两种蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较

为验证昆明海关检验检疫技术中心等单位联合研发的蓝舌病病毒B-ELISA抗体检测试剂盒(YN BTVB-ELISA)的临床适用性,将YN BTV B-ELISA检测试剂盒与法国ID.VET公司研制的蓝舌病病毒ELISA抗体检测试剂盒(ID.VET C-ELISA)进行比对检测试验。本试验对1 278份牛羊血清进行比对检测,另外对1份已知背景的阳性血清倍比稀释后进行检测,比较两种试剂盒的敏感性。结果显示:YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性分别是99.92%、99.63%、100%;将两者一致性用Kappa值表示,Kappa=0. 998;YN BTV B-ELISA、ID.VET C-ELISA检测阳性血清效价的最低稀释倍数分别是1:128、1:16。试验表明,YN BTV B-ELISA检测试剂盒与ID.VET C-ELISA检测试剂盒的符合率、相对敏感性、相对特异性均较高,并且YN BTV B-ELISA检测试剂盒敏感性更高,在蓝舌病病毒抗体检测中具有良好的实用价值。     

基于口蹄疫病毒非结构蛋白3AB/2C的ELISA鉴别检测试剂盒的研制与应用

基于口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3AB/2C,研制快速鉴别口蹄疫自然感染和疫苗接种的ELISA检测试剂盒。诱导表达3AB/2C蛋白,His亲和层析纯化目的蛋白;以纯化的3AB/2C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA方法,优化ELISA反应条件;标准化ELISA操作规程和试剂盒组分,组装ELISA试剂盒,进行特异性、敏感性、符合率、重复性、血清交叉反应、保存期等性能评价;分离临床牛血清进行应用性检测,评价ELISA试剂盒适用性。结果获得了大小约51 ku可溶性表达3AB/2C蛋白,亲和层析纯化后纯度可达90%以上;确定最适抗原包被浓度为3.25μg/m L,血清稀释度1∶80,封闭液为2%乳清蛋白,封闭条件为37℃1 h 4℃10 h;试剂盒敏感性97.5%、特异性98.3%,批内、批间变异系数分别为3.40%~6.71%和5.20%~8.44%;与3种商品化试剂盒符合率分别为98.90%、98.02%和96.72%;试剂盒4℃条件下保存期可达12个月;1 457份临床样品检测,FMDV感染阳性率6.41%~30.35%。本研究研制的鉴别ELISA试剂盒检测结果可靠、稳定性好,能有效鉴别FMDV自然感染和疫苗免疫,可为FMD综合防控提供技术支撑。     

3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较

为比较3种抗牛支原体(M.bovis)血清抗体的ELISA试剂盒检测效果,本实验应用3种检测M.bovis血清抗体ELISA诊断试剂盒对38份阳性样品(自然感染19份,人工感染18份)和37份阴性样品进行检测.结果表明:本实验室制备的HVRI试剂盒与商品化试剂盒Kit 1的检测结果和综合检测结果符合率分别达到92%和96%;而商品化试剂盒Kit 2的检测结果与综合检测结果符合率仅为74.67%.一致性检验结果显示:HVRI试剂盒与Kit 1的一致性较高;Kit 2与HVRI试剂盒、Kit 2与Kit 1有中度的一致性.此外,3种试剂盒对牛传染性胸膜肺炎国际标准血清(PS2)的检测结果显示HVRI试剂盒和Kit 1均为为阴性,Kit 2为阳性.因此,HVRI试剂盒与Kit 1更适于M.bovis检测和开展流行病学调查.     

4种狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的评价

为评价国产狂犬病病毒ELISA抗体检测试剂盒的性能,选择4种国产品牌ELISA抗体检测试剂盒,分别检测463份已用荧光抗体病毒中和试验（FAVN）测知狂犬病病毒抗体效价的犬血清,用Kappa检验和配对卡方检验评价ELISA试剂盒与FAVN检测结果的一致性和差异性,计算ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、符合率和重复性等,并比较4种试剂盒的使用范围、样品稀释倍数等参数。结果显示：经Kappa检验,4种试剂盒与FAVN一致性均为弱;经配对卡方检验,A、B试剂盒与FAVN检测结果的差异不显著（P> 0.05）,而C、D试剂盒差异显著（P <0.05）。诊断敏感性,D试剂盒最高,B试剂盒最低;4种试剂盒诊断特异性均较低,为29.5%～57.7%;各试剂盒符合率相当,为71.3%～72.8%。综合敏感性、特异性、重复性等考量因素,得出C试剂盒更能满足免疫后抗体检测需求,A试剂盒也较好,两者可作为候选试剂盒。结果表明,4种国产狂犬病病毒ELISA试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、批间稳定性等性能需进一步提高,以满足基层免疫抗体监测需求。     

