五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究

选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。     

不同浓度的低密度脂蛋白对犬精液冷冻效果研究

为观察低密度脂蛋白(LDL)对犬精液的冷冻效果,试验在江苏农牧科技职业学院犬舍选择5只健康贵宾犬雄犬,采集精液并将检测合格的精液混合后平均分为5份,分别用含0、 6%、8%、10%和12%LDL的5种犬冷冻精液的配方(分别为配方1组、配方2组、配方3组、配方4组、配方5组)处理犬精液,观察5组冻精解冻后精子活率、畸形率、精子膜完整性、精子DNA完整性以及精子的各项运动参数。结果表明:添加8%LDL的配方3组和添加10%LDL的配方4组精液冷冻效果较好,精子活率、畸形率、精子膜完整性、精子DNA完整性和精子运动的各项指标均优于其他组。说明精液冷冻稀释液中添加8%或10%LDL可以提高犬精液的冷冻效果。     

山羊精液颗粒冷冻方法的研究

本试验旨在研究出一种适用于山羊精液颗粒冷冻的方法。试验选择江苏省扬州大学转基因动物制药工程研究中心的种公羊和发情母羊为试验动物。首先把精液样品稀释成5等份,分别在2 500、3 000、3 500、4 000、4 500r/min的离心速率下进行研究,选择出最优的离心速率,然后在此离心速率下分别采用2.5、3、3.5、4、4.5h的平衡时间继续分组研究。试验测定了各处理组的精子活力并进行了数据分析。结果表明:山羊精液在离心速率3 500r/min、平衡时间3.5h条件下,精子活力显著优于其他组。由此可见,精液冷冻过程中离心速率和平衡时间对冷冻精液品质有着一定的影响。     

液氮蒸汽熏蒸时间对犬精子冷冻效果的影响

本试验研究了0.5 m L细管冷冻保存犬精液过程中液氮熏蒸时间对精子冷冻效果的影响。试验分为5组,将精液细管置于液氮液面上方2 cm处,分别熏蒸0 min(直接投入液氮)、1 min、2 min、4 min、8 min。解冻后通过活率、活力、畸形率及顶体完整率对精子进行评估。结果:液氮蒸汽熏蒸0 min和1 min组精子活率和活力显著低于其它各组(P0.05)。与直接投入液氮相比,在液氮蒸汽中预冷冻超过2 min能够提高精子顶体完整率(P0.05)。本试验表明在使用0.5 m L细管冷冻犬精子时,液氮熏蒸时间在4~8 min较为适宜。     

冻前预处理对萨福克肉羊精液冷冻效果的影响

通过对萨福克肉羊新鲜精液在离心前进行不同时间的静置,选择不同的离心速度及离心时间进行冷冻前预处理,以解冻后精子活率,复苏率为判断指标,比较了各种不同预处理对萨福克精液冷冻效果的影响。结果表明:离心前在37℃环境下静置60min的冻后效果(活率达0.47和复苏率达到73.8%)优于30min和90min的冻后效果(p0.05);离心过程以1000r/min的速度离心10min较好,冻后活率0.45,复苏率达到74.5%,优于500r/min和1500r/min转速和其他时间(p0.05)。     

不同冷冻保护剂对犬精子冻存的影响

本试验通过对比冷冻保护剂和冷冻程序,优化犬精液冷冻保存方法,比较了不同甘油、乙二醇浓度、不同平衡时间对犬精子冷冻复苏率及精子顶体完整率的影响。结果发现,甘油作为冷冻保护剂时,其对精液冷冻保存后的效果明显优于乙二醇,当甘油浓度为4%时,平均冷冻复苏率最高;冷冻平衡时间为1 h最佳。因此,犬精液在冷冻保存时,甘油浓度为4%,平衡60 min,可获得平均39.21%±0.013%的冷冻复苏率,且比较稳定。     

精清去除方法对崂山奶山羊精液冷冻保存效果的影响

去除精清在使用含卵黄成分稀释液的山羊精液冷冻中非常重要,而去除方法直接影响到处理后的精子活力。试验对比了洗涤液成分、离心时间、离心转速以及洗涤次数对精子活力的影响。结果表明,使用冷冻稀释液的基础液作为洗涤液,以1000r/min洗涤2次,每次10min,效果最好,解冻活力达0.55以上。     

