花椒愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

以花椒试管苗叶片为试验材料,研究了不同激素浓度对花椒愈伤组织继代培养的影响,并以多次继代得到的疏松、活性高的愈伤组织建立花椒细胞悬浮系。结果表明:花椒愈伤组织最适继代培养基为MS+2,4-D 1.0mg·L~(-1)+6-BA 0.5mg·L~(-1)+蔗糖30g·L~(-1)+琼脂6g·L~(-1);花椒细胞悬浮培养的最佳培养基和培养条件为:MS+2,4-D 1.0mg·L~(-1)+6-BA 1.0mg·L~(-1)+葡萄糖30g·L~(-1),接种量0.05g·mL~(-1),摇床转速110r·min~(-1),25℃暗培养,该条件下悬浮细胞生长良好,最大生长量为4.52g;花椒悬浮细胞生长呈"S"型曲线,最适继代周期为16d。     

当归愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究

为了建立当归愈伤组织的诱导及其细胞悬浮培养的技术体系,采用正交试验法研究不同植物生长调节剂对当归叶柄、根尖和叶片愈伤组织诱导的影响,以及采用植物细胞悬浮培养技术研究当归不同外植体细胞的生长特性及其活性成分的积累规律.结果显示,叶柄最易诱导出愈伤组织,其次是根尖和叶片,2,4-D对当归不同外植体愈伤组织的诱导均具有极显著的效果,其中诱导叶柄和根尖愈伤组织形成的最佳组合均为1.0 mg/L 2,4-D+ 0.2 mg/LNAA+ 0.4 mg/L 6-BA,诱导率达到80％以上.此外,当归根尖和叶柄细胞分别悬浮培养至15、21 d时,细胞量分别为926.7、990.6 mg/L;根尖细胞悬浮培养至21 d时,阿魏酸和藁本内酯的含量分别达到为96.6、167.5μg/g.结论为,当归叶柄和根尖均是诱导愈伤组织形成的适宜外植体和应用于细胞悬浮培养的最佳细胞来源.     

土人参愈伤组织诱导及细胞悬浮培养研究

[目的]建立土人参愈伤组织的诱导、增殖继代培养及其细胞悬浮培养的技术体系。[方法]研究不同植物激素组合对叶片、茎段愈伤组织诱导的影响;采用液体振荡培养法测定叶片愈伤组织细胞悬浮生长曲线。[结果]叶片最易诱导产生愈伤组织,最佳诱导、增殖培养基为MS＋2,4-D1.0 mg/L＋NAA0.5 mg/L＋6-BA0.5 mg/L（pH5.8）。由叶片愈伤组织建立的细胞系生长呈＂S＂型曲线,最适继代周期为15 d。[结论]以叶片为外植体经愈伤诱导、增殖培养可建立良好的细胞悬浮系。     

海巴戟天愈伤组织诱导及细胞悬浮培养试验

以海巴戟天叶脉作为外植体,在B5 培养基上诱导出淡黄色、疏松愈伤组织,通过增殖后接种到液体培 养基中,建立细胞悬浮培养体系,并对影响细胞悬浮培养的培养基种类、接种量、pH 值、蔗糖含量等因素进行了研 究。结果表明院B5 + 1 mg/L 2,4-D + 0.1 mg/L 6-BA 能诱导出淡黄色、质地疏松的愈伤组织;较佳愈伤组织增殖培养 基为B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT;细胞在B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT 培养基中悬浮培养,接种量60 g/L（细 胞鲜重）、蔗糖4%、pH 值5.8、100 r/min、27益下暗培养,海巴戟天悬浮细胞比生长速率为0.0836 d-1,总蒽醌含量 367.8 mg/L,培养周期27~30 d。     

