动物细胞培养物中支原体污染的检测

[目的]建立检测细胞培养物中支原体快速有效的方法。[方法]从6种常见污染细胞的支原体16sRNA中选择2段高度保守的核酸序列作为引物,用PCR和DNA荧光染色法来检测实验室中25种动物细胞株。[结果]用DNA荧光染色法检测实验室中25种动物细胞株阳性率为24％,可疑阳性为16％;而用PCR法检测阳性率为36％。[结论]PCR法较DNA荧光染色法灵敏度更高、特异性更强,将2种方法结合应用效果更好。     

羊肺炎支原体基因组DNA几种提取方法的比较

为了筛选支原体基因组DNA最优提取方法以便用于支原体的检测和分子鉴定,本试验采用两种试剂盒、CTAB法、高盐法、酚/氯仿/异戊醇法和煮菌法对3批两种支原体液体培养物进行总DNA提取,通过检测基因组DNA纯度和PCR产物比较其提取效果。结果显示:6种方法提取的支原体基因组DNA均能用于PCR。进口试剂盒和CTAB法获得的DNA纯度最高,酚/氯仿/异戊醇法、高盐法和国产试剂盒次之,煮菌法省时但质量较差,酚/氯仿/异戊醇法较慢。CTAB法和高盐法可快速获得优质的基因组DNA,可作为提取支原体基因组DNA的首选方法。     

RAPD法分析猪肺炎支原体DNA多态性

应用RAPD技术,用7条随机引物对7株猪肺炎支原体和2株猪鼻支原体基因组DNA进行了多态性分析,结果表明,7条引物共产生244个扩增片段,其中有92个是多态性片段.相似系数分析结果显示,国际标准株J株和国内分离株之间相似性系数为0.139～0.333,猪肺炎支原体和猪鼻支原体之间相似性系数为0.203-0.400.     

用荧光染色法观察南瓜雄配子体发育过程

采用蜜本南瓜和安生黑钻南瓜开花初期的雄花蕾为试验材料,利用荧光染色技术对南瓜花粉发育时期进行鉴定,结果表明:南瓜花粉母细胞发育经过减数分裂后进入四分体时期,经历单核早中期和单核靠边期进入二核期,成熟花粉为2-细胞花粉.其中蜜本南瓜处于单核期的花蕾长度在1.4 ～1.7 cm,安生黑钻南瓜则在1.2～1.7 cm,可以作为花药或花粉培养的选材依据.     

整体荧光原位杂交用于检测水稻特异DNA程序的研究

文章报道了整体荧光原位杂交应用于检测水稻特异ＤＮＡ的实验程序。利用该实验方法,以经地高辛（ＤＩＧ）标记的ｒＤＮＡ作为探针,成功地在水稻根尖和花药内部组织检测与探针互补的片段。对于实验方法,结果表明,整体荧光原位杂交的成功与否受到多种因素的影响,包括组织的种类、固定剂的种类以及固定后的处理方法（主要是酶解与否）等。检测根尖ＤＮＡ可以采用φ（福尔马林）＝１％固定加上酶解;检测花药（花粉发育处于单核期）     

荧光探针法研究茶多酚与DNA的相互作用

利 用荧光探 针 Ｅ Ｂ（溴 化乙啶）研 究茶多酚 （ Ｔ Ｐ）与 Ｄ Ｎ Ａ 的相 互作用 及顺 铂（ Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ）对其 的影响,结果表明：在 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 体系中加 入 Ｔ Ｐ 后,荧光光谱 形状和峰位几乎 无变化,而荧光强度 明显下降; Ｔ Ｐ 压低 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧 光强度的效率 Ｄ 与其浓度成正相关,高浓度 Ｔ Ｐ 可以完全抑制 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧光强度⒚ Ｔ Ｐ与 Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ 对 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 荧光压低作用存在叠加现象,表明 Ｔ Ｐ 可增强 Ｃ Ｄ Ｄ Ｐ 的药用效果,又 可降低其副作用⒚ Ｔ Ｐ使 Ｅ Ｂ Ｄ Ｎ Ａ 体系的荧 光偏振度 Ｐ增加,而荧光寿命 τ缩短,这表明 Ｔ Ｐ 与 Ｄ Ｎ Ａ 作用的机理可能是 Ｔ Ｐ 插 入了 Ｄ Ｎ Ａ 分子碱 基对平 面中,影 响了 Ｄ Ｎ Ａ 分子双 链的有 序度,并 使从 Ｄ Ｎ Ａ 分子中 向 Ｅ Ｂ 分子传递的能量减少⒚     