昆明气候节律对西门塔尔牛精液品质的影响

[目的]西门塔尔牛分布极广,本文旨在分析云南昆明气候条件对西门塔尔牛精液品质的影响,以便进一步提高种公牛冷冻精液质量。[方法]对西门塔尔牛2011年至2016年不同季节和节气的射精量、原精活力、精子密度、解冻活力进行测定、记录和统计分析。[结果]结果得出,西门塔尔牛春季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.82±2.129mL(n=1729)、66.75±7.620%、11.5±7.955亿/mL和37.94±2.642%(n=1417);夏季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.89±2.048mL(n=1849)、66.05±7.314%、10.95±4.7450亿/mL和37.56±2.638%(n=1550);秋季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.89±3.335mL(n=1819)、65.81±8.687%、10.10±4.621亿/mL和37.82±2.686%(n=1537);冬季的射精量、精子密度、原精活力和冷冻精液解冻活力分别为6.94±2.154mL(n=1847)、66.77±6.709%、10.40±5.056亿/mL和37.75±2.557%(n=1622)。[结论]西门塔尔牛精子活力和密度受气候和季节变化的影响明显。     

不同稀释方法对小型宠物犬精液冷冻效果影响

为了研究Tris-果糖稀释液在不同稀释方法下对小型宠物犬精液冷冻的效果,选取常见的3个小型宠物犬品种共计6只犬进行试验,精液稀释过程分别采用一步稀释法和两步稀释法。结果表明:冷冻精液解冻后各组犬精液的同一剂型间的精子活力差异均不显著(P0.05);一步稀释法中的颗粒冻精与0.25 mL细管冻精和0.50 mL细管冻精相比,解冻后精子活力差异均显著(P0.05),而0.25 mL细管冻精与0.50 mL细管冻精的解冻后精子活力差异极显著(P0.01);采用两步稀释法的颗粒冻精、0.25mL细管冻精及0.50 mL细管冻精的解冻后精子活力组间差异均不显著(P0.05)。用Tris-果糖稀释液稀释精液时,使用两步稀释法对不同冻精剂型的精子活力影响不明显。     

稀释液中添加维生素E对宠物犬精液冷冻效果的影响

在宠物犬冷冻精液稀释液中添加质量浓度为0,200,400,600μg/mL的维生素E,以观察对精液冷冻效果的影响。结果表明:冷冻精液稀释液中添加维生素E 400μg/mL时,解冻后精子活力显著高于对照组(P0.05);畸形率极显著低于对照组(P0.01),各浓度维生素E组精子解冻后体外存活时间均极显著高于对照组(P0.01),解冻后精子顶体完整率和冻后精子运动速率(VAP、VSL、VCLL)较对照组都有所提高,但差异不显著(P0.05)。综合各项指标后表明以质量浓度为400μg/mL维生素E组的效果最好。     

影响犬精液冷冻效果的因素分析

精液冷冻是影响犬人工授精技术的关键环节,由于冷冻效果不稳定,冻后精子活力差,造成人工授精成功率低,平均窝产仔数少,影响到该技术在国内的广泛使用。犬精液冷冻是一项系统的技术,影响犬精液冷冻效果的因素也是多方面的。综述了精液冷冻保护剂、质膜保护剂、抗氧化保护剂、冷冻程序和冷冻方法等因素对犬精液冷冻效果的影响。     

改进的昆明犬精液冷冻保存方法

为了对现有的犬精液冷冻方法进行改进,进一步提高精子冷冻保存效率,试验采用4种降温时间(30,60,90,120 min)和2种添加甘油方法(一步加或五步加),以冷冻复苏精子的运动度、复苏率、质膜完整率和顶体完整率为指标,比较不同降温时间和不同添加甘油方法对昆明犬精液超低温冷冻保存的效果。结果表明:在相同降温条件下,五步加甘油进行冷冻的精子,复苏后精子运动度、复苏率和质膜完整率均高于一步加甘油组,顶体完整率高于一步加甘油组或与其相当;降温处理60 min,五步加甘油后进行冷冻的精子,其运动度、质膜完整率显著高于其他组(P0.05),而复苏率比其他组高,但差异不显著(P0.05)。     

