采用PCR方法对我国蜱伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查

通过调查我国已有的4种蜱伯氏疏螺旋体的感染情况,以进一步阐明莱姆病在中国的分布与流行状况。本研究通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白A(OspA)基因片段的通用引物,获得1对特异性引物,优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法,其扩增片段大小为307 bp。该方法可检测出10 pg的阿氏疏螺旋体(Ba)、1 pg的伽氏疏螺旋体(Bg)和0.01 pg的狭义伯氏疏螺旋体(Bb)的3种不同基因型的伯氏疏螺旋体的OspA基因组DNA,表明其敏感性较好,适用于蜱感染伯氏疏螺旋体状况的调查。本研究从我国7个省采集到的667只蜱,进行伯氏疏螺旋体感染的流行病学调查,分类鉴定表明这些蜱分属革蜱属、血蜱属、牛蜱属和扇头蜱属。PCR检测所获数据表明它们的感染率分别为4%(10/264)、6%(11/137)、31.4%(59/185)和31%     

新的人畜共患病——莱姆病及其新种病原体——波氏疏螺旋体

<正> 瑞典医生Arvid Afzelius报告了慢性游走性红斑(Erythema chronicum migrans)病(Acta Derm.Venereol.,1921,2:120～125),病在蜱叮咬之后发生。以后,欧洲续有此病报导,证明蓖子硬蜱是疾     

含伯氏疏螺旋体OspA、OspC蛋白VLPs的构建及鉴定

莱姆病是一种经蜱传播的人兽共患病,随着人们经济的发展,伴侣动物的不断出现增加了人与动物经蜱传播莱姆病的风险,而当前并未有治疗莱姆病的有效方法,因此研制莱姆病疫苗成为一大热点。为了更好地预防莱姆病的发生,本研究通过替换新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶蛋白(haemagglutinin-neuraminidase protein,HN)胞外域的方式,利用昆虫杆状病毒表达系统分别构建了含伯氏疏螺旋体候选抗原表位外膜蛋白A(outer surface protein A,OspA)、外膜蛋白C(outer surface protein C,OspC)的新城疫病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),形成了含有伯氏疏螺旋体抗原表位的新城疫病毒样颗粒,为之后研制莱姆病疫苗提供了新思路、新想法。     

蜱传性疾病--莱姆病螺旋体研究进展

莱姆病是一种蜱传性人兽共患病,在我国北方各省广泛流行,其病原体为伯氏疏螺旋体。莱姆病可使皮肤、心脏、关节和神经系统等多种组织器官受损。本文综述了莱姆病螺旋体的形态、种下分类、生化特征、传播媒介和贮存宿主等方面的研究进展"     

吉林省四平市周边地区莱姆病流行情况调查及优势菌株外膜蛋白C的表达

为了解吉林省四平市周边地区伯氏疏螺旋体流行情况,本试验于2017年5-7月分别采集四平市周边地区蜱虫样品共25份。通过筛选扩增伯氏疏螺旋体外膜蛋白C(OspC)基因片段的通用引物、优化反应条件后建立用于检测蜱体内伯氏疏螺旋体的PCR方法。从25份样品中分离到8份阳性样品(阳性率约为32%),经过测序比对发现其基因型均为Borrelia burgdorferi;并以分离到的Borrelia burgdorferi DNA为模板,PCR扩增OspC基因,构建重组质粒pET-30a-OspC,以IPTG诱导蛋白表达,为建立伯氏疏螺旋体ELISA检测方法奠定了基础。     

伯氏疏螺旋体鞭毛基因的克隆及序列分析

根据已有的伯氏疏螺旋体鞭毛基因序列,设计两条特异性引物,PCR扩增该基因,并获得基因全长序列,大小为1 008 bp。采用生物信息学技术,对所获得的伯氏疏螺旋体鞭毛基因序列和拟编码的蛋白序列进行分析,发现其编码336个氨基酸,编码蛋白的理论分子量为35.7 ku,等电点为5.53,具有多个抗原表位序列,其中编码主要抗原位点的片段位于中央区段,该中央区段还具有伯氏疏螺旋体种的保守性。伯氏疏螺旋体鞭毛基因中央区段编码蛋白既是主要的抗原位点又具有保守性,理论上可作为莱姆病的诊断抗原。本文为莱姆病的实验室诊断奠定基础。     

荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的研究

为建立一个荧光定量PCR检测硬蜱体内莱姆病螺旋体的方法,根据GenBank登录的莱姆病螺旋体鞭毛蛋白FlaB序列,应用生物学软件进行序列比对,在保守的C段区设计与筛选特异引物和TaqMan探针。对荧光定量PCR反应体系与条件进行优化,验证方法的特异性、敏感性,并通过对感染螺旋体的蜱样本的检测,评价该方法的实用价值。结果显示,自然感染莱姆病螺旋体的35份蜱标本检测阳性符合率100%,正常蜱20份标本的检测结果均为阴性。该方法对牛巴贝斯原虫、泰勒原虫、边缘无浆体、金龟子绿僵菌、大肠杆菌等蜱体常见病原微生物所抽提的DNA的检测均呈阴性。荧光定量PCR方法检测质粒的灵敏度可达1×102拷贝/μL。TaqMan荧光定量PCR方法检测硬蜱体内莱姆病螺旋体具有较好的敏感性和特异性,可适于莱姆病的流行病学调查和监控。     