荧光探针法研究铅离子对小牛胸腺DNA构象的影响

［目的］利用荧光探针法研究铅离子与DNA的作用方式。［方法］采用紫外可见分光光度法检测了DNA的纯度,采用荧光滴定法研究了铅离子对DNA构象的影响。［结果］随着铅离子的加入,DNAEB复合物的荧光强度逐渐降低。在DNAEB体系中加入铅离子后,荧光强度随着铅离子浓度的增加而降低,且荧光峰位略有红移。按生物分子的荧光寿命τ0为10ns计算,DNAEB与铅离子的双分子猝灭常数分别为1.01×1013和4.0×1014L/（mol·s）,二者均大于生物分子的最大动态猝灭常数2.0×1010L/（mol·s）,说明由铅离子引起的DNAEB的荧光猝灭属于静态猝灭。根据斜率和外推截距计算出DNAEB与猝灭剂的解离常数为1.13×10-5mol/L。铅离子与DNAEB的结合位点为5.56,结合常数为1.51×1029。［结论］铅离子容易与DNA结合,引起DNA构象的变化。     

绵羊肺炎支原体实时荧光定量PCR检测方法的建立

为研究绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,Mo）侵害山羊的组织嗜性、筛选其最佳培养基及建立快速检测方法,针对Mo 16S rRNA基因设计特异性引物FQs/FQa,以Mo Y98株16S rRNA基因重组质粒pMD19 MoFQ为模板,通过优化反应体系构建标准曲线,建立可定量检测Mo 16S rRNA基因的FQ PCR方法,并对所建方法进行重复性、特异性、敏感性及应用性检测。结果表明,所建Mo 16S rRNA基因检测FQ PCR方法具有较好的重复性、特异性、临床应用性,Mo核酸拷贝最低检出量可至10 μL^-1。该方法不仅可作为Mo临床检测方法,且为后续Mo研究工作提供技术支持。     

牛支原体检测方法初探

为了解广西某肉牛场外购牛感染牛支原体情况,采集鼻拭子60份,进行了牛支原体的分离培养和PCR检测。支原体分离结果显示,从60份鼻拭子中分离出2株支原体,分离率为3.33%(2/60),PCR鉴定为牛支原体。PCR检测结果显示,在60份鼻拭子中共检测出19份牛支原体,检出率为31.67%(19/60)。结果表明,该场外购肉牛的牛支原体具有较高的感染率。     

多重荧光PCR检测肠出血性大肠杆菌（VTEC）方法的研究

为寻找一种能广泛应用于食品检验、临床诊断的快速、简便、灵敏度高、特异性较好、价格低廉的肠出血性大肠杆菌(VTEC)的检测方法;对VTEC致病相关基因VT1和VT2基因序列进行分析,并设计2对特异引物,通过SYBR GreenⅠ多重荧光PCR反应法结合熔链曲线分析,实现对VTEC的检测;结果表明该方法具有较高的灵敏度及特异性,能够对肠出血性大肠杆菌(VTEC)进行有效检测,其最低检出限可达10cfu/g。利用该技术检测VTEC,具有快速、方便、准确、高效的特点,是一种适于检验检疫和兽医临床检验等领域的快速检测的有效方法。     

羊霉形体与霉形体病

列举目前已知从绵羊和山羊上分离出的霉形体种类,并概述这些霉形体的病原性和在疾病发生过程中的作用。     

火龙果花粉生活力检测方法比较研究

[目的]为了筛选出一种较准确地快速测定火龙果花粉生活力的方法。[方法]以红肉和白肉火龙果为试材,对其开花动态进行观察,并采用形态测定、碘-碘化钾染色、联苯胺染色、葡萄糖液培养和蔗糖液培养等5种方法对新鲜花粉和室内常温保存24 h的花粉进行生活力的测定。[结果]晚上21：30～22：30火龙果花瓣完全打开,花粉自然散开,是花粉采集的最佳时间;形态观测较适合用于火龙果花粉生活力的检测,碘-碘化钾染色法不适合,联苯胺染色法染色结果不准确,葡萄糖液培养和蔗糖液培养法检测花粉萌芽不理想。[结论]该研究为火龙果授粉、花粉采集及贮藏提供理论基础。     

番茄溃疡病菌实时荧光PCR快速检测方法研究

根据番茄溃疡病菌ITS(16S~23SrDNA间隔区)基因序列,设计并合成了荧光PCR检测引物(Fan1和Fan2)及特异性检测探针(Fanprobe),对番茄溃疡病菌和非番茄溃疡病菌的标准菌株实时荧光PCR反应。结果表明,番茄溃疡病菌PCR产物出现强烈的特异杂交信号,而非番茄溃疡病菌均未出现特异荧光信号,证明这对引物及探针具有番茄溃疡病菌鉴定特异性。将番茄溃疡病菌DNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果表明,此体系可检出52.3 fg/μL的模板。     

玉米细菌性枯萎病菌荧光重组酶介导等温扩增检测方法的建立与应用

[目的]建立一种快速、灵敏、特异的玉米细菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii subsp.stewarii)重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)检测方法.[方法]以玉米细菌性枯萎病菌pstS-glmS基因序列作为靶标序列,设计、合成荧光RAA检测引物和...     