人参胚愈伤组织诱导和悬浮培养的研究

[目的]建立一种从人参胚诱导愈伤组织并进行悬浮培养的方法,考察这种悬浮细胞的生长和人参皂苷积累情况。[方法]以人参胚为外植体,在添加了2,4-D3mg/L、NAA2mg/L和6-BA0.5mg/L的MS培养基上诱导愈伤组织。选取经8次继代培养的松散的愈伤组织在含有同样激素的液体培养基中进行悬浮培养。继代悬浮培养5次后测定悬浮细胞生长曲线,用高效液相色谱（HPLC）技术分析细胞中所含的人参皂苷。[结果]有活性的人参胚愈伤组织的诱导率为100%。用这种愈伤组织建立的悬浮培养体系生物量在21d内可增加1.5倍,悬浮培养物至少含有6种人参皂苷,其中Rb1、Rg和Re的含量较高,分别为细胞干重的0.44%、0.35%和0.37%。[结论]由人参胚诱导的愈伤细胞进行悬浮培养比较容易,生长良好,含有较丰富的人参皂苷。     

日本厚朴愈伤组织诱导的研究

本试验以B5培养基为基本培养基,采用正交试验比较了不同外植体和激素配比对日本厚朴愈伤组织的诱导影响,同时研究了光培养和暗培养对愈伤组织诱导的影响,结果表明:日本厚朴愈伤组织诱导的最佳外植体是顶芽、最佳愈伤组织诱导培养基为B5+2,4-D 4.0 mg/L+NAA 1.0mg/L,最佳的培养方式为暗培养.     

黑莓愈伤组织细胞悬浮培养条件研究

为获得黑莓细胞悬浮培养的最佳条件,以黑莓品种Kiowa无菌苗叶片、叶柄产生的质地疏松的嫩黄色颗粒状愈伤组织为初始材料,考察了培养基种类、糖种类、蔗糖浓度、激素种类、2,4-D浓度、水解酪蛋白浓度对细胞悬浮培养效果的影响。结果表明:以MS为基础液体培养基、30 g/L蔗糖为碳源、附加1.0 mg/L2,4-D和200 mg/L水解酪蛋白处理愈伤组织,悬浮培养的效果最佳,可以获得最大生物量。     

丰花月季愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养

分别以丰花月季叶片、叶柄和茎段为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系。结果表明,丰花月季叶片和茎段是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是NAA 4 mg·L-1+2,4-D 1 mg.L-1+BA 1 mg.L-1;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.5×104～3.0×104个.mL-1时;继代培养4～5代时,可得到稳定的悬浮细胞系。     

非洲菊胚性愈伤组织悬浮培养方法建立及其诱变条件研究

以紫罗兰绿心、洋红黑心、绿心黄瓣、鹅黄黑心的花托和花梗，白色黑心的叶片为外植体，在pH值为5．8、蔗糖30g／L和琼脂8g／L的条件下诱导愈伤组织，筛选出的最佳愈伤组织诱导培养基配方是MS＋6B—A1．0mg／L＋NAA0．2mg／L＋2，4-D1．0mg／L诱导出的愈伤转到MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L。适合非洲菊固体和液体培养基上愈伤增长的配方是MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA0．2mg／L。20Cy的Co^60辐射剂量和0．1％（V／V）的EMS浓度是较适合的诱变剂量．可以作为半致死剂量进行下一步大批量愈伤组织的诱变处理，从中筛选耐寒或花色特异等突变体。     

胆木愈伤组织与悬浮细胞培养研究

通过组织培养技术,利用胆木（Nauclea officinalis）种子无菌实生苗的茎段、叶片、叶柄等进行愈伤组织的诱导及悬浮细胞的培养。结果如下：（1）以WPM为基本培养基,获得愈伤组织高诱导率的激素种类及浓度为①0.5 mg/L 2,4-D、②0.5～1.5 mg/L IBA＋（0.0,0.5 mg/L）6-BA,诱导率达到100%;（2）在外植体的差异上,茎段和叶片出现愈伤组织的时间较早、增殖系数最大,可达15倍;（3）在培养基1/2WPM＋0.5 mg/L2,4-D＋30 g/L蔗糖中,继代周期为14～17 d,胆木细胞悬浮培养增殖率可达30.16%。     

