzkonzentrationen als Murashige & Skoog (1962) blieben ohne Erfolg. Die Errichtung von Kartoffel-Genbanken in Form von Gewebekulturen ist m?glich, wenn einfache Methoden zur Verl?ngerung der Zeitintervalle zwischen den Uebertragungen angewendet werden. Das Material kann in einer sterilen, krankheitsfreien Form vorr?tig sein und kann, wenn gewünscht, ohne Risiko der Infektion durch systemische Pathogene rasch vermehrt werden.

---

Résumé L'intervalle entre la mise en culture d'organes issus de quinze variétés de pomme de terre et leur transfert a été étendu de quatre semaines à douze mois ou plus. Ces quinze variétés comprenaient quatre niveaux de plo?die et couvraient la gamme des variations observées à l'intérieur des pommes de terre cultivées. Les explantats issus des cultures ont été transférés régulièrement toutes les quatre semaines et cultivés sur le milieu de Murashige & Skoog (1962) sans hormones, à 22 °C sous une photopériode de 16 heures. Les cultures étaient faites une à quatre semaines avant leur transfert dans les conditions expérimentales. La survie des explantats s'est exprimée par la production d'une nouvelle croissance sur le milieu frais. La plupart (61 %) des explantats ont survécu douze mois à 6 °C, alors que la réussite n'a été que de 14 % à 22 °C, 17 % à 2 °C et 39 % à 10 °C; des sept espèces utilisées, seulement quatre ont survécu dix huit mois. Une alternance de températures (6 °C la nuit et 12 °C le jour) a amélioré le taux de survie, l'amenant à 82% et à 60 % pour les espèces thermosensibles:S. goniocalyx, S. tuberosum etS. chaucha. Une augmentation de la quantité du milieu de culture (3.5 ml d'une part, 60 ml d'autre part) a élevé le taux de survie à 88 % à 10 °C, mais la fermeture des récipients de culture pour limiter l'évaporation a eu un effet désastreux; seulement 8 % des explantats étaient en vie après 12 mois de culture. L'utilisation de conditions inductives pour la tubérisation in vitro (9 h de jour à 10 °C) a eu un effet favorable sur le taux de survie, de 42 à 56%; des tubercules se sont formés chez toutes les espèces, à l'exception deS. goniocalyx etS. chaucha. Ces conditions ont apporté une nette amélioration de la survie des variétés, de 24 à 56 %. La suppression des constituants organiques du milieu, y compris du saccharose, et l'utilisation d'un milieu moins concentré en sels que celui de Murashige & Skoog (1962) ont été infructueux. La création pour la pomme de terre d'une banque de gènes sous la forme de cultures de tissus est possible si l'on emploie ces méthodes simples de prolongation des périodes entre les transferts. Le matériel peut être utilisable à l'état stérile, exempt de virus et peut être multiplié rapidement, à l'abri de tout risque d'infection systémique si cela est nécessaire.

     

Tissue culture storage of potato germplasm. 2. Use of growth retardants

Summary The interval between transfers of organ cultures from seventeen potato cultivars has been extended from several weeks to twelve months by the addition of growth retardants to the medium. The presence of abscisic acid or mannitol in the medium increased the survival of cultures from 15 to 60% after twelve months, and in combination with a reduced temperature regime up to 73% of cultures survived. B995 and Phosphon D added to the medium had less effect and trans-cinnamic acid was ineffective. In the presence of abscisic acid and mannitol cultures became stunted with short internodes and poor root development but normal growth occurred on transfer to retardant-free medium

