通草对泌乳期小鼠泌乳性能及泌乳相关内分泌激素的影响

为了从内分泌系统角度探讨通草对泌乳动物乳腺泌乳的调节机制,采用高剂量12 g(生药)/mL和低剂量4 g(生药)/mL通草提取物灌服小鼠,检测其对泌乳期小鼠泌乳量的影响,应用ELISA法检测小鼠血清和乳腺组织匀浆液催乳素(PRL)、雌二醇(E_2)、孕酮(P)和生长激素(GH)的水平,并利用Western blot技术检测乳腺组织β-酪蛋白(β-casein)、催乳素受体(PRLR)、雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、孕酮受体(PR)、生长激素受体(GHR)蛋白的表达量。结果表明,与对照组(等量生理盐水)相比,高剂量和低剂量通草提取物均显著提高了泌乳期小鼠的泌乳量(P0.05),并明显促进小鼠乳腺β-酪蛋白的表达(P0.05)。通草提取物能显著提高泌乳期小鼠血清及乳腺组织PRL、E_2、GH的水平(P0.05)。与对照组相比,高剂量组和低剂量组小鼠血清PRL、E_2、GH的水平分别显著提高112.50%、129.15%、223.48%及49.84%、68.18%、100.76%。高剂量组和低剂量组小鼠乳腺PRL、E_2、GH的水平分别显著提高60.68%、269.35%、105.19%和32.27%、129.03%、53.68%。高剂量和低剂量通草提取物能明显提高乳腺组织PRLR、ERα、ERβ、GHR的表达量(P0.05),但对血清P及乳腺组织P、PR无显著性影响(P0.05)。可见,通草能通过提高小鼠泌乳相关内分泌激素水平及上调乳腺组织PRLR、ERα、ERβ和GHR的表达,进而促进小鼠乳腺泌乳。     

芦丁对哺乳大鼠乳腺发育及相关激素水平与受体表达量关系的影响

研究芦丁对哺乳母鼠乳腺发育、泌乳相关激素水平及其受体表达量的影响。试验选择18只wistar哺乳母鼠,随机分为3组,分别为对照组（LacCon组）每日每只灌喂生理盐水（2ml）1次;芦丁组（Lac Rut组）每日每只灌服芦丁（60mg／kg,BW）1次;雌二醇组（LacEst组）每周每只肌注（60μg／kg,BW）1次;从哺乳第4天开始连续给药2周,基础日粮相同。检测哺乳母鼠血浆与乳腺组织中雌激素（雌二醇,E2）、孕激素（P）、催乳素（PRI,）和生长激素（GH）的含量,乳腺组织中雌激素受体（雌激素α受体,ERR）、孕激素受体（PR）、催乳素受体（PRLR）和生长激素受体（GHR）的表达量,并进行乳腺组织切片组织形态学观察。试验显示：E2、PRL和GH在血浆与乳腺组织里的含量都表现为Lac—Est组〉Lac～Rut组〉LacCon组（P〈0．05）;P含量组间差异不显著（P〉0．05）;ER、PR、PRLR和GHR在乳腺组织中的表达量均为Lac—Est组〉LaCRut组〉Lac—Con组（P〈0．05）;乳腺腺泡／管腔直径统计显示Lac-Est组和LacRut组高于LacCon组（P〈0．05）,LacEst组与LacRut组差异不显著（P〉0．05）。试验结果表明,芦丁能够提高哺乳母鼠体内E2水平,促进PRL和GH分泌,诱导ER、PR、PRLR和GHR的表达,具有弱雌激素样作用功效。     

生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响

将泌乳期大鼠分为对照组、CS组和SS组,利用RT-PCR法对大鼠乳腺组织斯钙素基因进行检测,分析生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响。结果表明:乳腺中有STC1表达,无STC2表达。生长抑素对泌乳期大鼠乳腺斯钙素基因表达起下调作用,半胱胺作用相反。以上结果提示生长抑素和半胱胺可能参与乳腺钙代谢的调节,且通过STC1发挥作用。     