厚朴不同种源苗期生长模型的拟合

【目的】掌握厚朴不同种源苗期苗高、地径的生长规律及物候期参数和生长参数特征,为厚朴幼苗生产管理和优良种源筛选提供参考。【方法】对15个不同种源及2个种源区厚朴幼苗在苗期的生长状况进行连续观察,并用Logistic方程对其生长动态过程进行拟合,获得苗高、地径、物候期与生长特征参数。【结果】厚朴不同种源间苗高生长节律基本一致,速生期起止时间和持续时间存在较大差异,其中线性生长始期、线性生长末期和线性生长持续期最多分别相差21,22和18 d,线性生长量占总生长量的55%以上,该时期为幼苗生长的关键期;种源间幼苗地径的线性生长期、最大线性生长速率、线性生长速率均存在较大差异;苗高与线性生长始期、线性生长末期、最大线性生长速率、线性生长速率、线性生长量呈显著或极显著相关,地径与后三者及苗高呈极显著相关,线性生长始期和线性生长末期共同决定线性生长期和线性生长量。种源A区厚朴幼苗的苗高线性生长期比种源B区长15 d左右,种源A区厚朴幼苗的苗高和地径的最大线性生长速率、线性生长速率和线性生长量均高于种源B区。【结论】用Logistic方程可以拟合厚朴幼苗苗高和地径的生长动态,建议在幼苗线性生长期加强肥水管理,延长该生长期,促进线性生长量,提高线性生长量占总生长量的百分率。     

Study on Cell Suspension Culture of Floribunda Rose

Friable callus was induced when immature seeds of floribunda rose were inoculated on MS medium supplemented with 2,4-D 3.0 mg.L^-1. When transfered onto subculture media, friable callus developed into embryogenic callus, which was used to establish cell suspension lines. Cell suspensions had to be subcultured at a interval of 4-5 days at the first several culture cycles. The best subculturing cycle for the stable cell suspensions was 8-10 days. The best inoculum quantity was 1 mL PCV（Packed Cell Volume） per 40 mL culture fluid.     

苦瓜愈伤组织的诱导及悬浮培养体系的建立

以苦瓜子叶、上、下胚轴为外植体,在添加不同浓度激素组合的培养基上诱导和继代愈伤组织,比较愈伤组织的状态与生长情况,并对悬浮细胞培养条件进行了优化。结果表明,上下胚轴在添加2,4-D2.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1或NAA1.0mg·L-1+6-BA4.0mg·L-1的MS培养基上均可诱导出状态良好的愈伤组织,愈伤组织在添加2,4-D0.5mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1的继代培养基上能长势最好,添加30g·L-1蔗糖和3.0g·L-1活性炭的B5培养基有利于苦瓜悬浮细胞的快速增殖。     

红花玉兰大小孢子发生及雌雄配子体发育的研究

【目的】对红花玉兰(Magnolia wufengensis)大、小孢子发生及雌、雄配子体发育过程进行显微观察,探讨其自然状态下结籽率低的原因。【方法】于2012年5月红花玉兰花芽分化开始每月采花芽1次,直至次年开花,采用常规石蜡切片法制片,对红花玉兰大、小孢子发生及雌、雄配子体发育进行详细的细胞学观察。【结果】红花玉兰雌蕊成熟时倒生胚珠,双珠被,厚珠心,大孢子为单胞子发生型,成熟胚囊为7胞8核胚囊,蓼型胚囊发育方式。雄蕊花药四室,腺质型绒毡层,成熟花粉粒为二细胞型。【结论】红花玉兰大、小孢子发生以及雌、雄配子体发育过程中未见异常现象,因此该物种雌、雄蕊发育不是导致其濒危的因素。     

巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中ProL蛋白的表达纯化及性质分析

【目的】从巴戟天内生真菌Cytospora rhizophorae中克隆proL基因,异源表达ProL蛋白并研究其理化性质,为解析ProL在合成Cytorhizins类新骨架活性化合物途径中的生物学功能奠定基础。【方法】利用PCR技术从C. rhizophorae中克隆proL基因,通过同源重组的方法将proL基因片段插入到pET28a原核表达载体,在大肠埃希菌Escherichia coli中异源表达,使用尿素对ProL蛋白梯度复性,采用SDS-PAGE技术和质谱测序对ProL蛋白进行分析和鉴定,运用生物信息学方法对ProL蛋白的氨基酸序列相似性进行分析,推测其编码蛋白的结构和功能。【结果】克隆得到proL基因的编码序列,开放阅读框全长909 bp,编码303个氨基酸,ProL蛋白分子式为C1495H2320N424O444S13,相对分子质量为33 754.22,原子数为4 696,等电点为5.69,为酸性蛋白。ProL蛋白在大肠埃希菌中以包涵体的形式大量表达,尿素梯度复性获得了纯度为98.9%的ProL蛋白。生物信息学分析发现ProL氨基酸序列在已知蛋白中与Aspergillus ibericus XP025570169.1的酰胺水解酶2相似性最高,为59.40%,其三维结构模型中包含8个α-螺旋和8个β-折叠,保守氨基酸序列为207～216位。【结论】ProL蛋白属于酰胺水解酶超家族,预测其为一种新颖蛋白,该蛋白可能在生成高度氧化的二苯甲酮类化合物途径中起水解作用。     

不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响

目的 比较不同炮制去心法对巴戟天耐斯糖含量的影响。方法 采用HPLC-ELSD法,色谱柱为Welch AQ-C₁₈（250 mm×4.6 mm,5 μm）;流动相为甲醇-水（3：97）;柱温为25℃;流速为0.8 mL/min;进样量为10 μL;漂移管温度为40℃;低温雾化。结果 采用不同炮制去心法处理后,巴戟天中耐斯糖的含量高低为：润法 > 煮法 > 清蒸法 > 盐蒸法 > 泡后蒸法 > 泡法。结论 采用润法去心,巴戟天中耐斯糖损失最少。     

水稻细胞悬浮系及其单细胞培养的研究

以水稻的不同遗传型材料的幼穗为外植体诱导愈伤组织,通过继代培养,最终筛选出了来自于品系“１４５”的胚性愈伤组织．在附加１．５～２．０ｍｇ／ｌ２,４—Ｄ的ＮＭＢ固体培养基上继代７次后,转入同种液体培养基上进行悬浮继代培养,由此形成的悬浮系是由单细胞和小细胞团组成的．倒置显微镜下几乎观察不到管形细胞,细胞的成活率达９０％以上．未发现酵母抽提物对细胞悬浮培养具有促进作用．在液体培养基中附加６００ｍｇ／ｌ的肌醇能够大大提高愈伤组织的分散程度,从中分离出的单细胞经初步培养再生了愈伤组织．     

天女木兰种子蛋白双向电泳体系的建立

【目的】探索一套适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系,为研究其种子萌发过程中的蛋白表达差异奠定基础。【方法】比较蛋白的不同提取方法(酚提取法、三氯乙酸-丙酮-酚提取法、三氯乙酸-丙酮法和Tris-HCl法)、IPG胶条pH梯度(pH3～11NL、pH3～10和pH4～7)、裂解液中的尿素浓度(6,7,8,9mol/L)和分离胶浓度(10%和12.5%)等条件,对天女木兰种子蛋白双向电泳结果的影响,筛选适宜的双向电泳条件。【结果】以Tris-HCl法提取种子蛋白,在IPG胶条pH为4～7、裂解液中尿素浓度为9mol/L、分离胶浓度为12.5%的条件下,可以获得分辨率高、背景清晰、重复性好的天女木兰种子蛋白双向电泳图谱。【结论】建立了适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系。