---

Zusammenfassung Das Intervall zwischen den Uebertragungen von Organkulturen, die von siebzehn Kartoffelsorten stammen, wurde von vier Wochen auf zw?lf Monate oder l?nger ausgedehnt. Die fünfzehn Züchtungen schlossen Muster von vier Ploidygraden ein und deckten den Schwankungsbereich innerhalb kultivierter Kartoffeln. Nodienkulturen wurden routinem?ssig alle vier Wochen übertragen und auf N?hrboden nach Murashige & Skoog (1962) ohne Hormone bei 22 °C bei einer Photoperiode von 16 Stunden herangezogen. Die nach der Lagerung überlebenden Pflanzen wurden auf frischen N?hrboden übertragen und dienten der Produktion der neuen Anzucht. Der durchschnittliche Prozentsatz Ueberlebende nach 12monatiger Lagerung bei 22 °C wurde von 17 % auf 66 % bzw. 61 % mit 5 mg/l bzw. 10 mg/l Abscisins?ure im N?hrboden verbessert. Eine Erh?hung des osmotischen Druckes durch die Beifügung von Mannit erm?glichte das Ueberleben in einem ?hnlichen Ausmass, 3 % und 6 % Mannit erh?hte die Zahl der Ueberlebenden auf 64 % und 61 %. Die andern Hemmstoffe waren weniger wirksam. Nach 6 Monaten Lagerung war die Ueberlebensrate von 45 % auf 60 % mit 50 mg/l B995 und 10 mg/l Maleins?urehydrazid und auf 85% mit 1 und 3 mg/l Phosphon D verbessert; trans-Zimts?ure war unwirksam. Eine Kombination von erh?htem N?hrbodenvolumen (3,5 ml auf 60 ml) mit 20 mg/l Abscisins?ure im N?hrboden verbesserte die Ueberlebensrate von 26 % auf 73 % nach 12 Monaten Lagerung. 73 % der Kulturen wurden auch mit 10 mg/l Abscisins?ure in Verbindung mit einem zyklischen Temperaturregime erzielt. Wirksame Konzentrationen von Hemmstoffen erzeugten eine anomale Pflanzenmorphologie. Die Pfl?nzchen waren verkümmert mit kurzen Internodien und schwacher Wurzelentwicklung. Durch die Uebertragung auf frischen, hemmstoffreien N?hrboden wurde jedoch ein normales Wachstum erzielt. Die Beifügung von Hemmstoffen, besonders Abscisins?ure und Mannit, erlaubt die Lagerung von Kartoffelkulturen bei normalen Raumtemperaturen für Kulturen (22 °C) und ist auch in Kombination mit reduzierten Temperaturen wirksam.

---

Résumé L'intervalle entre la mise en culture d'organes issus de dix-sept variétés de pomme de terre et leur transfert a été étendu de quatre semaines à douze mois ou plus. Ces quinze variétés comprenaient quatre niveaux de plo?die et couvraient la gamme des variations observées à l'intérieur des pommes de terre cultivées. Les explantats issus des cultures ont été transférés régulièrement toutes les quatre semaines et cultivés sur le milieu de Murashige & Skoog (1962) sans hormones, à 22 °C sous une photopériode de 16 heures. Les cultures étaient faites une à quatre semaines avant leur transfert dans les conditions expérimentales. La survie des explantats s'est exprimée par la production d'une nouvelle croissance sur le milieu frais. Le pourcentrage moyen de survie après une conservation de 12 mois à 22 °C était amélioré de 17 à 66 % et 61 % avec respectivement 5 mg/l et 10 mg/l d'acide absissique dans le milieu. Une augmentation de la pression osmotique occasionnée par l'addition de mannitol a amélioré la survie dans des proportions analogues, de 3 et 6 % à 64 et 61 %. Les autres retardateurs de croissance ont été moins efficaces. Après 6 mois de conservation le taux de survie est passé de 45 à 60 % avec 50 mg/l de B995 et 10 mg/l d'hydrazide maléique et à 85 % avec 1 et 3 mg/l de phosphon D; l'acide trans-cinnamique n'a pas été efficace. L'augmentation de la quantité de milieu (de 3.5 ml à 60 ml) combinée avec l'addition de 20 mg d'acide absissique a amélioré le taux de survie de 26 à 73% après 12 mois, et 73 % également avec 10 mg/l lorsque le cycle des températures a été alterné. La concentration des retardateurs de croissance avait pour effet de donner des anomalies morphologiques aux cultures. Les plantules étaient rabougries avec de courts entre-noeuds et peu de racines. Le transfert de celles-ci sur un milieu frais sans retardateur de croissance leur rendait une croissance normale. L'addition de retardateurs de croissance, notamment d'acide absissique et de mannitol, convient à la pomme de terre pour la conservation des cultures à la température ambiante (22 °C) et est également efficace dans le cas de températures plus basses.