藏猪妊娠期乳腺形态和乳腺发育的标志蛋白表达、相关激素及信号通路的变化

目的 研究藏猪妊娠期乳腺形态和乳腺发育标志蛋白、相关激素及信号通路的变化。方法 选取妊娠33、50、75和90 d的藏猪,屠宰后采集血清和第3、4对乳腺。利用HE染色观察乳腺形态变化;使用ELISA试剂盒检测血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)和催乳素(PRL)等乳腺发育相关激素的水平;利用Western blot方法检测乳腺发育标志蛋白[包括ETS相关的转录因子5 (Elf-5)和脂滴包被蛋白2 (PLIN2)],以及激素受体[包括雌激素受体(ERα)、催乳素受体(PRLR)和孕酮受体(PR)]的表达,并检测乳腺发育相关信号通路PI3K/AKT和Jak2/STAT5的激活情况。结果 从乳腺形态观察可知,妊娠33 d时乳腺中主要是导管结构,50 d时出现少量腺泡结构,75 d时腺泡快速发育、腺泡增多,90 d时乳腺中主要是腺泡结构;乳腺发育标志蛋白Elf-5和PLIN2在妊娠50 d蛋白表达开始升高,75和90 d时均具有很高的表达量;血清中E2、P和PRL质量浓度随着妊娠的进行而升高,90 d时E2达到42.82 ng/L,P达到36.76 μg/L,PRL达到66.53 μg/L;ERα和PRLR在妊娠50 d时表达量升高,PR在75 d时表达量升高。此外,Jak2/STAT5和PI3K/AKT信号通路在妊娠75和90 d时被显著激活。结论 藏猪妊娠过程中,乳腺在50 d时开始腺泡发育、75 d时乳腺进入腺泡快速发育期、90 d时发育程度更高,同时,伴随着血清中乳腺发育相关激素和乳腺中激素受体表达的显著升高,以及乳腺发育相关通路PI3K/AKT和Jak2/STAT5的激活。     

奶山羊SCD基因CDS区的克隆、序列分析及过表达

【目的】研究奶山羊硬脂酰辅酶A去饱和酶基因（stearoyl-CoA desaturase,SCD）在乳腺上皮细胞中对不饱和脂肪酸合成过程相关基因的调控及对细胞脂肪酸组成的影响。【方法】用RT-PCR方法从西农萨能羊乳腺组织中扩增SCD基因,进行序列分析和组织表达谱分析;构建重组腺病毒质粒,进行包装和扩增后,感染体外培养的奶山羊原代乳腺上皮细胞,实时定量检测相关基因的表达,western blotting检测蛋白变化,气相色谱-质谱联用分析细胞内脂肪酸组成变化。【结果】①获得了全长1 080 bp的山羊乳腺SCD基因CDS（GenBank登录号：GU947654）并对其进行了生物信息学分析;②奶山羊SCD基因在乳腺、肺和皮下脂肪组织中高表达,而在心脏、瘤胃和卵巢组织中的表达量较低;③成功构建了奶山羊SCD基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度的重组病毒液,重组腺病毒感染原代乳腺上皮细胞后,检测结果表明细胞中SCD基因过表达极显著,FASN、H-FABP、LEPR和LXRα等基因表达下调,而PPARγ和LPL基因的表达量显著性增加;④棕榈酸和硬脂酸的含量下降,不饱和脂肪酸含量上升。【结论】SCD基因在奶山羊乳腺中发挥着重要作用,FASN、H-FABP、LEPR、LXRα、PPARγ和LPL基因的表达与其相关,这些基因共同影响乳脂中脂肪酸的组成。     

不同发育期大鼠乳腺组织中雌激素受体α的表达

为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P<0.05);整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;随着泌乳期的进行,ERα的表达水平增高,但差异不显著(P>0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。     