离心对绒山羊精液冷冻效果的影响

选用8只精液品质良好的岢岚绒山羊成年公羊,采精后将精液混合,等分为2份,一份不离心(对照组),4倍稀释后颗粒冷冻;另一份在2 000 r/min下离心10 min,弃去上清,补充等体积稀释液,再4倍稀释后颗粒冷冻.探讨离心对冷冻前后的精液品质及其相关酶活性的影响.结果表明,离心可显著提高冻前冻后精子活率、弯尾率和顶体完整率,显著降低精子的畸形率和获能率(P＜0.05);离心组冻前冻后精泣的GOT活性、LDH活性、GPT活性显著低于对照组(P＜0.05),精浆果糖含量显著高于对照组(P＜0.05).表明,离心处理可明显提高绒山羊精液冻前冻后的品质.     

L-肉碱对猪精液冷冻保存效果的研究

本试验用5%二甲基甲酰胺(DMF)替代甘油作为冷冻保护剂,研究不同浓度(0、0.02、0.04、0.06、0.08 mg/mL)L-肉碱对猪精液冻后常规指标(精子活率、线粒体活性、顶体完整性、质膜完整性)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化酶(T-AOC)活性以及丙二醛(MDA)含量的影响。结果表明:添加0.04和0.06 mg/mL的L-肉碱可有效改善猪精液冷冻后效果。0.04 mg/mL组可显著提高精子冻后活率和线粒体活性(P<0.05);0.06 mg/mL组可显著提高顶体完整性和质膜完整性(P<0.05)。添加0.06 mg/mL L-肉碱可显著提高冷冻后精子内T-AOC酶活性并且抑制MDA的产生(P<0.05),但CAT活性与0.04 mg/mL组差异不显著。在冷冻稀释液中添加0.06 mg/mL L-肉碱可以提高猪精液冷冻保存效果。     

红景天多糖对牛精液冷冻效果影响的研究

为了进一步提高冷冻-解冻后牛精液品质和精子抵抗低温打击的能力,试验将0.02,0.04,0.06,0.08,0.1mg/mL5个浓度梯度的红景天多糖分别添加到牛精液冷冻稀释液中,比较了不同浓度红景天多糖对牛精液冷冻后精子质量的影响。结果表明:红景天多糖相对于对照TCG稀释液能够显著改善和提高牛精液的冷冻效果,当添加量为0.06mg/mL时,效果良好,与对照组比较活率提高了13.8%,差异显著(P0.05);顶体完整率、质膜完整率和精子运动的各项参数均高于对照组,差异显著(P0.05)。说明红景天多糖对牛精子冷冻保护效果良好。     

新疆驴冷冻精液的研究

试验旨在探究新疆驴冷冻精液的最佳稀释保护液与处理方法。以假阴道采集新疆驴精液,并用5种不同稀释保护液稀释冷冻后,选取其中较为理想的稀释液作为对照组,再通过分别添加4%、5%、6%、8%甘油处理试验,最后再选用添加甘油后冷冻效果最优的稀释液为对照来进行离心浓缩试验。结果表明：①5号稀释液冷冻—解冻精液后,其活力、顶体完整率要显著高于其他4种稀释液（P<0.05）;②以5号稀释液为对照组,添加6%甘油(7号稀释液)冷冻后,精子的活力、顶体完整率要显著高于添加4%、5%、8%甘油组（P<0.05）;③以7号稀释液为对照组,通过离心浓缩,精液在冷冻后其活力和精子顶体完整率都显著提高（P<0.05）。结果提示,将驴精液用6%葡萄糖、2%乳糖、6%甘油为主的稀释液稀释,并经500 r/min离心浓缩10 min处理后,其冷冻效果最好。     