     

The potato genetic resources held in trust by the International Potato Center (CIP) in Peru

Summary Potatoes account for about half of the world's annual output of all roots and tubers, and since the early 1960s, the increase in area planted in developing countries has been higher than for any other major food crop. Annual world production currently totals 274 million tons on 18 million hectares, with China and India accounting for 22 percent of this total. In less than a generation, most of the world's potatoes will be harvested in Asia. Africa, or Latin America, where the potato is becoming an increasingly important source of food and its cultivation provides rural employment and income for the growing population. The rapid emergence of processing facilities for the fast food industry, and the indirect influence of improved rice and wheat irrigation systems have also contributed to the expansion of potato production in Asia. The demand is strongest for processing quality potatoes that supply the fast food chains in large urban concentrations where processed potato products fetch top prices. Such increasing demand is putting strong pressure on national and international breeding institutions to produce high quality processing varieties well adapted to the wide array of agro-ecological conditions, in South East Asia in particular. The lack of adequate seed systems in this region is the single most important impediment to the expansion of the cultivation of the crop. Unfavourable agro-ecological conditions interfere with the production of high quality seed in most Asian potato growing areas, and the availability of high quality seed of the right quantity at the right time remains the most consequential bottleneck to efficient potato production. The seed issue is also the principal problem of potato cultivation in the traditional potato growing areas of Central and Eastern Europe. A review of “the development of integrated systems for large scale propagation of elite plants using in vitro techniques” with specific focus on “potato seed production by tissue culture” is therefore very timely. It provides a platform for analysis and discussion of solutions for some of the most common seed problems facing the potato industry in many parts of the word. All efforts to improve the potato crop and to solve the associated seed problems begin with the right choice and use of the available genetic resources. Resistance to certain pests and diseases has a direct bearing on the success of a seed program. Multiple virus resistance, in particular, would ensure a halt to seed degeneration caused by an accumulation of viruses and thus greatly prolong the ability of seed producers and ware potato growing farmers to grow their crops at great economic benefit. This paper will therefore deal with the current status of the World Potato Collection held in trust by the International Potato Center (CIP) in Peru by presenting up-to-date information on its classification, phytosanitary status and availability of the genetic material and its evaluation data to the breeders worldwide.     

Chromosome number doubling of 2x potato lines with diverse genetic background through tissue culture

Summary Twelve 2x potato clones of diverse genetic origin were tested for doubling of their chromosome number by placing stem and petiole segments in the regeneration medium (Hermsen et al., 1981). Eleven of the 12 clones yielded doubled plants (2n=4x=48). The percentages of regenerated tetraploid plants varied from 0 to 77% among the genotypes tested. The high rates of successful doubling from many genetically different clones, demonstrates the applicability of this method as a means to convert valuable 2x potato germplasm into the 4x level.     

The need for international research programmes on some potato pathogens

Summary Growers are being faced with a conflic between the effects of specialization on increasing pest and disease problems (particularly late blight, Colorado beetle, cyst nematodes and tuber moth), and public opinion that will force them to reduce the use of pesticides. For this disease and these pests international research programmes are needed to develop parental lines and cultivars with durable resistance that can be used world-wide. This account is based on ‘The potato in world perspective’, a paper read at the First World Potato Congress held on 8–10 July 1993 in Charlottetown, Prince Edward Island, Canada.     

Growing potato plants by the water culture technique

A water culture technique was developed for the study of the nutrient requirements of the potato plant. Tuber formation was avoided by pinching off the stolons as they developed and hence vegetative growth could be studied without the complication of abnormal tuber formation in the culture solution. The K deficiency symptoms obtained by this method were essentially the same as those observed for field grown plants.     