芦丁对去卵巢处女大鼠乳腺发育作用的影响

 【目的】通过考察芦丁对去卵巢处女大鼠内分泌激素水平、激素受体表达的影响以及乳腺组织形态学的观察,来研究芦丁促进乳腺发育的类雌激素样作用。【方法】试验选择32只去卵巢处女Wistar大鼠,随机分为四个处理组,假手术Sham组,每日每只灌胃生理盐水(2 mL)一次;卵巢切除Ovx组,每日每只灌胃生理盐水(2 mL)一次;芦丁Ovx＋Rut组,每日每只灌服芦丁(60mg&#8226;kg-1BW)一次;雌二醇Ovx＋Est组,每周每只肌注雌二醇(60µg&#8226;kg-1BW)一次。试验为期两周,试验结束后采集大鼠血液样品、乳腺组织样品等,运用放免技术检测血浆和乳腺组织中雌激素(E2)、催乳素(PRL)、生长激素(GH)的含量,RT-PCR技术检测乳腺组织这些激素受体的表达量,并进行乳腺组织形态学观察。【结果】试验结果显示,大鼠血浆中E2的水平,Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组高于Ovx组(P＜0.05),该两组间差异不显著(P＞0.05),Ovx＋Rut组水平低于Sham组(P＜0.05),Ovx＋Est组与Sham组差异不显著(P＞0.05),乳腺组织中E2含量呈现相同规律;PRL在血浆与乳腺组织中的含量都表现为Ovx组＜Ovx＋Rut组＜Ovx＋Est组＜Sham组(P＜0.05),血浆中GH的含量Ovx组低于Ovx＋Rut组低于Ovx＋Est组低于Sham组(P＜0.05),在乳腺组织GH含量,Ovx组低于Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组(P＜0.05),Ovx＋Rut组低于Sham组(P＜0.05),Ovx＋Rut组和Ovx＋Est组间差异不显著(P＞0.05),Ovx＋Est组与Sham组差异不显著(P＞0.05);大鼠乳腺组织中雌激素受体ER、催乳素受体PRLR、生长激素受体GHR在Ovx组、Ovx＋Rut组、Ovx＋Est组、Sham组组间数值依次增大(P＜0.05),表现相同变化趋势;乳腺组织形态学观察发现,Ovx＋Rut组、Ovx＋Est组、Sham组乳腺组织的发育显著好与Ovx组(P＜0.05)。【结论】芦丁能够提高去卵巢处女大鼠E2水平,促进PRL、GH分泌,上调乳腺组织中ER、PRLR、GHR的表达量。     

泌乳晚期大鼠乳腺生长抑素基因的表达

利用大鼠生长抑素基因设计引物,对泌乳晚期SD大鼠的乳腺组织生长抑素基因进行RT-PCR检测,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆、测序.结果发现在泌乳晚期大鼠乳腺中有生长抑素基因的表达.     

罗格列酮和血清对猪前脂肪细胞诱导分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的影响

[目的]探讨罗格列酮和血清对猪前脂肪细胞诱导分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的影响。[方法]利用胶原酶消化法分离了猪皮下前脂肪细胞,采用3种不同分化培养液对猪前脂肪细胞进行了诱导分化,借助油红O染色提取法比较了不同分化培养液对分化过程中细胞内脂肪含量变化的影响,并运用实时定量RT-PCR方法检测了不同分化培养液细胞分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的变化趋势。[结果]细胞内脂肪聚积以含罗格列酮的MⅡ最快,不含罗格列酮的MⅠ最慢。罗格列酮可极显著上调PPARγ基因的表达（P〈0.01）,而对PPARα基因的表达存在一定的抑制作用,但不显著。血清对PPARγ基因的表达有极显著的上调作用（P〈0.01）,而对PPARα基因的表达有极显著下调作用（P〈0.01）。[结论]罗格列酮可极大地促进PPARγ基因的表达,继而增进细胞内脂肪沉积;血清中可能存在PPARγ基因的激活剂,同时存在PPARα基因的抑制因子。     

罗格列酮和血清对猪前脂肪细胞诱导分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的影响

[目的]探讨罗格列酮和血清对猪前脂肪细胞诱导分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的影响。[方法]利用胶原酶消化法分离了猪皮下前脂肪细胞,采用3种不同分化培养液对猪前脂肪细胞进行了诱导分化,借助油红O染色提取法比较了不同分化培养液对分化过程中细胞内脂肪含量变化的影响,并运用实时定量RT-PCR方法检测了不同分化培养液细胞分化过程中PPARα和PPARγ基因表达的变化趋势。[结果]细胞内脂肪聚积以含罗格列酮的MⅡ最快,不含罗格列酮的MⅠ最慢。罗格列酮可极显著上调PPARγ基因的表达（P〈0.01）,而对PPARα基因的表达存在一定的抑制作用,但不显著。血清对PPARγ基因的表达有极显著的上调作用（P〈0.01）,而对PPARα基因的表达有极显著下调作用（P〈0.01）。[结论]罗格列酮可极大地促进PPARγ基因的表达,继而增进细胞内脂肪沉积;血清中可能存在PPARγ基因的激活剂,同时存在PPARα基因的抑制因子。     