莱姆病螺旋体感染对蜱的4个功能基因的转录影响

为探索蜱及蜱传病的防控新策略,了解病原与媒介硬蜱相互作用的分子机制,本研究以莱姆病病原伯氏疏螺旋体感染后对长角血蜱4个功能基因的转录影响进行了研究。将不同浓度梯度的伯氏疏螺旋体显微注射到长角血蜱体内,分不同的时间段提取蜱的总RNA,反转录成cDNA后,用实时荧光定量PCR检测蜱基因的表达水平。结果显示:伯氏疏螺旋体感染对蜱半胱氨酸蛋白酶抑制剂1(HLcyst-1)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂3(HLcyst-3)、卵泡抑素(FRP)、凝血酶抑制剂(Hemalin)4个功能基因的转录均产生了显著影响,但存在时间和剂量相关性,感染后第4天显著诱导了长角血蜱HLcyst-1基因的表达,抑制了Hemalin基因表达。     

锡林郭勒盟草原莱姆病疫源地调查

本项研究于2000年5月—2001年5月从内蒙古锡林郭勒盟地区,不同草原景现带牛、羊体表和草地采集草原血蝉1800只,用直接荧光抗体法检查蜱带菌情况,带菌率为7.5%(6/80)。晴视野显微镜检查蜱带菌情况,带菌率为2%（2/100）;用间接荧光法进行血清流行病学调查,结果证实,调查点的牛和野鼠均存在莱姆病螺旋体感染,其感染率分别为10%和20%,都高于当地人群平均感染率（7.09%),上述研究证实内蒙古锡林郭勒盟地区人畜及野生动物均有莱姆病螺旋体感染。     

莱姆病诊断技术研究进展

莱姆病是一种经硬蜱传播的新发人畜共患病,可引起人类的慢性游走性红斑及心脏、神经、关节等多系统受损的疾病,造成病人不同程度的活动障碍和肢体瘫痪。该病在世界范围内广泛分布,我国许多地区是该病的自然疫源地。因此,莱姆病越来越引起人们的重视。伯氏疏螺旋体是引起莱姆病的病原体,因其培养周期长、抗原结构复杂给莱姆病的诊断带来了一定的困难。本文对莱姆病病原体的直接检测、免疫学检测、分子生物学检测和一些新的诊断技术进行了概述。     

Diagnosis of Borrelia‐associated uveitis in two horses

Borrelia burgdorferi, the etiologic agent of Lyme disease is a tick born spirochetal infection. Clinical signs of Lyme borreliosis are uncommon in horses, but when present they are often vague and nonspecific. In horses, Lyme borreliosis has been implicated in musculoskeletal, neurological, reproductive, and ocular disorders, including uveitis, but definitive diagnosis can be challenging as the causative agent is rarely isolated and serologic tests can be unreliable and do not confirm active disease. Here, we report two cases of equine uveitis associated with B. burgdorferi based on the identification of spirochetes within ocular fluids and confirmed with PCR testing. The two cases illustrate some of the challenges encountered in the recognition and diagnosis of equine Lyme borreliosis. Although only one of many possible causes of equine uveitis, Lyme disease should be considered a differential diagnosis, especially in endemic areas. Given the possibility for false negative results of serum tests during uveitis associated with B. burgdorferi and the failure of such tests to confirm active infection, a combination of cytologic assessment, antibody, and/or PCR testing of ocular fluids may be worthwhile if the clinical suspicion for Lyme uveitis is high.     

伯氏疏螺旋体TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法的建立及对新疆地区蜱的检测

为建立一种TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR方法,来快速、特异地检测伯氏疏螺旋体,根据GenBank发表的伯氏疏螺旋体16SrRNA序列,应用分子生物学软件进行比对,选取保守序列设计特异性引物及TaqMan-MGB探针,并优化荧光定量PCR反应体系及条件,分别对大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体进行扩增;构建伯氏疏螺旋体标准株16SrRNA基因片段阳性质粒,10倍系列稀释后进行real-time PCR扩增,测定该方法的敏感性。结果可见:仅伯氏疏螺旋体出现阳性扩增,而大肠杆菌、沙门氏菌及钩端螺旋体扩增均为阴性;该方法对阳性质粒的检测限约为100 copies/μL。应用该方法对新疆地区的100份蜱DNA样本进行检测,发现7份为伯氏疏螺旋体阳性。结果表明,本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光定量PCR方法具有较高的特异性及良好的敏感性,为今后伯氏疏螺旋体的快速诊断及流行病学调查提供了技术支撑。