Factors affecting the culture in vitro of potato meristem tips

Summary Meristem tips of an Italian cultivar were cultured in a modification of Murashige and Skoog's medium. Light spectrum and intensity affected rooting and vigour of plantlets. The best results were obtained with 4000-lux fluorescent lamps with a spectrum roughly similar to that of daylight but richer in red. Agar did not affect the proportion of explants rooting but changed the root system appearance. The presence of gibberellic acid was important for rooting. Rooting of plantlets cultured on liquid substrates devoid of gibberellic acid was not dependent on the size of the explants. Sometimes teratomata developed in liquid substrates and occurred together with a small downward pH shift, while the normal development was always accompanied by a stronger pH shift to acid values

---

Zusammenfassung Es wurden einige Faktoren, die die Entwicklung von Meristemspitzen der Kartoffel beeinflussen, untersucht. Meristemspitzen des italienischen KultivarsRicciona di Napoli wurden auf einem abge?nderten Murashige & Skoog-Medium angezogen. Die Versuche wurden w?hrend fünf Monaten, September bis Januar, durchgeführt. Das Lichtspektrum beeinflusste Bewurzelung und Wuchskraft der Pfl?nzchen (Tabelle 1). Fluoreszenzlampen mit einem ann?hernd gleichen Spektrum wie das Tageslicht, aber reicher an roten Strahlen, ergaben die besten Resultate. Die Lichtintensit?t war ein sehr wichtiger Faktor für die Wuchskraft der Pfl?nzchen (Tabelle 2); bei 4 klx (kilolux) erzeugten die Pfl?nzchen normale Bl?tter und ein gut entwickeltes Wurzelsystem, w?hrend eine Beleuchtung von 2 klx nur ein schwach oder nicht entwickeltes Wurzelsystem und eine geringe Blattausdehnung bewirkte (Abb. 1). Agar hatte keinen Einfluss auf die Bewurzelung, aber es ver?nderte das Wurzelbild: auf flüssigen N?hrl?sungen kultivierte Meristemspitzen erzeugten ein gut entwickeltes Wurzelsystem und kr?ftigere Pflanzen als solche auf Agar-N?hrboden (Tabelle 3, Abb. 2). Das Vorhandensein von Gibberellins?ure (GA₃) war für die Bewurzelung sehr wichtig, obwohl einige Pfl?nzchen auch auf N?hrboden ohne GA₃ wuchsen (Tabelle 3). Die Bewurzelung von Pfl?nzchen auf flüssigen N?hrl?sungen ohne GA₃ war nicht von der Gr?sse der Meristemstücke anh?ngig (Tabelle 4); es bestand kein gesicherter Unterschied in der Bewurzelung zwischen den Meristemspitzen mit zwei Primordial-Bl?ttchen und jenen mit vier Bl?ttchen. Manchmal entwickelten sich in den flüssigen N?hrl?sungen Teratome (Abb. 3 und 4), die zusammen mit einer leichten Abw?rtsverschiebung des pH auftraten, w?hrend die normale Entwicklung stets von einer st?rkeren pH-Veranderung gegen das saure Milieu hin begleitet war.