Influence on Cellular Signal Transduction Pathway in Dairy Cow Mammary Gland Epithelial Cells by Galactopoietic Compound Isolated from Vaccariae segetalis

The galactopoietic mechanism of Vaccaria segetalis is still unknown. Understanding dibutyl phthalate (DBP) separated from Vaccaria segetalis on the expression of lactation signal transduetion genes of mammary gland epithelial cells, including prlr, erα, akt1, socs2, pparγand elf5, will be helpful to reveal the molecular mechanism. Western blot and qRTPCR were used to study the change of prlr, erα, akt, socs2, pparγ, and elf5 expression at mRNA and protein level. Colocalization expression of prolactin receptor (PRLR) and estrogen receptor α (ERα) was observed by immunofluoreseence;the expression changes of miRNAs (21, 125b, 143, and 195) and the secretion of β-casein and lactose were detected byqRT-PCR and RP-HPLC. The results showed that Vaccaria segetalis active compound had similar fuctions as estrogen and/or prolactin (PRL) in dairy cow mammary gland epithelial cells (DCMECs), increased the expressions of prlr, erα, akt1,and elf5 genes, while repressed ppaγ expressions. DBP promoted socs2 mRNA expression, but its protein expressionswere repressed. Furthermore, both DBP and PRL could repress the expressions of miRNA-125b, miRNA-143 and miRNA-195 in DCMECs. DBP could repress the expression of miRNA-21, while the influence of PRL on miRNA-21 was not certain.DBP could promote the lactation ability of DCMECs by regulating the ER and PRLR cellular signal transduction pathway.     

The Effect ofAdministration of Rutin on Plasma Levels of Estrogen,Prolactin, Growth Hormone and Gene Expression of Their Receptors in Mammary Glands in Ovariectomized Rats

The development of mammary glands, endocrine hormone concentrations and the gene expression of related receptors were measured in ovariectomized virgin rats after adminstration of an estrogen-like plant extract, rutin. Thirty-two ovariectomized virgin Wistar rats were randomly assigned to 4 treatments with 8 animals each: gastric infusion of 2 mL normal saline per unovariectomized rat per day (Sham), gastric infusion of 2 mL normal saline per ovariectomized rat per day (Ova), gastric infusion of 60 mg rutin kg-1 body weight (BW) per ovariectomized rat per day (Ova+Rut), or intramuscular injection of 60 μg estradiol kg-1 BW per ovariectomized rat weekly (Ova+Est). Samples of blood and mammary glands were harvested to determine the levels of estrogen (E2), prolactin (PRL) and growth hormone (GH), and the gene expression of estrogen receptors (ER), prolactin receptors (PRLR) and growth hormone receptors (GHR) with radioimmunoassy (RIA) and RT-PCR technology, respectively. The E2 concentration in plasma and gland tissues from the rats of Ovx+Rut or Ovx+Est was higher than that of Ovx (P<0.05), but the plasma E2 concentration from the rats of Ovx+Rut was lower than that of Sham (P<0.05). The order of the PRL concentration in plasma and gland tissues was Ovx     

奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体的变化规律研究#br#

 【目的】探讨奶山羊乳腺发育过程中生长激素、胰岛素及其受体表达规律。【方法】关中奶山羊乳腺发育的4个时期即青春期、妊娠期、泌乳期及退化期用放射性免疫学方法（RIA）测定激素的含量,用免疫荧光法（IF）检测激素受体含量。【结果】在乳腺发育过程中血清中生长激素（GH）变化不显著（P＞0.05）,而组织中的GH在妊娠5月（P5M）时出现分泌高峰2.599±0.459 ng&#8226;mL-1（P＜0.01）。血清中胰岛素（INS）在青春期含量变化差异不显著（P＞0.05）,到妊娠1月（P1M）时INS含量高达31.664±6.416 µIU&#8226;mL-1（P＜0.01）,泌乳高峰过后回到正常水平。组织中的INS在进入妊娠期后含量开始增加并持续到泌乳10日（L10D）,之后下降。生长激素受体（GHR）在妊娠期比青春期和泌乳早中期高,在泌乳晚期达到高峰,之后下降。胰岛素受体（INSR）从青春期开始缓慢上升,在泌乳启动后达到高峰。【结论】在乳腺发育过程中血清和乳腺中的GH变化不明显。血清中的INS水平在妊娠初期最高,至分娩时最低,而乳腺中INS在泌乳期处于高水平。GHR在妊娠期和泌乳后期、退化前期表达量较高。INSR在妊娠期和泌乳期维持在一个较高水平,至泌乳中后期下降。     