两种ELISA试剂盒与血清中和试验检测牛赤羽病的比较

为比较两种商品化赤羽病抗体ELISA试剂盒的敏感性和特异性,以及ELISA和微量血清中和试验(SNT)的符合率,采用两种ELISA试剂盒和血清中和试验,对690份澳大利亚纯种荷斯坦奶牛血清进行牛赤羽病检测。试验结果显示:法国某公司生产的赤羽病ELISA试剂盒敏感性为93.42%,特异性为81.23%,与SNT间的Kappa值为0.615,为高度符合;日本某公司生产的赤羽病ELISA试剂盒敏感性为39.47%,特异性为96.1%,与SNT间的Kappa值为0.427,为中度符合。比较结果表明:日本某公司生产的试剂盒敏感性较低,容易漏检,不适合用于牛赤羽病初筛;在出入境检疫中,可以采用高通量、半自动化、敏感性高的ELISA方法,对血清样本进行筛选,再采用特异性强的SNT试验进行辅助验证。     

四种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒检测猪血清样本的质量评估

[目的]对4种口蹄疫病毒非结构蛋白抗体ELISA试剂盒进行质量评估。[方法]用4种商品化的口蹄疫非结构蛋白抗体ELISA检测试剂盒,对非免疫无疫、免疫健康、免疫感染和非免疫人工感染4种类型猪血清样本进行检测,分析试剂盒的诊断敏感性、诊断特异性、分析敏感性、分析特异性及重复性。[结果]4种试剂盒的诊断敏感性在76.8%~94.4%之间,诊断特异性在97.7%~100%之间,分析敏感性和分析特异性较好。4种检测试剂盒与4种猪常感染疾病的阳性血清不发生反应。试剂盒的批间重复性为(10.545±6.845)%~(37.577±28.626)%;批内重复性为(9.037±6.075)%~(37.601±27.027)%。[结论 ]在实际应用中,需根据检测目的不同,选取相应的试剂盒。     

一致性检验比较牛口蹄疫病毒抗体LBE检测试剂盒

用660份牛血清比较牛口蹄疫病毒O型、A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒检测结果的一致性,并用u检验排除抽样误差的影响。结果表明:待检血清最终稀释度数为1∶64时O型试剂盒联合检出523份口蹄疫抗体阳性和102份阴性,符合率为94.70%,结果一致性为极强(Kappa值=0.82);待检血清最终稀释度数为1∶128时O型试剂盒联合检出476份口蹄疫抗体阳性和125份阴性,符合率91.06%,结果为高度一致(Kappa值=0.75);血清最终稀释度数为164时A型试剂盒联合检出498份口蹄疫抗体阳性和120份阴性,符合率为93.64%,结果一致性为极强(Kappa值=0.81),血清最终稀释度数为1∶28时A型试剂盒联合检出354份口蹄疫抗体阳性和233份阴性,符合率为88.94%,结果为高度一致(Kappa值=0.77)。在不同包被方式下,LBE试剂盒检测待检血清牛口蹄疫病毒抗体结果一致性较好。兽医实验室可应用一致性检验,结合本单位人力、财力和物力等条件,选择适宜的牛口蹄疫病毒抗体检测试剂盒。     

马疱疹病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

为建立一种检测马疱疹病毒抗体间接ELISA方法,采用纯化后的马疱疹病毒1型和马疱疹病毒4型g D蛋白作为抗原,经方阵滴定法优化ELISA反应条件,并对该方法进行特异性和重复性试验。结果显示,使用此方法检测其他马常见病毒病阳性血清均为阴性;组内、组间变异系数均小于10%。采用建立的方法与国外商品化的马疱疹病毒诊断试剂盒对送检的300份马血清进行检测比较,两者符合率为95%。结果表明,本次试验建立的间接ELISA方法可以用来检测马疱疹病毒抗体,为马鼻肺炎的防控工作提供技术支撑。     

牛传染性胸膜肺炎抗体间接ELISA检测方法的建立

旨在建立一种检测牛传染性胸膜肺炎（CBPP）血清抗体的间接ELISA方法,用于该病的监测。利用生物信息学软件对CBPP的病原丝状支原体丝状亚种国内分离株Ben-1株的全基因组进行分析,选取脂蛋白rP0308作为包被抗原,通过一系列反应条件的优化,建立了基于rP0308蛋白的间接ELISA抗体检测方法,并对其性能进行评价。结果显示该方法的敏感性为92%,特异性为96%,与牛支原体、牛鼻支原体、无乳支原体、口蹄疫、牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎和牛结核分枝杆菌等阳性血清均不发生交叉反应,批内变异系数在2.41%~6.03%,批间变异系数在2.94%~6.59%,重复性良好。利用本方法和商品化的cELISA试剂盒分别对实验室保存的1 648份临床样品进行检测,该方法与商品化试剂盒的阴性符合率为89.1%,阳性符合率为79.2%,总符合率为88.7%。以上研究结果表明,本研究建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,具有良好的临床应用前景。     

牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法的建立

根据牛口蹄疫O型3个拓扑型VP1序列设计3条合成肽,以此为包被抗原建立牛口蹄疫O型合成肽VP1结构蛋白ELISA抗体检测方法,并对该方法敏感性、特异性和重复性进行验证。结果显示,该方法敏感性为96.7%,特异性为99.1%,批内和批间变异系数分别为2.1%~9.8%和3.5%~10.7%。与2种商品化试剂盒比较,符合率分别为93.5%和85.9%。结果表明,该方法敏感性好、特异性强、稳定性高,可用于牛口蹄疫O型抗体水平检测。