入侵害虫桔小实蝇检测方法的研究发展概况

文章首先归纳了重要的世界性检疫害虫-桔小实蝇的分布与为害等生物生态学特性,如其目前分布于中国的湖南、广东、广西、贵州、福建、四川、海南、云南、台湾等省份或地区,为害近300种果蔬植物,主要为害果实,世代相互重叠,具有群集取食的习性。接着从形态鉴定检测、声波检测及分子检测3个方面概述了近年来桔小实蝇的检测方法研究的发展趋势及各检测方法的优缺点,提出了为适应水果进出口贸易快速通关的大局进一步开展对桔小实蝇检测鉴定新技术研究的迫切需要,最后提出了关于桔小实蝇研究的热点问题,如生态适应规律及机制、扩散途径及机制、可持续控制措施等。     

荧光定量PCR检测猪肝中猪链球菌2型的基因组DNA提取方法的比较

[目的]在人工布菌猪肝中评估溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法提取猪链球菌2型基因组DNA在荧光定量检测中的应用效果,为猪链球菌2型的荧光定量检测选择合理的基因组DNA提取方法提供试验依据。[方法]采用溶菌酶-苯酚法和柱式纯化试剂盒法分别提取人工布菌猪肝样本中猪链球菌2型基因组DNA,通过荧光定量PCR技术检测猪链球菌2型的相对含量。[结果]利用荧光定量方法能够检测到猪链球菌2型。该方法可以最低检测到12 CFU/g的猪链球菌,特异性良好,标准曲线方程为y=-3.185 9x+39.901 0。在人工布菌猪肝样本中,溶菌酶-苯酚法在q PCR实验中检测猪链球菌2型较灵敏。[结论]溶菌酶-苯酚法在猪肝样品中提取基因组DNA效果较好;试剂盒法在细菌纯培养物中提取基因组DNA具有安全、高效等优点。     

一种用于转基因水稻快速检测的DNA提取方法

[目的]建立一种快速筛选转基因水稻的DNA提取方法。[方法]对试剂盒法和快速法2种DNA提取方法进行比较,并分别用转Ta NADP-ME1和Ta NADP-ME2基因的转基因水稻进行验证。[结果]用快速法提取得到的DNA进行PCR扩增,可分别得到约1 700 bp的Ta NADP-ME2基因和约1 900 bp的Ta NADP-ME1基因,且条带清晰明亮,与试剂盒法相比无显著差异。[结论]该研究中快速提取DNA的方法经济、简便、快捷,适合用于对大量转基因样品进行检测。     

曼氏无针乌贼荧光标记技术初步研究

通过在曼氏无针乌贼幼体（胴长2.0-3.0cm）背部注射浓度为350mg/L的茜素络合指示剂（Alizarin Complex-one,ALC）溶液,以实现对其内壳的染色标记。将标记组与对照组幼体各125头饲养于同一养殖试验池（370cm×370cm×140cm）内,并分别于标记后的第0d、10d、20d、30d、40d、50d对2组个体进行随机取样,测量其胴长、胴宽、体重、壳长、壳宽、壳重6个生物学指标,观察内壳标记色保持情况并记录死亡率。将结果进行方差分析后显示,荧光注射标记方法对曼氏无针乌贼的成活率和生长发育均没有显著影响（P〉0.05）;至乌贼发育成熟并产卵时,紫红色的椭圆形标记依然清晰可见,从外部透过皮肤也具有可视的直观效果,保持率为100%。荧光注射标记法适用于曼氏无针乌贼的标记,具有成本低、操作简单、标记色易识别等优点,可进行批量标记试验。     

荧光定量PCR检测单核细胞增生性李斯特氏菌

[目的]建立一种快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的实时荧光定量PCR方法。[方法]针对单核细胞增生性李斯特氏菌的特异基因hlyA,结合锁定寡核苷酸（LNA）,设计引物和探针,利用阳性质粒和模拟标本建立单核细胞增生性李斯特氏菌实时定量荧光PCR检测方法。[结果]以单核细胞增生性李斯特氏菌为模板克隆了hlyA基因,得到阳性质粒,并进一步建立了荧光定量PCR方法,得到标准曲线Y=-3.273 X＋37.640,相关系数R2=1.000;该方法的灵敏度可以达到1.2×10 CFU/ml;人工污染猪肉检出限可以达到3.2×102 CFU/ml。[结论]建立了快速检测单核细胞增生性李斯特氏菌的实时荧光定量PCR方法,为实现食品中单核细胞增生性李斯特氏菌的快速检测构建了一个技术平台。