不同发育期大鼠乳腺组织中孕酮受体的表达研究

为了探讨大鼠乳腺中孕酮受体(PR)的变化规律,试验采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的孕酮受体表达进行了半定量研究。结果表明,妊娠18 d的PR表达水平明显低于处女期和妊娠6,12 d (P<0．05),整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;在泌乳6 d时检测不到PR,泌乳12,18 d可检测到PR表达,泌乳 18 d的PR水平低于泌乳12 d,但差异不显著(P>0．05)。表明PR可能参与了乳腺细胞的发育和泌乳。     

CpG-DNA对金黄色葡萄球菌诱导的乳腺炎大鼠的保护研究

【目的】建立金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染的大鼠乳腺炎模型，并观察CpG-DNA对乳腺的保护作用。【方法】18只雌鼠分3组(n=6)，产后72h分别灌注磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）（C组）、2×105CFU•ml-1（L组）和2×1012CFU•ml-1 (H组)金葡菌到第四对乳腺内，24 h处死。L组乳腺病变轻微，H组腺泡结构破坏严重，并有大量嗜中性粒细胞（polymorphonuclear neutrophils，PMN）浸润；H组乳腺组织TNF-α、IL-6水平显著上升。选择2×1012CFU•ml-1为诱发剂量观察CpG-DNA对乳腺的保护作用：72只雌鼠分成对照和试验组(n=36)，对照组产后0 h肌注PBS；试验组肌注CpG-DNA，72 h后灌注金葡菌到第四对乳腺内。分别于灌注前（定义为0 h），灌注后8、16、24、48和72 h（n=6）处死。【结果】感染初期试验组乳腺腺泡内PMN较对照组浸润迅速。试验组乳腺组织白细胞介素-6（interleukine-6，IL-6）在16、24和48 h显著高于对照组。CpG-DNA能显著提高0、24和72 h乳腺组织肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）水平。试验组8、16和72 h的乳腺组织金葡菌数显著低于对照组。CpG-DNA能显著提高乳腺组织中其特异性受体TLR-9（toll-like receptor-9）mRNA表达水平。【结论】CpG-DNA对金葡菌感染诱发大鼠乳腺炎的乳腺有保护作用。     

鸭发育早期下丘脑-垂体生长轴相关基因mRNA的表达特异性分析

【目的】选择生长速度不同的高邮鸭和金定鸭为试验模型,3种不同品种鸭胚胎期和出雏早期下丘脑垂体生长轴相关基因的表达规律及其与体重和肝重的相关性。【方法】采用实时荧光定量PCR方法研究鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄下丘脑生长激素释放激素（growth hormone release hormone,GHRH）与生长抑素（somatostatin,SS）、垂体生长激素（growth hormone,GH）和肝脏生长激素受体（growth hormone receptor,GHR）与胰岛素样生长因子（insulin-like growth factors,IGFs） mRNA的表达规律。【结果】证实鸭下丘脑GHRH与SS、垂体GH和肝脏GHR与IGF-I在13胚龄已有表达;除了SS在鸭发育早期维持一个低表达状态外,其它的4种基因均呈现极显著的品种和时间特异性;除了GH外,发现鸭早期发育过程中GHRH、GHR和IGF-I mRNA的表达受到品种和日龄的交互作用的极显著影响。与鸡以往的研究相比,禽类胚胎期下丘脑垂体生长轴相关基因mRNA的表达存在着种属差异。本试验发现鸭早期发育过程中,体重和肝重的变化也呈现极显著的品种和时间特异性,且与下丘脑垂体相关基因的表达呈现不同程度的线性相关。【结论】结果提示下丘脑垂体生长轴基因 mRNA的表达可能在鸭早期发育过程中发挥着重要作用,遗传背景的差异可以导致鸭发育早期体重的差异生长和相关基因的差异表达。