---

Résumé Les auteurs ont recherché les facteurs affectant le développement de pointes méristématiques de pomme de terre. Ils ont cultivé des sommets méristématiques de la variété italienneRicciona di Napoli sur un milieu de Murashige et Skoog modifié. Les essais se ont étendus sur une période de cinq mois, de septembre à janvier. Le spectre de lumière influence l'enracinement et la vigueur des plantules (tableau 1); les lampes fluorescentes avec un spectre de lumière approximativement semblable à la lumière du jour, mais enrichi en rayons rouges, ont donné les meilleurs résultats. L'intensité lumineuse constitue un facteur très important de la vigueur des plantules (tableau 2): 4 klx (kilolux) donnent des plantules montrant des feuilles normales et un système radiculaire bien développé, tandis qu'avec 2 klx, le système radiculaire est peu ou pas développé et le développement foliaire réduit (fig. 1). L'agar n'influence pas l'enracinement mais modifie l'aspect du système radiculaire: les sommets méristématiques développés sur substrats liquides produisent un système radiculaire bien développé et des plantes plus vigoureuses que celles qui poussent sur substrats agar (tableau 3, fig. 2). La présence d'acide giberellique (GA₃) s'est révélée importante pour l'enracinement, bien que quelques plantules se sont développées sur des substrats qui n'en contenaient pas (tableau 3). L'enracinement de plantules cultivées sur substrats liquides dépourvus d'acide giberellique ne dépend pas du volume des ‘explants’ (tableau 4): aucune différence significative ne s'est révélée dans l'enracinement entre les pointes méristématiques portant deux ébauches foliaires et des pointes méristématiques portant 4 ébauches foliaires. Quelquefois des formations tératologiques se sont développées dans les substrats liquides (fig. 3 et 4) et se sont manifestées en même temps qu'une faible augmentation du pH, tandis que le développement normal a toujours été accompagné d'une évolution du pH plus marquée vers les valeurs acides.

     

Field performance of potato shoot-tips proliferated in culture

Summary Plants of cvs Kennebec and Pontiac were propagated in petri dishes or flasks and rooted and transplanted into the field as cuttings. Plants from eight week old cuttings gave higher final yields than those from six-week-old cuttings. The field performance of Pontiac plants propagated in petri dishes was superior to that of plants propagated in flasks. Yields from cuttings were between 30% and 97% of those of plants from tubers.     

Castor genetic resources: A primary gene pool for exploitation

Castor (Ricinus communis L., 2n = 2x = 20) is grown across the world in tropical, sub-tropical and warm temperate regions. Castor oil has more than 700 industrial uses and its global demand is rising constantly at 3-5% per annum. Vast castor germplasm collections are being conserved in more than 50 genebanks across the world. But consolidated reports on their status and value are not available to tap their potential. Utilization of vast global germplasm could only be enhanced when the information on germplasm is shared and seed are exchanged. Therefore, the review provides information on current status of global castor collections and an overall view of potential of these collections besides highlighting the challenges and opportunities facing germplasm. This report serves as a unique starting point for the global castor community to build strong multinational collaborations to facilitate knowledge and resource integration and coordinated research planning.     

Proteinase inhibitor proteins as genetic markers for identifying high protein potato clones

A preliminary screening method is described for selecting potato clones with a high probability of their having high protein content. The clones were selected on the basis of their total concentrations of two proteinase inhibitor proteins, Inhibitors I and II. The top 10% of clones selected for high inhibitor content included 80% of the clones that contained the highest total protein concentrations. The inhibitor concentrations used for screening were determined by a simple immunological assay directly utilizing potato juice. The applicability of the method was demonstrated with data from 194S. andigina clones. Ten of the 194 clones contained over 8% total protein and 8 were among the upper 10% of the clones preselected by inhibitor concentrations. Two clones were identified that exhibited over 10% total protein, dry weight.     

Thermotherapy and tissue culture for elimination of potato virus X (PVX) in Mexican potato cultivars resistant to late blight

Plants from 6 potato cultivars uniformly infected with potato virus X (PVX) were exposed to darkness and gradual temperature increases from 37 to 40 C, during a two-week period. This was followed by shoot tip culture to obtain virus free individuals. The procedure was effective in obtaining PVX-free propagation material from 4 of the 6 varieties. Differences were observed in the response of the cultivars to the heat and to thein vitro culture. At least one plant from every cultivar showed repeated negative serological reaction against PVX after the tissue culture regeneration, except Atzimba and Montsama. Tollocan and Murca were the most resistant to heat, developed better duringin vitro culture and resulted in the largest number of PVX-negative plants. Rosita was intermediate, and Juanita did not adapt to heat stress.