辅酶Q10对绒山羊精液冷冻保存效果的影响

旨在探讨辅酶Q10对绒山羊精液冷冻保存效果的影响。利用添加不同浓度辅酶Q10(4、40、400?滋g/mL)的精液冷冻稀释液对绒山羊精液样本进行冷冻保存,待冷冻精液解冻后,采用流式细胞仪和计算机辅助精液分析系统(CASAS)分别检测不同精液样本的精子活率、质膜完整率、顶体完整率、DNA完整率、线粒体膜电位和细胞内ROS水平。结果表明,当冷冻稀释液中添加浓度为40μg/mL辅酶Q10时,经历冷冻—解冻过程的绒山羊精液样本的精子活率、质膜完整率、顶体完整率均显著高于对照组(P<0.05);在冷冻稀释液中添加浓度为40μg/mL或400μg/mL的辅酶Q10均能显著提高线粒体膜电位并降低细胞内ROS水平(P<0.05)。综上所述,在冷冻稀释液中添加40μg/mL的辅酶Q10能够显著提高绒山羊精子抗氧化能力和冷冻保存效果。     

离心方法对冷冻后民猪精子质量的影响

通过对比离心力、离心时间和离心次数与冻融后民猪精子质量的相关性,为改进民猪精液离心程序,提高冻精效果提供理论依据。试验分2组,第1组:将采集的新鲜民猪精液分组后分别在600×g,800×g,1 000×g及1 200×g离心力条件下离心10,15和20min;第2组:在800×g,离心15min条件下,分别离心1,3和5次;离心后的精子分别经过冷冻保存再融解过程后,检测不同离心条件下民猪精子冻融后的活率、顶体完整率、质膜完整率和线粒体膜电位的情况。结果表明,600×g(10,15,20min)及800×g(10,15min)离心力时,不同离心时间对精子质量影响不显著(P0.05)。1 000×g和1 200×g离心力时,随着离心力和离心时间的增加,精子质量明显降低,各指标组间差异显著(P0.05)。在800×g离心力,离心15min条件下,精子质量随离心次数增加而降低,各组间差异显著(P0.05)。因此,在本试验条件下,800×g离心力,离心15min,离心1次,可以获得较高的精子收集效率和冷冻后精子质量。     

褪黑素对绒山羊精液冷冻保存效果的影响

为了研究褪黑素对绒山羊精液冷冻保存效果的影响,在冷冻稀释液中外源补充不同浓度(0.125,0.250,0.500,1.000 mg/mL)的褪黑素进行冷冻试验,冷冻解冻采用计算机辅助精液分析系统(CASAS)和流式细胞仪分别检测精子活率、质膜完整率、顶体完整率以及精子细胞中活性氧(ROS)的含量。结果表明:在冷冻稀释液中添加褪黑素能够显著降低精子细胞中ROS的含量,而且在冷冻稀释液中添加浓度为0.500 mg/mL的试验组绒山羊精子活率(53.3%)、质膜完整率(44.6%)、顶体完整率(77.9%)均显著高于空白对照组(47.8%、36.3%和53.2%)(P0.05)。说明在绒山羊精液冷冻稀释液中添加0.500 mg/mL褪黑素能够显著提高绒山羊精子抗氧化能力和冷冻保存效果。     

水牛性控精液微生物分析

研究针对目前分离水牛X和Y精子性别控制过程中,容易导致微生物快速繁殖进而污染性控精液的问题,对水牛新鲜及冷冻性控精液中的微生物进行分析研究,以期改进水牛分离精子保存方法。结果表明:新鲜采集的水牛精液、常规冷冻精液及分离后的冷冻精液中,平均菌落密度分别为10 619个/mL、293个/mL和18935个/mL,三者差异显著(P0.05)。新鲜精液检测到的菌落中,革兰氏阳性球菌占48%,阴性杆菌占41%,阳性杆菌占9%,霉菌占2%;性控冷冻精液中的菌落100%为革兰氏阴性杆菌。对性控冻精菌落药敏检测发现,菌落对妥布霉素和庆大霉素均呈现耐药性,而对丁胺卡那霉素以及药物环丙氟哌酸药物敏感性较强。本研究结果,为改进水牛分离精子稀释液以及冷冻保存液中的抗生素使用提供了有价值的参考。